本文關(guān)鍵詞：真核表達(dá)人Wnt7b基因建立軟骨細(xì)胞退變模型

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【摘要】：目的在真核細(xì)胞中表達(dá)人Wnt7b基因并且觀察對(duì)大鼠原代軟骨細(xì)胞的退變作用。方法取出生24 h SD大鼠關(guān)節(jié)處軟骨,Ⅱ型膠原酶多次消化后獲得原代軟骨細(xì)胞,取P1代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。擴(kuò)增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,轉(zhuǎn)染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft細(xì)胞中,48 h后收集細(xì)胞上清及轉(zhuǎn)染細(xì)胞,Western blot鑒定Wnt7b在293ft細(xì)胞中的表達(dá)。收集的上清分別稀釋10倍和50倍培養(yǎng)大鼠軟骨細(xì)胞,24 h后觀察細(xì)胞形態(tài)并收集細(xì)胞蛋白和抽提RNA,Western blot和定量PCR檢測(cè)軟骨退變指標(biāo)MMP13、MMP3、Ⅱ型膠原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表達(dá)。結(jié)果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP載體上且在293ft細(xì)胞中得到有效表達(dá)。含Wnt7b培養(yǎng)基干預(yù)軟骨細(xì)胞24 h后,軟骨細(xì)胞形態(tài)由原來(lái)的多角形變成長(zhǎng)梭形,Wnt7b處理組軟骨細(xì)胞MMP13和MMP3表達(dá)顯著上調(diào),Ⅱ型膠原的表達(dá)下調(diào)。PCR結(jié)果表明A-can和Sox9表達(dá)下降,ColⅩ和ADAMTS5表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論有效在真核細(xì)胞中表達(dá)Wnt7b基因并且促進(jìn)大鼠軟骨細(xì)胞退變,建立軟骨細(xì)胞退變的體外模型。
【作者單位】： 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州市中醫(yī)院;上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司;上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院石氏傷科醫(yī)學(xué)中心;上海市中醫(yī)藥研究院骨傷科研究所;
【關(guān)鍵詞】： Wntb基因 ft細(xì)胞 軟骨細(xì)胞 轉(zhuǎn)染 細(xì)胞退變
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81073114,81072830) 上海市教委創(chuàng)新項(xiàng)目(11YZ64) 上海市高校青年教師培養(yǎng)資助計(jì)劃(ZZszy12017)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【正文快照】： 正常的軟骨結(jié)構(gòu)是由細(xì)胞外基質(zhì)如Ⅱ型膠原和可聚蛋白聚糖(aggrecan為主)組成。為維持軟骨結(jié)構(gòu)完整,基質(zhì)成份通過(guò)基質(zhì)降解酶如MMP13和ADAMTS5不斷進(jìn)行更新和重塑,基質(zhì)的降解和合成基質(zhì)同時(shí)進(jìn)行,從而維持軟骨結(jié)構(gòu)的完整[1-4]。當(dāng)軟骨組織中這種合成和降解失衡時(shí),軟骨細(xì)胞退變和

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蘇友新;林學(xué)義;陳秀明;趙富強(qiáng);陳寶軍;鄭良樸;;IL-1β對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞“Wnt/β-catenin”通路的影響[J];福建中醫(yī)藥;2012年06期

2 秦俊;陳廖斌;汪暉;;脫氫表雄酮對(duì)白細(xì)胞介素-1β誘導(dǎo)的人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞退變的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

3 ;[J];;年期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳曉東;鹿茸多肽對(duì)大鼠軟骨細(xì)胞退變老化的影響[D];福建中醫(yī)學(xué)院;2007年

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本文編號(hào)：1091338