本文關(guān)鍵詞：重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白臨床新靶點(diǎn)研究

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【摘要】：重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（簡(jiǎn)稱(chēng)TNHH）在白細(xì)胞抑制因子（NIF）和水蛭肽（Hirulog）中間加入了一段交聯(lián)肽，能與血凝塊中纖維蛋白結(jié)合的導(dǎo)向性，實(shí)現(xiàn)了降低NIF和Hirulog片段的風(fēng)險(xiǎn)性，增加有效性的目的，能有效抑制白細(xì)胞活化、遷移、粘附功能，抑制凝血酶活性、血細(xì)胞與纖維蛋白結(jié)合。本品在急性缺血性腦卒中動(dòng)物模型中具有多重功效，能有效促進(jìn)腦組織損傷修復(fù)和保護(hù)，改善局部抗凝微循環(huán)和血流再灌注，抑制凝血酶引起的腦水腫，促進(jìn)腦血腫的吸收。目的： 探討重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白臨床新靶點(diǎn)。 方法： 取健康人的纖維蛋白原（FIB）、抗凝血酶II（IAT-III）和纖維蛋白溶酶原（PLG）分別與TNHH進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)，具體采用免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)及分別結(jié)合HPLC分析，抗凝血酶III（AT-III）活性分析，D-二聚體轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中的D-二聚體含量測(cè)定分析判定。在上述實(shí)驗(yàn)判定靶點(diǎn)基礎(chǔ)上，利用CADD（計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)）與可能的新靶點(diǎn)纖維蛋白原（FIB），抗凝血酶II（IAT-III）和纖維蛋白溶酶原（PLG）進(jìn)行分子對(duì)接（DOCK），采用PSIPRED2.4，Sybyl8.0和Discovery Studio2.5軟件進(jìn)行靶點(diǎn)驗(yàn)證結(jié)果。 結(jié)果： 重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH)分別與纖維蛋白原（FIB），抗凝血酶III（AT-III）和纖維蛋白溶酶原（PLG）進(jìn)行免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)，兔抗TNHH多抗與TNHH+FIB和TNHH+AT-III實(shí)驗(yàn)組的免疫印跡結(jié)果呈陰性，而與TNHH+PLG實(shí)驗(yàn)組的免疫印跡結(jié)果呈陽(yáng)性。鼠抗纖維蛋白原（FIB）單抗，鼠抗凝血酶III（AT-III）單抗分別與TNHH+FIB和TNHH+AT-III實(shí)驗(yàn)組的免疫印跡結(jié)果呈陰性，而鼠抗維蛋白溶酶原（PLG）單抗和TNHH+PLG的免疫印跡結(jié)果呈陽(yáng)性。這說(shuō)明TNHH中不含有纖維蛋白原（FIB）或抗凝血酶III（AT-III），而TNHH中含有維蛋白溶酶原（PLG），表示TNHH與FIB或AT-III無(wú)結(jié)合，而與PLG有結(jié)合。將纖維蛋白原（FIB）與TNHH進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)的HPLC分析，結(jié)果顯示：標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照TNHH的保留時(shí)間為16.335min，峰面積為33578168.000；陽(yáng)性對(duì)照TNHH+兔抗TNHH多抗中TNHH的保留時(shí)間為16.095min，峰面積為13985716.804；實(shí)驗(yàn)組TNHH的保留時(shí)間為15.655min，峰面積為34964292.010；這表明標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照中的TNHH和實(shí)驗(yàn)組中的TNHH峰面積并沒(méi)有太大差異，表明FIB與TNHH無(wú)結(jié)合。將抗凝血酶III（AT-III）與TNHH進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)的AT-III：A活性分析，結(jié)果顯示：標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照AT-III的活性為104.7%，陽(yáng)性對(duì)照AT-III的活性為48%，實(shí)驗(yàn)組AT-III的活性為109.3%，這表明標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照AT-III和實(shí)驗(yàn)組AT-III的活性二者之間并沒(méi)有顯著的差異，說(shuō)明抗AT-III與TNHH無(wú)結(jié)合，不能抑制抗凝血酶III的活性。將纖維蛋白溶酶原（PLG）與TNHH進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)的D-二聚體轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)分析，結(jié)果顯示：陽(yáng)性對(duì)照有D-二聚體生成，并且含量為0.246mg/L。實(shí)驗(yàn)組有D-二聚體生成，并且含量為0.068mg/L。這說(shuō)明纖維蛋白溶酶原（PLG）與TNHH有結(jié)合，產(chǎn)生纖維蛋白溶酶，纖維蛋白溶酶催化纖維蛋白降解生成D-二聚體。通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)（CADD）的PSIPRED，Sybyl8.0和Discovery Studio2.5軟件分析，纖維蛋白溶酶原（PLG）C端的第153位Arg至175位的Tyr為一段保守序列RNPDNDPQGPWCYTTDPEKRYDY與重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）的C端的第133位Lys至140位的Tyr為一段保守序列KEGEGVLY在蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)中存在相互作用，而纖維蛋白原（FIB）和抗凝血酶III(AT-III)均沒(méi)有功能核心區(qū)域與TNHH之間有相互作用。 結(jié)論： 通過(guò)免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)，HPLC實(shí)驗(yàn)，AT-III：A活性實(shí)驗(yàn)和D-二聚體轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)分析，以及結(jié)合PSIPRED，Sybyl8.0和Discovery Studio軟件進(jìn)行靶點(diǎn)驗(yàn)證分析。可以初步得出結(jié)論是：TNHH臨床新靶點(diǎn)為纖維蛋白溶酶原（PLG）。
