本文關(guān)鍵詞：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的建立及優(yōu)化

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【摘要】：為優(yōu)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)原代及傳代的培養(yǎng)方法,建立一種簡便且能夠獲得數(shù)量較多及活力良好的HUVEC培養(yǎng)體系。分離臍靜脈并插管,用0.1%的II型膠原酶灌注消化分離內(nèi)皮細(xì)胞。M199完全培養(yǎng)基懸浮并接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。待細(xì)胞鋪滿80%時,0.25%胰酶-EDTA消化傳代培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞生長情況,姬姆薩染色法鑒定內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài),vWF因子相關(guān)抗原免疫熒光法鑒定內(nèi)皮細(xì)胞。比較不同膠原酶消化時間、不同接種密度、不同胰酶消化時間、不同培養(yǎng)基組分對細(xì)胞得率、形態(tài)和純度的影響。結(jié)果表明,原代培養(yǎng)時,II型膠原酶最佳消化時間為15min,最佳接種密度為1×106 mL-1;傳代培養(yǎng)時,胰酶最佳消化時間為2min。倒置顯微鏡下觀察和姬姆薩染色結(jié)果顯示,貼壁內(nèi)皮細(xì)胞呈長梭形,且呈單層鋪路石狀排列。免疫熒光檢測結(jié)果表明,細(xì)胞胞漿呈綠色熒光,為vWF因子陽性細(xì)胞,DAPI襯染細(xì)胞核呈藍色,顯示內(nèi)皮細(xì)胞純度接近100%。本實驗成功建立了HUVEC原代分離培養(yǎng)的優(yōu)化體系,純度高、活力好,為后續(xù)研究做好了準(zhǔn)備。
【作者單位】： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省環(huán)境獸醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 膠原酶消化法 姬姆薩染色 免疫熒光技術(shù)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31302155,31302158) 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)博士啟動基金(2013YJ39)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 血管內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,EC)是一種多功能細(xì)胞,其在多種疾病中所起的重要作用已越來越受到重視,已成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)、生物學(xué)領(lǐng)域的重要研究對象[1]。人臍靜脈(human umbilical vein,HUV)是培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的常用來源之一,與動物血管內(nèi)皮細(xì)胞相比,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanu

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本文編號：1092223