本文關(guān)鍵詞：葡萄胎病理相關(guān)基因F10編碼蛋白單克隆抗體的制備與應(yīng)用

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【摘要】：目的構(gòu)建原核質(zhì)粒表達葡萄胎相關(guān)新基因F10重組蛋白,分離純化制備其單克隆抗體,并鑒定其生物學特性。方法用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法從成人組織中擴增F10編碼序列,將其克隆到p ET28a原核表達載體,在大腸桿菌BL21(DE3)內(nèi)進行誘導(dǎo)表達F10基因重組蛋白。以純化后的重組蛋白免疫Balb/c小鼠制備單克隆抗體。ELISA法檢測雜交瘤細胞分泌F10單克隆抗體的效價和類型,免疫組織化學染色檢測F10蛋白在葡萄胎及胎盤組織中的表達,鑒定制備F10單克隆抗體的特異性。結(jié)果成功構(gòu)建了p ET28a/F10原核表達質(zhì)粒并獲得高純度的重組F10蛋白。篩選出3株能穩(wěn)定分泌抗F10蛋白的單克隆抗體雜交瘤細胞系,其效價比高達1∶7.2×105,免疫球蛋白類型均為Ig G1類。免疫組織化學染色顯示該抗體能特異結(jié)合葡萄胎及胎盤絨毛組織中的F10蛋白,且葡萄胎組織中F10蛋白的表達顯著高于正常胎盤組織。結(jié)論表達及純化的重組F10蛋白純度高,免疫原性強。以此為抗原制備的抗F10蛋白的單克隆抗體效價高、特異性強,可用于F10功能的進一步研究。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院婦產(chǎn)科;南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院康復(fù)理療科;
【關(guān)鍵詞】： 新基因F F重組蛋白 葡萄胎 單克隆抗體
【基金】：國家自然科學基金(81170595)
【分類號】：R392
【正文快照】： 在我們前期的研究中,為研究滋養(yǎng)層有節(jié)制侵入的分子機理,選擇滋養(yǎng)層侵襲性正常的早孕絨毛和滋養(yǎng)層發(fā)育異常的完全性葡萄胎組織標本,采用抑制性消減雜交的方法建立了完全性葡萄胎與正常早孕絨毛間的差示c DNA文庫,以期篩選出在葡萄胎組織中異常表達的基因,從而進一步揭示滋養(yǎng)層

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 周瑾,陳士嶺,邢福祺,龐戰(zhàn)軍,李冰,周問渠,付欣,丁彥青;葡萄胎發(fā)病新基因F10與滋養(yǎng)細胞腫瘤侵襲相關(guān)性研究[J];第一軍醫(yī)大學學報;2005年02期

2 崔艷國;全松;邢福，

本文編號：1080998