本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲(chóng)果糖二磷酸醛縮酶的重組表達(dá)及其在血吸蟲(chóng)生活史各階段的表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 日本血吸蟲(chóng) 果糖二磷酸醛縮酶 克隆 表達(dá) 純化

【摘要】：目的在大腸桿菌中原核表達(dá)、純化日本血吸蟲(chóng)果糖二磷酸醛縮酶(rSjFBPA),觀察其在血吸蟲(chóng)生活史各階段的表達(dá)。方法以日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)c DNA為模板擴(kuò)增rSjFBPA基因,克隆至pET28a(+)質(zhì)粒后,再轉(zhuǎn)化入E.coli BL21。含重組質(zhì)粒的菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,采用SDS-PAGE和Western blotting分析鑒定重組蛋白rSjFBPA是否表達(dá),用層析法純化rSjFBPA并用SDS-PAGE鑒定其純度。同時(shí),用RT-PCR方法分析SjFBPA在血吸蟲(chóng)尾蚴、童蟲(chóng)、成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵各階段的表達(dá)情況。結(jié)果經(jīng)PCR擴(kuò)增出目的基因,含目的基因的TA克隆質(zhì)粒經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定,證明插入片段與預(yù)期目的基因序列相符。Western blotting結(jié)果顯示,表達(dá)后的重組蛋白可與His-tag單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。經(jīng)鎳親和層析法制備了純化的重組SjFBPA蛋白,純化重組蛋白濃度達(dá)4 mg/ml。RT-PCR結(jié)果顯示,SjFBPA在日本血吸蟲(chóng)尾蚴、童蟲(chóng)、成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵階段均有表達(dá)。結(jié)論 SjFBPA基因被成功克隆和表達(dá),其在日本血吸蟲(chóng)尾蚴、童蟲(chóng)、成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵各階段均有表達(dá)。
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;安徽醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲(chóng) 果糖二磷酸醛縮酶 克隆 表達(dá) 純化
【基金】：安徽省自然科學(xué)基金(1308085MH124) 安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2011A205) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81171606)
【分類(lèi)號(hào)】：R383.24
【正文快照】： 血吸蟲(chóng)病是WHO確定的六大熱帶病之一。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì),目前全世界仍有至少2.43億人感染血吸蟲(chóng)[1-2]。我國(guó)是日本血吸蟲(chóng)病流行區(qū),經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的綜合防治,血防工作取得了巨大成就。但截至2013年底,全國(guó)仍有血吸蟲(chóng)病人184 943例[3]。由于流行區(qū)自然環(huán)境復(fù)雜、動(dòng)物傳染源種類(lèi)眾多等

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 周波;彭丹;張琳;譚曉風(fēng);劉選明;;烏桕SsSAD基因的原核表達(dá)與純化研究[J];西北植物學(xué)報(bào);2014年03期

2 唐佳;喻川;韓海洋;嚴(yán)君;魏煒;;麻瘋樹(shù)脫氫抗壞血酸還原酶基因克隆及重組蛋白純化[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年05期

3 劉萍;沈繼龍;鐘政榮;羅慶禮;;日本血吸蟲(chóng)亮氨酸氨基肽酶和果糖二磷酸醛縮酶重組疫苗對(duì)小鼠的保護(hù)性免疫效果觀察[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

4 鐘政榮;徐云俠;宮繼勇;羅慶禮;聞慧琴;宋曉蓉;沈繼龍;;高純度日本血吸蟲(chóng)卵的分離及活性鑒定[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年03期

5 朱蓉;許靜;;我國(guó)境外輸入性血吸蟲(chóng)病的疫情現(xiàn)狀與防控思考[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2014年02期

6 雷正龍;鄭浩;張利娟;朱蓉;徐志敏;許靜;付青;王強(qiáng);李石柱;周曉農(nóng);;2013年全國(guó)血吸蟲(chóng)病疫情通報(bào)[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2014年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 夏丹;鄧淦明;滕萍英;謝郁;李耀民;王春梅;陳淑潔;陳敏芳;麥榮嘉;廖海燕;石玲玉;歐麗妍;陳啟偉;陳曉光;周曉紅;;日本血吸蟲(chóng)主要蟲(chóng)卵抗原Sjp40在感染新西蘭白兔肝臟中的表達(dá)與免疫定位[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年06期

2 紀(jì)曉霞;陳林;;亮氨酸氨基肽酶的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用[J];海峽藥學(xué);2011年12期

3 曹紅榮;徐云俠;丁淑琴;鐘政榮;羅慶禮;沈繼龍;;日本血吸蟲(chóng)無(wú)機(jī)焦磷酸酶的克隆表達(dá)及蛋白特征分析[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

4 劉曉龍;王越;干小仙;;免疫蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在寄生蟲(chóng)病診斷抗原篩選中的應(yīng)用[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2013年12期

5 張旭亮;張振超;蘇苗苗;孫悅;李鵬飛;徐立新;宋小凱;李祥瑞;嚴(yán)若峰;;旋毛蟲(chóng)醛縮酶基因的克隆表達(dá)及重組蛋白酶比活性的分析[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2014年05期

6 許靜;楊坤;李石柱;周曉農(nóng);;我國(guó)血吸蟲(chóng)病傳播控制后的監(jiān)測(cè)體系[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2014年01期

7 王絢;吳巨龍;呂剛;蘇娟;辛奇;魯俊;張思;王猛;孫萃平;逯召蓮;何黎黎;景濤;;細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)果糖二磷酸醛縮酶的生物信息學(xué)分析及其表達(dá)與活性檢測(cè)[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2014年03期

8 雷正龍;周曉農(nóng);;血吸蟲(chóng)病“十二五”防治規(guī)劃實(shí)施進(jìn)展及面臨的挑戰(zhàn)[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2014年02期

9 錢(qián)熠禮;汪偉;洪青標(biāo);;膠體染料試紙條法診斷日本血吸蟲(chóng)感染的meta分析[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2014年06期

10 華海涌;任光輝;梁幼生;;埃及血吸蟲(chóng)病的臨床表現(xiàn)與治療[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2014年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張e，

本文編號(hào)：1114735