本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞及CD8亞群增殖和功能的影響

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【摘要】：目的：探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)對(duì)同種異體外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMCs)及CD8+T淋巴細(xì)胞增殖、功能的抑制作用,并進(jìn)一步探索其抑制CD8+T淋巴細(xì)胞的作用機(jī)制，為MSCs應(yīng)用于臨床的自身免疫性疾病，移植物抗宿主反應(yīng)等所致免疫性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法：采用密度梯度離心法和貼壁法進(jìn)行分離培養(yǎng)MSCs，通過(guò)Ficoll-Pague密度梯度離心法分離PBMCs，從形態(tài)學(xué)、表面標(biāo)記物的表達(dá)情況及多向分化能力等方面對(duì)MSCs進(jìn)行鑒定；MSCs與PBMCs不同比例共培養(yǎng)，應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)MSCs對(duì)植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)刺激PBMCs增殖的抑制作用；并應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)MSCs對(duì)PHA誘導(dǎo)CD8+T淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用；最后應(yīng)用Transwell法阻斷MSCs與CD8+T淋巴細(xì)胞亞群之間的細(xì)胞接觸，探索細(xì)胞接觸在MSCs抑制CD8+T淋巴細(xì)胞增殖作用中的角色；用免疫磁珠分選出CD8+T淋巴細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其純度；然后將MSCs與CD8+T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，72小時(shí)后收集其中的CD8+T淋巴細(xì)胞，提取RNA，應(yīng)用熒光定量PCR法，檢測(cè)各組CD8+T淋巴細(xì)胞內(nèi)的白細(xì)胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、顆粒酶B（Granzyme B,Gzmb）、γ-干擾素（Interferon γ, IFN-γ）等細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)的情況。 結(jié)果： 1：體外成功分離培養(yǎng)獲得MSCs及PBMCs； 2：MSCs與PBMCs共培養(yǎng)條件下，當(dāng)MSCs與PBMCs比例為1:5、1:1時(shí)，與未添加MSCs的實(shí)驗(yàn)組相比，MSCs可抑制PHA刺激的PBMCs及其中的CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的增殖，統(tǒng)計(jì)學(xué)具有差異性（P＜0.05）；MSCs與PBMCs比例為1:10、1:20和1:50時(shí)，，與未添加MSCs的實(shí)驗(yàn)組相比，MSCs抑制PBMCs及其中的CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的增殖，統(tǒng)計(jì)學(xué)不具有差異性（P＞0.05）； 3：當(dāng)MSCs與PBMCs按照1:1及1:5的比例混合培養(yǎng)時(shí)，采用Transwell法阻斷MSCs與CD8+T淋巴細(xì)胞亞群之間的細(xì)胞接觸的實(shí)驗(yàn)組與不阻斷細(xì)胞接觸的非Transwell實(shí)驗(yàn)組相比，MSCs抑制PHA引起的CD8+T淋巴細(xì)胞亞群增殖作用無(wú)明顯差異性（P＞0.05）； 4：通過(guò)免疫磁珠法，成功分離純化CD8+T淋巴細(xì)胞； 5：通過(guò)PCR法檢測(cè)CD8+T淋巴細(xì)胞內(nèi)的IL-2、Gzmb和IFN-γ等細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平：在未經(jīng)PHA處理的CD8+T淋巴細(xì)胞中，三者的mRNA水平均有表達(dá)，但是表達(dá)水平較低，加入PHA刺激后，其mRNA表達(dá)水平明顯升高；當(dāng)加入一定比例濃度的MSCs（MSCs：CD8+T=1:5）后，其CD8+T淋巴細(xì)胞中三者的mRNA表達(dá)水平與未添加MSCs的實(shí)驗(yàn)組相比明顯下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)有明顯差異性（P＜0.05）。 結(jié)論：MSCs可抑制PHA刺激的同種異體PBMCs及CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖，其作用機(jī)制可能與細(xì)胞直接接觸和分泌效應(yīng)因子有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 免疫抑制 CD8+T淋巴細(xì)胞 T淋巴細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中英文對(duì)照縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-15
• 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 實(shí)驗(yàn)方法17-30
• 結(jié)果30-44
• 討論44-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 結(jié)論53-54
• 綜述54-72
• 參考文獻(xiàn)64-72
• 致謝72-73
• 攻讀碩士期間發(fā)表（投稿）的論文73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王景昌;白海;吳濤;路繼紅;歐劍峰;;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)異體T淋巴細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

本文編號(hào)：1096357