本文關(guān)鍵詞：單抗制品中CHO細胞宿主蛋白殘留雙抗夾心ELISA檢測方法的建立

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【摘要】：目的建立單抗制品中CHO細胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)殘留雙抗夾心ELISA檢測方法。方法確定雙抗夾心ELISA方法的最佳工作條件,并對該方法的精密度和準確度進行驗證,確定線性范圍及最低檢出限;用建立的方法與市售試劑盒分別檢測低、中、高濃度HCP標準品及抗TNF-α單抗原液、抗VEGF單抗純化工藝樣品中的HCP。結(jié)果建立的雙抗夾心ELISA法最佳抗體包被濃度為1.5μg/ml,酶標抗體濃度為1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5 h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm為參比波長,450 nm為測定波長。該方法的線性范圍為3.125~100 ng/ml,最低檢測限為3.125 ng/ml;試驗內(nèi)變異系數(shù)(CV)和試驗間CV均小于15%,回收率為85.3%~115.1%。與商品化試劑盒檢測結(jié)果基本一致,可用于檢測純化工藝樣品。結(jié)論已成功建立單抗制品中CHO細胞HCP殘留雙抗夾心ELISA檢測方法,該方法可代替市售試劑盒用于CHO細胞HCP殘留檢測,可使檢測成本降低30倍。
【作者單位】： 廣東東陽光藥業(yè)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： CHO細胞 宿主蛋白 雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法
【基金】：廣東省引進創(chuàng)新科研團隊計劃項目(201101Y0104990178)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： CHO細胞表達系統(tǒng)能夠折疊、組裝和翻譯后修飾產(chǎn)生的活性功能分子[1-2],因此被廣泛應用于單克隆抗體和FC-融合蛋白[3]的生產(chǎn),但CHO細胞中殘 留的宿主蛋白(host cell protein,HCP)作為人類自身系統(tǒng)的外源蛋白,具有誘導機體產(chǎn)生免疫反應的潛在可能性[4],當其在人體內(nèi)水平達到100

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 潘殊男;肖詹蓉;王宇星;張霖陽;史雨舟;孫芳芳;張萍;;腦膜炎球菌W135群多糖含量和分子大小雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立及初步應用[J];中國生物制品學雜志;2012年12期

2 王寧;佟雪蓮;邊雅靜;周思杭;李靜;王奔;唐玉龍;;Sf9昆蟲細胞宿主蛋白含量雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立[J];中國生物制品學雜志;2014年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 魏雁虹;何巍;耿輝;宋帥;刁斌斌;楊廣民;;人α1微球蛋白ELISA檢測試劑盒的制備及初步應用[J];中國生物制品學雜志;2014年12期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳鎮(zhèn);植物源重組人血清白蛋白的殘留宿主雜質(zhì)研究[D];武漢大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳平;抗腺病毒五鄰體單抗的制備及雙抗夾心ELISA方法的建立[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2014年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 郝彩霞;袁珩;羅隆澤;李燕春;祝小平;劉倫光;;四川合江縣2008年流腦A、C、Y和W135群監(jiān)測結(jié)果分析[J];中國熱帶醫(yī)學;2010年02期

2 陳昕;;我國擴大免疫規(guī)劃的意義和實施[J];上海預防醫(yī)學雜志;2009年05期

3 王輝;張月蘭;過琴媛;賈麗麗;鐘書聲;趙玉秀;馬可;羅書榮;;疫苗制品中Vero細胞殘余蛋白含量檢測方法的建立[J];中國生物制品學雜志;2007年12期

4 趙玉秀;馬可;梁宏陽;蘇桂民;趙碩;李愛靈;張月蘭;王輝;;釀酒酵母殘留蛋白ELISA定量檢測方法的建立[J];中國生物制品學雜志;2012年08期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘇文全;廖輝;商一行;張景海;;雙抗夾心ELISA法快速檢測人用狂犬病疫苗的效價[J];藥學服務與研究;2008年06期

2 陳靜;蔣強華;熊小培;杜萍;盛蘭;項美娟;楊邦玲;;雙抗夾心ELISA法在無細胞百日咳疫苗生產(chǎn)質(zhì)控中的應用[J];微生物學免疫學進展;2010年01期

3 胡仁建;范開;蔡家利;;改進雙抗夾心ELISA用于篩選單抗雜交瘤細胞株[J];重慶師范大學學報(自然科學版);2008年03期

4 胡昕;諸葛青云;李亞飛;潘長旺;譚峰;;雙抗夾心ELISA法檢測弓形蟲核苷三磷酸脫氫酶-Ⅱ型蛋白的研究[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2010年05期

5 嚴芳;王捷;王江濤;;骨唾液酸蛋白雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測方法的初步建立[J];廣東醫(yī)學;2009年11期

6 尹繼剛,張西臣,陳建寶,丁穎;雙抗夾心-ELISA快速診斷隱孢子蟲病[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2000年02期

7 宋宏新;馬冬;薛海燕;李紅心;;雙抗夾心ELISA法定量檢測食品中大腸桿菌O157:H7初探[J];食品科學;2008年10期

8 吳大成;孫洋;袁潔;康樺華;郭學軍;祝令偉;陳志虹;向蓉;馮書章;;雙抗夾心ELISA檢測腸出血性大腸桿菌O157方法的建立[J];中國獸醫(yī)學報;2011年12期

9 茍清;侯一平;毛詠秋;吳梅筠;;用雙抗夾心間接ELISA方法檢測p30確證人類精斑[J];法醫(yī)學雜志;1991年03期

10 楊葵,周棱,王衍真;雙抗夾心免疫PCR法檢測人促甲狀腺激素(TSH)[J];免疫學雜志;2000年02期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 彭俊平;雞白細胞介素-1和白細胞介素-6雙抗夾心ELISA檢測方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2009年

2 陳平;抗腺病毒五鄰體單抗的制備及雙抗夾心ELISA方法的建立[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2014年

3 王金霞;雙抗夾心ELISA定量檢測血液中rHu IFN-ω的研究[D];重慶大學;2007年

4 謝永華;CEA MAB的制備、純化及其雙抗夾心ELISA檢測方法的初步建立[D];福建師范大學;2010年

5 張寧;豬流行性乙型腦炎雙抗夾心ELISA方法的建立與試劑盒的制備[D];吉林大學;2011年

6 張留圈;基于磁珠和雙抗夾心免疫分析的Bt Cry1Ac毒素單鏈抗體篩選、鑒定及應用[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

7 徐君英;金黃色葡萄球菌腸毒素Ⅰ檢測方法的建立[D];北京中醫(yī)藥大學;2009年

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