本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素對(duì)O-2A祖細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

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【摘要】：O-2A (oligodendrocytes-type2astrocytes)祖細(xì)胞為雙潛能細(xì)胞,可分化成少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocytes, OLs)和2型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type2astrocytes, T2As)。分離純化O-2A祖細(xì)胞,有助于深入了解其增殖與分化的細(xì)胞生物學(xué)特性,也可用于細(xì)胞移植治療脫髓鞘疾病以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。目前主要通過恒溫振蕩與差速貼壁法分離純化O-2A祖細(xì)胞,但在收集過程中,無法分離那些混合存在于1型星形膠質(zhì)細(xì)胞(typel astrocytes, T1As)之間的O-2A祖細(xì)胞,隨著TIAs的生長和消化傳代而漸漸消失。本實(shí)驗(yàn)采用促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin, EPO)處理混存于T1As之間的O-2A祖細(xì)胞,檢測(cè)分析其生物學(xué)特性。 目的：研究EPO對(duì)混存于TIAs之間的O-2A祖細(xì)胞的增殖作用,探尋有效利用這些O-2A祖細(xì)胞的方法；觀察EPO處理的O-2A祖細(xì)胞在增殖與分化等生物學(xué)特性的變化,為其是否能作為細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的細(xì)胞來源提供依據(jù)。 方法：(1)取新生大鼠大腦皮層進(jìn)行原代混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),用恒溫振蕩與差速貼壁的方法分離和純化O-2A祖細(xì)胞。(2)對(duì)純化收集O-2A祖細(xì)胞后混存于T1As之間的O-2A祖細(xì)胞,用含EPO (10U/ml)的DMEM/F12-10%NBCS培養(yǎng),觀察O-2A祖細(xì)胞的生長狀態(tài)。(3)分別用三種條件培養(yǎng)基[①T1As條件培養(yǎng)基(A1CM);②EPO處理的TIAs條件培養(yǎng)基(EA1CM);③EPO處理上述TIAs之間有O-2A祖細(xì)胞混存的條件培養(yǎng)基(EACM)]培養(yǎng)O-2A祖細(xì)胞48h,MTT法檢測(cè)各種條件培養(yǎng)基對(duì)O-2A祖細(xì)胞增殖活性的影響；將O-2A祖細(xì)胞加入未長滿的TIAs中,探討對(duì)O-2A祖細(xì)胞增殖的影響。(4)純化經(jīng)EPO處理后大量增殖的O-2A祖細(xì)胞,將其命名為EO-2A(erythropoietin-treated O-2A)祖細(xì)胞,免疫熒光染色法檢測(cè)EO-2A祖細(xì)胞及其分化細(xì)胞的抗原表型；根據(jù)EO-2A祖細(xì)胞在增殖與分化培養(yǎng)基下的生長情況,繪制細(xì)胞生長曲線并統(tǒng)計(jì)分析所分化細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。 結(jié)果：(1)以EPO處理3-5天后,混存于TIAs之間的O-2A祖細(xì)胞大量增殖,細(xì)胞折光性強(qiáng)。(2)A1CM對(duì)O-2A祖細(xì)胞具有增殖作用，，EPO、EA1CM和EACM對(duì)O-2A祖細(xì)胞增殖無影響；經(jīng)EPO處理72h后，與T1As接觸的O-2A祖細(xì)胞大量增殖不分化，而與T1As不接觸的O-2A祖細(xì)胞則分化成T2As。(3)與O-2A祖細(xì)胞相比，EO-2A祖細(xì)胞開始增殖與分化的時(shí)間延遲，分化成T2As的比率高，且細(xì)胞的突起更長；免疫熒光染色結(jié)果顯示EO-2A祖細(xì)胞呈NG2和A2B5雙陽性，其分化成熟的T2As呈GFAP和A2B5雙陽性，其分化成熟的OLs呈GalC和MBP雙陽性。 結(jié)論：上述結(jié)果表明，EPO能夠使混存于T1As之間的O-2A祖細(xì)胞大量增殖，且這種增殖作用依賴于T1As與O-2A祖細(xì)胞的接觸。與正常培養(yǎng)的O-2A祖細(xì)胞相比，EO-2A祖細(xì)胞的細(xì)胞突起更長，且更易于誘導(dǎo)分化為T2As。為其作為細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的細(xì)胞來源提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：O-2A祖細(xì)胞 促紅細(xì)胞生成素 星形膠質(zhì)細(xì)胞 少突膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R338
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 參考文獻(xiàn)10-13
• 第一部分 促紅細(xì)胞生成素對(duì) O-2A 祖細(xì)胞增殖的影響13-30
• 材料和方法13-19
• 結(jié)果19-24
• 討論24-26
• 參考文獻(xiàn)26-30
• 第二部分 EO-2A、O-2A 祖細(xì)胞的生物學(xué)特性的比較30-40
• 材料和方法30-32
• 結(jié)果32-35
• 討論35-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 結(jié)論40-41
• 綜述41-54
• 參考文獻(xiàn)45-54
• 縮略詞表54-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表和待發(fā)表論文55-56
• 致謝56-57

【參考文獻(xiàn)】

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王凌云;牛建欽;汪云;燕增奎;肖嵐;;星形膠質(zhì)細(xì)胞間縫隙連接調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖分化的作用研究[A];中國解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

本文編號(hào)：1121648