本文關(guān)鍵詞：人臍帶Wharton’s jelly間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及基本生物學(xué)特性的研究

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【摘要】：干細(xì)胞是單個(gè)或成群存在的細(xì)胞,具有自我更新及分化潛能。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是源自中胚層的間充質(zhì)、出現(xiàn)在已分化或特化組織中的干細(xì)胞。在適當(dāng)?shù)臈l件下,MSCs可具有定向分化為中胚層,外胚層及內(nèi)胚層來(lái)源細(xì)胞的潛能,包括脂肪樣細(xì)胞、骨樣細(xì)胞、軟骨樣細(xì)胞、內(nèi)皮樣細(xì)胞、肌樣細(xì)胞、肝樣細(xì)胞、胰島素分泌樣細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞等,其廣泛參與組織器官的損傷修復(fù)過(guò)程,是近年的研究熱點(diǎn)。已有研究表明,在人臍帶Wharton's jelly中存在豐富的MSCs,但目前尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)體系及“金標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)記物”。本研究旨在建立一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效的人臍帶Wharton's jelly源性間充質(zhì)干細(xì)胞(Wharton's jelly mesenchymal stem cells, WJ-MSCs)的分離培養(yǎng)擴(kuò)增體系,探討其基本的生物學(xué)特性,為人臍帶WJ-MSCs的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供技術(shù)平臺(tái)及奠定理論基礎(chǔ),為再生醫(yī)學(xué)提供種子細(xì)胞源。 目的：建立人臍帶WJ-MSCs的組織塊培養(yǎng)法,觀察人臍帶WJ-MSCs的細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特點(diǎn),檢測(cè)膜表面標(biāo)志物及分化潛能,探討其基本的生物學(xué)特性。 方法：無(wú)菌條件下取健康足月剖腹產(chǎn)的臍帶組織,在清除血管及外膜后,將Wharton's jelly用PBS清洗后剪成0.5～1.0mm3大小,并種植在培養(yǎng)瓶中,用含10%的FBS的低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),0.125%胰酶消化傳代。在倒置顯微鏡下觀察Wharton's jelly的形態(tài)特點(diǎn)和生長(zhǎng)特征,免疫組化檢測(cè)波形蛋白(Vimentin)的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WJ-MSCs的細(xì)胞免疫表型；用含地塞米松、胰島素、吲哚美辛、3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤(IBMX)的培養(yǎng)液誘導(dǎo)其分化為脂肪樣細(xì)胞,并用油紅O染色鑒定。以含IBMX和Forskolin的培養(yǎng)液誘導(dǎo)WJ-MSCs分化為神經(jīng)樣細(xì)胞,對(duì)誘導(dǎo)6.5小時(shí)的細(xì)胞用免疫組化檢測(cè)巢蛋白(Nesting膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、神經(jīng)絲(neurofilament, NF)及神經(jīng)元烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)的表達(dá)。 結(jié)果：培養(yǎng)6天左右,在倒置相差顯微鏡下觀察,有細(xì)胞從組織塊邊緣爬出,細(xì)胞為呈長(zhǎng)梭形、短棒狀或扁平樣成纖維樣細(xì)胞。10天左右,細(xì)胞為散在克隆團(tuán)分布。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)速度加快,呈旋渦狀、放射狀分布。凍存復(fù)蘇后,細(xì)胞仍保持強(qiáng)的增殖能力。P3細(xì)胞第1-2d為潛伏期,第3d數(shù)量開(kāi)始增長(zhǎng),第4-6d為細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。Vimentin在WJ-MSCs為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá), WJ-MSCs表達(dá)CD44. CD90、CD105、CD34及CD45的陽(yáng)性率分別為：100%、100%、99.7%、0.5%、0.1%。經(jīng)成脂定向誘導(dǎo)后,WJ-MSCs胞體變圓,胞質(zhì)出現(xiàn)脂滴,油紅O染色為陽(yáng)性。在IBMX聯(lián)合Forskolin誘導(dǎo)WJ-MSCs定向分化6.5小時(shí),細(xì)胞胞體收縮,有絲狀突起,誘導(dǎo)后細(xì)胞有GFAP和NF表達(dá),而Nestin和NSE為陰性。 結(jié)論：組織塊培養(yǎng)法可以從人臍帶Wharton's jelly中獲取WJ-MSCs,其為成纖維樣細(xì)胞,表達(dá)MSCs的膜表面標(biāo)記物,并具有分化潛能,是理想的細(xì)胞移植和組織工程種子細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 臍帶 Wharton's jelly 分離 培養(yǎng) 誘導(dǎo) 分化
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 1.材料和方法11-17
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-22
• 3.討論22-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-30
• 綜述30-33
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章33-34
• 致謝34

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 聶鑫;楊茂進(jìn);柴鑒深;張勇杰;金巖;;外胚間充質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)膠質(zhì)/雪旺細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及在BAM生物材料的存活研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年14期

2 何紅燕;崔冰琳;馮學(xué)永;肖平;林曉波;蔣學(xué)武;羅敏潔;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變[J];國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志;2006年06期

3 梁彥濤;張敬軍;;3-異丁基-1-甲基黃嘌呤對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷和膠質(zhì)纖維酸性蛋白的影響[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2010年01期

4 馬桂霞;何紅燕;羅敏潔;黃天華;肖升平;崔冰琳;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島β細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2008年08期

5 巴云濤;關(guān)方霞;胡祥;楊波;杜英;張?zhí)煜?田毅;喬曉俊;王成春;谷晨熙;雷寧?kù)o;王曉薇;;人臍帶Wharton’s jelly源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)中堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年19期

6 鄧蔓菁,金巖,史俊南,聶鑫,呂紅兵,劉源,趙宇;Forskolin體外誘導(dǎo)Balb/c小鼠下頜外胚間充質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2002年12期

7 李鐸;石釧;洪敬欣;孟恒星;韓俊領(lǐng);張宇光;;組織塊法分離人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2011年24期

8 項(xiàng)鵬,夏文杰,張麗蓉,陳振光,張秀明,李艷,李樹(shù)濃;胞內(nèi)cAMP濃度的增加可誘導(dǎo)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞[J];中國(guó)病理生理雜志;2002年11期

9 王玉;張莉;彭江;趙斌;陳繼鳳;趙U，

本文編號(hào)：1115862