發(fā)布時(shí)間：2017-10-31 07:17

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲主要表面抗原SAG1和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白14-3-3的DNA疫苗免疫小鼠誘導(dǎo)的保護(hù)性研究

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【摘要】：剛地弓形蟲是一種機(jī)會(huì)性致病原蟲,可引起人畜共患的弓形蟲病。在一些國(guó)家,尤其是熱帶國(guó)家,弓形蟲病(Toxoplasmosis)一直是重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題,給人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。全球感染人數(shù)大約在10-20億,人感染弓形蟲后通常表現(xiàn)為隱性感染,普通隱性感染也可引起強(qiáng)迫癥,精神分裂癥,抑郁癥,阿爾茨海默病,帕金森氏病等。弓形蟲DNA疫苗可有效預(yù)防和控制弓形蟲病的傳播,有利于人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)研究表明,弓形蟲14-3-3蛋白具有免疫原性和抗原性,是一個(gè)有潛力的疫苗候選抗原。在本次研究中,我們?cè)u(píng)價(jià)了弓形蟲SAG1和14-3-3的單基因和復(fù)合基因疫苗在小鼠體內(nèi)引起的免疫效應(yīng)。 目的：在本次研究中我們構(gòu)建了單基因和復(fù)合基因疫苗,分別接種BALB/c小鼠,觀察免疫效應(yīng)。研究的主要目的是評(píng)估弓形蟲14-3-3蛋白作為疫苗候選抗原的可能性、驗(yàn)證弓形蟲SAG1蛋白在小鼠體內(nèi)引起的免疫效應(yīng)以及評(píng)價(jià)單基因和復(fù)合基因疫苗的免疫效應(yīng)的差異。 方法：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,BALB/c小鼠被隨機(jī)分成5組,包括三組實(shí)驗(yàn)組(pSAG1、p14-3-3和pSAG1/14-3-3):和兩組對(duì)照組(PBS和pBudCE4.1).所有小鼠經(jīng)肌肉注射共免疫接種質(zhì)粒三次。小鼠血清抗體和細(xì)胞因子的水平使用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行測(cè)定。末次免疫后兩周,小鼠經(jīng)腹腔注射含弓形蟲速殖子的懸液(1×104/只)。每天觀察并記錄小鼠的生存時(shí)間。 結(jié)果：與對(duì)照組相比,所有實(shí)驗(yàn)組小鼠(pSAG1,p14-3-3和pSAG1/14-3-3)體內(nèi)產(chǎn)生的免疫反應(yīng)類型主要以Thl型為主,產(chǎn)生較高水平的IgG2a和IFN-y,并且隨著免疫次數(shù)的增加水平逐漸升高(P0.05)。在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中,IL-4和IL-10水平較低,且兩組之間沒(méi)有差異(P0.05)。在弓形蟲感染攻擊實(shí)驗(yàn)中可以觀察到實(shí)驗(yàn)組小鼠的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng),而對(duì)照組小鼠在7天內(nèi)全部死亡。在弓形蟲速殖子攻擊感染后的第18天,所有小鼠均死亡,表明本次實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的DNA疫苗在小鼠體內(nèi)只能提供部分保護(hù),不能完全抵抗弓形蟲急性感染。與單基因疫苗(pSAG1和p14-3-3)相比,復(fù)合基因疫苗(pSAG1/14-3-3)在小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生更強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng),小鼠的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.05)。 結(jié)論：弓形蟲14-3-3蛋白在小鼠體內(nèi)能誘導(dǎo)有效的免疫反應(yīng),是一個(gè)好的疫苗候選抗原。同時(shí),研究證實(shí)弓形蟲SAG1蛋白具有較好的免疫原性,是構(gòu)建復(fù)合基因疫苗的首選抗原。從我們的研究結(jié)果也可以看出復(fù)合基因疫苗能產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫效應(yīng)和延長(zhǎng)小鼠的生存時(shí)間,優(yōu)于單基因疫苗。
【關(guān)鍵詞】：剛地弓形蟲 SAG1 14-3-3 DNA疫苗 免疫 BALB/c小鼠
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R382.5;R392
【目錄】：

• CONTENTS5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-15
• 第一部分 弓形蟲SAG1和14-3-3的DNA疫苗的構(gòu)建及鑒定15-53
• 一、材料15-20
• 二、方法20-42
• 三、結(jié)果42-51
• 四、討論51-53
• 第二部分 弓形蟲SAG1和14-3-3的DNA疫苗對(duì)小鼠的免疫效應(yīng)研究53-65
• 一、材料53-54
• 二、方法54-58
• 三、結(jié)果58-62
• 四、討論62-65
• 附圖65-67
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 致謝71-72
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論著72-73
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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本文編號(hào)：1121341