本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細胞對外周血單個核細胞及CD8亞群增殖和功能的影響

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【摘要】：目的：探討人骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells, MSCs)對同種異體外周血單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMCs)及CD8+T淋巴細胞增殖、功能的抑制作用,并進一步探索其抑制CD8+T淋巴細胞的作用機制，為MSCs應(yīng)用于臨床的自身免疫性疾病，移植物抗宿主反應(yīng)等所致免疫性疾病提供實驗依據(jù)。 材料和方法：采用密度梯度離心法和貼壁法進行分離培養(yǎng)MSCs，通過Ficoll-Pague密度梯度離心法分離PBMCs，從形態(tài)學、表面標記物的表達情況及多向分化能力等方面對MSCs進行鑒定；MSCs與PBMCs不同比例共培養(yǎng)，應(yīng)用CCK-8法檢測MSCs對植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)刺激PBMCs增殖的抑制作用；并應(yīng)用流式細胞儀技術(shù)檢測MSCs對PHA誘導(dǎo)CD8+T淋巴細胞增殖的抑制作用；最后應(yīng)用Transwell法阻斷MSCs與CD8+T淋巴細胞亞群之間的細胞接觸，探索細胞接觸在MSCs抑制CD8+T淋巴細胞增殖作用中的角色；用免疫磁珠分選出CD8+T淋巴細胞，并用流式細胞儀檢測其純度；然后將MSCs與CD8+T淋巴細胞共培養(yǎng)，72小時后收集其中的CD8+T淋巴細胞，提取RNA，應(yīng)用熒光定量PCR法，檢測各組CD8+T淋巴細胞內(nèi)的白細胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、顆粒酶B（Granzyme B,Gzmb）、γ-干擾素（Interferon γ, IFN-γ）等細胞因子的mRNA表達的情況。 結(jié)果： 1：體外成功分離培養(yǎng)獲得MSCs及PBMCs； 2：MSCs與PBMCs共培養(yǎng)條件下，當MSCs與PBMCs比例為1:5、1:1時，與未添加MSCs的實驗組相比，MSCs可抑制PHA刺激的PBMCs及其中的CD8+T淋巴細胞亞群的增殖，統(tǒng)計學具有差異性（P＜0.05）；MSCs與PBMCs比例為1:10、1:20和1:50時，，與未添加MSCs的實驗組相比，MSCs抑制PBMCs及其中的CD8+T淋巴細胞亞群的增殖，統(tǒng)計學不具有差異性（P＞0.05）； 3：當MSCs與PBMCs按照1:1及1:5的比例混合培養(yǎng)時，采用Transwell法阻斷MSCs與CD8+T淋巴細胞亞群之間的細胞接觸的實驗組與不阻斷細胞接觸的非Transwell實驗組相比，MSCs抑制PHA引起的CD8+T淋巴細胞亞群增殖作用無明顯差異性（P＞0.05）； 4：通過免疫磁珠法，成功分離純化CD8+T淋巴細胞； 5：通過PCR法檢測CD8+T淋巴細胞內(nèi)的IL-2、Gzmb和IFN-γ等細胞因子的mRNA表達水平：在未經(jīng)PHA處理的CD8+T淋巴細胞中，三者的mRNA水平均有表達，但是表達水平較低，加入PHA刺激后，其mRNA表達水平明顯升高；當加入一定比例濃度的MSCs（MSCs：CD8+T=1:5）后，其CD8+T淋巴細胞中三者的mRNA表達水平與未添加MSCs的實驗組相比明顯下降，統(tǒng)計學有明顯差異性（P＜0.05）。 結(jié)論：MSCs可抑制PHA刺激的同種異體PBMCs及CD8+T淋巴細胞的增殖，其作用機制可能與細胞直接接觸和分泌效應(yīng)因子有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細胞 免疫抑制 CD8+T淋巴細胞 T淋巴細胞
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中英文對照縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-15
• 實驗材料15-17
• 實驗方法17-30
• 結(jié)果30-44
• 討論44-48
• 參考文獻48-53
• 結(jié)論53-54
• 綜述54-72
• 參考文獻64-72
• 致謝72-73
• 攻讀碩士期間發(fā)表（投稿）的論文73

【參考文獻】

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1 王景昌;白海;吳濤;路繼紅;歐劍峰;;人骨髓間充質(zhì)干細胞對異體T淋巴細胞增殖的影響及機制研究[J];實用醫(yī)學雜志;2006年05期

本文編號：1096357