本文關(guān)鍵詞：Peyer小結(jié)B淋巴細(xì)胞分化過程中S1P1表達(dá)變化及Tfh相關(guān)因子對(duì)B淋巴細(xì)胞S1P1表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： S1P1 IL-4 IL-21 TGF-β1 Peyer小結(jié) B220+細(xì)胞

【摘要】：目的： 研究S1P1在不同分化階段B淋巴細(xì)胞（B220+IgA-B淋巴細(xì)胞、B220+IgA+B淋巴細(xì)胞、B220-IgA+漿母細(xì)胞）的表達(dá)以及Tfh細(xì)胞因子IL-4、IL-21、TGF-β1等對(duì)S1P1表達(dá)的影響。 方法： 1.選用BALB/c小鼠，采用隔日口服0.1%牛血清白蛋白（BSA），兩周后將小鼠斷頸處死，取小腸段Peyer小結(jié)免疫組化染色，觀察不同分化階段的B淋巴細(xì)胞在Peyer小結(jié)中的定位及S1P1的分布情況。 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測Peyer小結(jié)細(xì)胞膜表面S1P1在（B220+IgA-B淋巴細(xì)胞、B220+IgA+B淋巴細(xì)胞、 B220-IgA+漿母細(xì)胞）這三種細(xì)胞群中的表達(dá)情況。 3.選用BALB/c小鼠，無菌條件下采用密度梯度離心法獲取脾臟單個(gè)核細(xì)胞。磁珠分選法獲得純度為95%以上的B220+細(xì)胞，分別加用IL-4、IL-21、TGF-β1孵育，于加入后0h、24h、48h、72h、96h收集細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-4、IL-21和對(duì)照組細(xì)胞膜表面S1P1的表達(dá)情況，判斷這兩個(gè)細(xì)胞因子對(duì)S1P1表達(dá)的影響。 4.對(duì)TGF-β1干預(yù)組及其對(duì)照組在24h、48h、72h提取細(xì)胞總蛋白，IL-4、IL-21干預(yù)組及其對(duì)照組在24h、96h、120h提取細(xì)胞總蛋白，Western-blot檢測不同組別S1P1的表達(dá)。 結(jié)果： 1.免疫組化結(jié)果表明，Peyer小結(jié)生發(fā)中心存在大量B220+細(xì)胞，IgA+細(xì)胞散在分布于生發(fā)中心的明帶與暗帶，在明帶偶可見其成團(tuán)分布。CD138+細(xì)胞在生發(fā)中心暗帶區(qū)可見散在分布。S1P1+細(xì)胞在生發(fā)中心明帶與暗帶均可見分布，以中央明帶區(qū)數(shù)目更多。 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測Peyer小結(jié)細(xì)胞，測得細(xì)胞膜表面S1P1在B220+IgA-B細(xì)胞熒光率為（9.673±4.302）%，在B220+IgA+B細(xì)胞為（36.39±9.193）%，在B220-IgA+漿母細(xì)胞為（52.91±8.185）%。并且B220+IgA-B細(xì)胞與B220+IgA+B細(xì)胞相比，P＜0.05；B220+IgA-B細(xì)胞與B220-IgA+漿母細(xì)胞相比，P＜0.005；B220+IgA+B細(xì)胞與B220-IgA+漿母細(xì)胞相比，P＞0.05。 3.細(xì)胞因子干預(yù)后的B220+細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞膜表面S1P1發(fā)現(xiàn)，IL-4(200ng/107cells)干預(yù)0h,24h,48h,72h,96h后，S1P1表達(dá)細(xì)胞百分率為3.02±1.232，，6.23±3.600，5.75±3.216，11.86±3.614，38.36±5.558；IL-21(100ng/107cells)干預(yù)0h,24h,48h,72h,96h后，S1P1表達(dá)細(xì)胞百分率分別為1.87±0.578，5.92±2.772，7.56±4.228，20.65±3.791，46.77±7.893；IL-4(200ng/107cells)與IL-21(100ng/107cells)共同干預(yù)0h,24h,48h,72h,96h后,S1P1表達(dá)細(xì)胞百分率分別為2.77±1.103，5.45±2.113，8.40±1.472，14.13±4.221，43.77±3.316；而未加細(xì)胞因子的對(duì)照組0h,24h,48h,72h,96h后分別為2.34±0.910，2.26±1.220，5.22±1.571，9.383±6.548，15.16±4.327。從結(jié)果中可以看出，各干預(yù)組與對(duì)照組在0到48h之間細(xì)胞膜表面S1P1表達(dá)量無明顯差異，從72h到96h，各干預(yù)組S1P1表達(dá)量出現(xiàn)明顯上升，說明IL-4與IL-21對(duì)B220+細(xì)胞上調(diào)細(xì)胞膜S1P1受體有促進(jìn)作用。 4.Western-blot結(jié)果顯示，TGF-β1刺激后的B220+細(xì)胞，其S1P1的表達(dá)量在24h、48h、72h呈上升趨勢（時(shí)間點(diǎn)之間P＜0.05），且高于對(duì)照組（24h P=0.0003，48h P=0.0006），說明TGF-β1對(duì)于B220+細(xì)胞上調(diào)S1P1表達(dá)有促進(jìn)作用；IL-4、IL-21、IL-4和IL-21刺激組S1P1表達(dá)量在24h到96h之間呈明顯上升趨勢，且明顯高于對(duì)照組，但96h到120h之間增長不明顯。 結(jié)論：Peyer小結(jié)內(nèi)B淋巴細(xì)胞經(jīng)歷B220+IgA-、B220+IgA+、B220-IgA+幾個(gè)階段，不斷分化成熟，且逐漸從生發(fā)中心的暗帶區(qū)遷移至FDC較多的明帶區(qū)，在這里接觸FDC提呈的抗原并受到CD4+T細(xì)胞進(jìn)一步活化發(fā)育成漿細(xì)胞。而S1P1受體的表達(dá)量亦隨其分化成熟不斷上調(diào)，使其更易受S1P的趨化進(jìn)入輸出淋巴系統(tǒng)。Tfh細(xì)胞因子TGF-β1、IL-4、IL-21均能上調(diào)B淋巴細(xì)胞S1P1的表達(dá)，但是IL-4與IL-21干預(yù)組在96h之后，S1P1上升趨勢不顯著，提示可能S1P1表達(dá)量已達(dá)到最大值或飽和狀態(tài)。
【關(guān)鍵詞】：S1P1 IL-4 IL-21 TGF-β1 Peyer小結(jié) B220+細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中英文縮寫名詞對(duì)照表6-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 第一部分 Peyer小結(jié) B淋巴細(xì)胞不同分化階段 S1P1表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究13-31
• 前言13-15
• 材料和方法15-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-28
• 小結(jié)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 第二部分 脾臟 B220+B 細(xì)胞 S1P1 的表達(dá)與 IL-4、IL-21、TGF-β1 的關(guān)系31-54
• 前言31-33
• 材料和方法33-41
• 結(jié)果41-45
• 討論45-50
• 小結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 綜述54-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 致謝65

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1114720