發(fā)布時(shí)間：2017-10-29 03:29

  本文關(guān)鍵詞：釓噴酸葡胺標(biāo)記人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的體外MR成像轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細(xì)胞 磁共振成像 釓噴酸葡胺 示蹤

【摘要】：研究目的： 1、建立從足月孕婦臍帶分離間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）、體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法,研究此細(xì)胞在體外的生物學(xué)特性及表型特征，為應(yīng)用MSCs研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2、探討Gd-DTPA標(biāo)記MSCs的可行性，并研究磁標(biāo)記干細(xì)胞的生物學(xué)特性是否改變。 3、應(yīng)用不同轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染Gd-DTPA進(jìn)入干細(xì)胞，篩選出轉(zhuǎn)染率最高的試劑，為磁標(biāo)記干細(xì)胞體外MR成像規(guī)律的研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1、在無菌條件下取足月健康新生兒近臍部臍帶，應(yīng)用組織塊貼壁法分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，應(yīng)用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。 2、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物；光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征；計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞的增殖能力并繪制生長曲線；體外向成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)驗(yàn)證其多向分化能力。 3、應(yīng)用轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染Gd-DTPA進(jìn)入MSCs，用1.5T臨床應(yīng)用型MR成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描，觀察細(xì)胞的信號(hào)強(qiáng)度。 4、計(jì)數(shù)法檢測磁標(biāo)記干細(xì)胞的增殖能力，體外誘導(dǎo)磁標(biāo)記干細(xì)胞向成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化，觀察Gd-DTPA是否影響干細(xì)胞的生物學(xué)特性。 5、應(yīng)用磷酸鈣、Effectene、脂質(zhì)體2000三種不同轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，通過MRI測定信號(hào)強(qiáng)度及電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測定細(xì)胞內(nèi)釓的濃度，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析篩選出轉(zhuǎn)染率最高的試劑，并探索MR成像的最低細(xì)胞量及細(xì)胞內(nèi)釓離子隨細(xì)胞傳代的變化規(guī)律。 結(jié)果： 1、應(yīng)用組織塊貼壁法能在兩周后獲得原代細(xì)胞，細(xì)胞呈長梭形，漩渦樣生長，，傳代后生長速度明顯增快，傳2代后細(xì)胞形態(tài)更為均勻一致；細(xì)胞生長曲線顯示，從第4天起細(xì)胞生長進(jìn)入對數(shù)生長期；培養(yǎng)的第3代細(xì)胞高表達(dá)CD29、CD44、CD90、CD105,而造血細(xì)胞表面標(biāo)志物CD45，與移植免疫排斥密切相關(guān)的表面標(biāo)志CD40、HLA-DR均為陰性表達(dá)，證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞是間充質(zhì)干細(xì)胞；體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)間充質(zhì)干細(xì)胞能被誘導(dǎo)為成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞。 2、三種轉(zhuǎn)染劑能成功轉(zhuǎn)染Gd-DTPA進(jìn)入干細(xì)胞，體外MRI掃描細(xì)胞在T1WI呈現(xiàn)高信號(hào)。 3、轉(zhuǎn)染Gd-DTPA的干細(xì)胞，其增殖能力及多向分化能力均未受到影響。 4、通過MRI測定信號(hào)強(qiáng)度及電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測定進(jìn)入干細(xì)胞內(nèi)Gd離子的濃度得出effectene轉(zhuǎn)染Gd-DTPA的效率最佳；Gd-DTPA能標(biāo)記的最小細(xì)胞量為5×10~4個(gè)；隨細(xì)胞的增殖傳代，Gd離子在細(xì)胞內(nèi)的數(shù)量逐漸減少，細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度在T1WI逐漸降低。 結(jié)論 1、用組織塊貼壁法成功在體外從臍帶中分離培養(yǎng)出hUCMSCs，并可穩(wěn)定傳代培養(yǎng)獲得較純的MSCs； 2、hUCMSCs具有間充質(zhì)干細(xì)胞的基本生物學(xué)特征，可在體外定向誘導(dǎo)分化為成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞，說明其具有多向分化潛能。 3、應(yīng)用Gd-DTPA標(biāo)記人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是可行的，標(biāo)記后的干細(xì)胞增殖能力及多向分化潛能均未受到影響。 4、1.5T臨床型MRI能體外示蹤到轉(zhuǎn)染Gd-DTPA的干細(xì)胞，細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度隨細(xì)胞的傳代逐漸降低，體外能示蹤到磁標(biāo)記干細(xì)胞的時(shí)間持續(xù)約12天。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 磁共振成像 釓噴酸葡胺 示蹤
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 目錄8-9
• 英文縮略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一章 hUCMSCs 的體外分離培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性12-24
• 1 研究目的12
• 2 材料與方法12-17
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-22
• 4 討論22-23
• 5 結(jié)論23-24
• 第二章 釓噴酸葡胺標(biāo)記人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的體外 MR 成像24-37
• 1 研究目的24
• 2 材料與方法24-27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 4 討論33-36
• 5 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 綜述42-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1111235