本文關(guān)鍵詞：單抗制品中CHO細(xì)胞宿主蛋白殘留雙抗夾心ELISA檢測方法的建立

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【摘要】：目的建立單抗制品中CHO細(xì)胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)殘留雙抗夾心ELISA檢測方法。方法確定雙抗夾心ELISA方法的最佳工作條件,并對該方法的精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行驗(yàn)證,確定線性范圍及最低檢出限;用建立的方法與市售試劑盒分別檢測低、中、高濃度HCP標(biāo)準(zhǔn)品及抗TNF-α單抗原液、抗VEGF單抗純化工藝樣品中的HCP。結(jié)果建立的雙抗夾心ELISA法最佳抗體包被濃度為1.5μg/ml,酶標(biāo)抗體濃度為1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5 h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm為參比波長,450 nm為測定波長。該方法的線性范圍為3.125~100 ng/ml,最低檢測限為3.125 ng/ml;試驗(yàn)內(nèi)變異系數(shù)(CV)和試驗(yàn)間CV均小于15%,回收率為85.3%~115.1%。與商品化試劑盒檢測結(jié)果基本一致,可用于檢測純化工藝樣品。結(jié)論已成功建立單抗制品中CHO細(xì)胞HCP殘留雙抗夾心ELISA檢測方法,該方法可代替市售試劑盒用于CHO細(xì)胞HCP殘留檢測,可使檢測成本降低30倍。
【作者單位】： 廣東東陽光藥業(yè)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： CHO細(xì)胞 宿主蛋白 雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法
【基金】：廣東省引進(jìn)創(chuàng)新科研團(tuán)隊(duì)計(jì)劃項(xiàng)目(201101Y0104990178)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能夠折疊、組裝和翻譯后修飾產(chǎn)生的活性功能分子[1-2],因此被廣泛應(yīng)用于單克隆抗體和FC-融合蛋白[3]的生產(chǎn),但CHO細(xì)胞中殘 留的宿主蛋白(host cell protein,HCP)作為人類自身系統(tǒng)的外源蛋白,具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的潛在可能性[4],當(dāng)其在人體內(nèi)水平達(dá)到100

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1099106