【關(guān)鍵詞】：重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH） 纖維蛋白原（FIB） 抗凝血酶III（AT-III） 纖維蛋白溶酶原（PLG）
【學(xué)位授予單位】：重慶理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-11
• 1. 引言11-33
• 1.1 急性腦卒中病理機(jī)理12-14
• 1.2 TNHH 的臨床研究資料14-15
• 1.3 TNHH 與 UK-279.276 的比較15-20
• 1.4 TNHH 與 Hirulog 的比較20-21
• 1.5 CD11b/CD18 的生物作用和 NIF 介紹21
• 1.6 凝血酶的陰離子結(jié)合區(qū)的生物作用和 Hirulog 介紹21-22
• 1.7 重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）的創(chuàng)新性22-25
• 1.7.1 TNHH 的設(shè)計(jì)思路22-23
• 1.7.2 TNHH 雙靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的思路23
• 1.7.3 TNHH 的結(jié)構(gòu)組成及創(chuàng)新性23
• 1.7.4 TNHH 的可行性23-24
• 1.7.5 嵌合表達(dá)的目的24-25
• 1.8 TNHH 雙靶點(diǎn)功能特點(diǎn)與驗(yàn)證25-28
• 1.8.1 TNHH 雙靶點(diǎn)功能特點(diǎn)25-27
• 1.8.2 TNHH 雙靶點(diǎn)驗(yàn)證27-28
• 1.9 TNHH 臨床新靶點(diǎn)研究對(duì)象依據(jù)28-31
• 1.10 TNHH 臨床新靶點(diǎn)研究技術(shù)路線(xiàn)31-33
• 2. TNHH 臨床新靶點(diǎn)研究實(shí)驗(yàn)方法33-49
• 2.1 取健康人的纖維蛋白原（FIB）與 TNHH 進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)33-37
• 2.1.1 TNHH 與 FIB 的免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)33-36
• 2.1.2 TNHH 與 FIB 的高效液相色譜法（HPLC 外標(biāo)法）36-37
• 2.2 取健康人的抗凝血酶 III（AT-III）與 TNHH 進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)37-42
• 2.2.1 TNHH 與 AT-III 的免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)37-40
• 2.2.2 TNHH 與 AT-III 的抗凝血酶 III:A 活性檢測(cè)（發(fā)色底物顯色法）40-42
• 2.3 取健康人的纖維蛋白溶酶原（PLG）與 TNHH 進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)42-47
• 2.3.1 TNHH 與 PLG 的免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)42-45
• 2.3.2 TNHH 與 PLG 的 D-二聚體轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（ELISA 法）45-47
• 2.4 重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）的 CADD 靶點(diǎn)驗(yàn)證47-49
• 2.4.1 重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）分別與 FIB，AT-III 和 PLG 進(jìn)行分子對(duì)接（DOCK）實(shí)驗(yàn)47-49
• 3. TNHH 臨床新靶點(diǎn)研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果與實(shí)驗(yàn)討論49-69
• 3.1 取健康人的纖維蛋白原（FIB）與 TNHH 進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-52
• 3.1.1 TNHH 與 FIB 免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-50
• 3.1.2 TNHH 與 FIB 的分子篩 HPLC 外標(biāo)法分析結(jié)果50-51
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)討論51-52
• 3.2 取健康人的抗凝血酶 III 與 TNHH 進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-55
• 3.2.1 TNHH 與 AT-III 免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-53
• 3.2.2 TNHH 與 AT-III 的 AT-III：A 活性分析結(jié)果53-54
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)討論54-55
• 3.3 取健康人的纖溶酶原（PLG）與 TNHH 進(jìn)行體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-58
• 3.3.1 TNHH 與 PLG 免疫印跡鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-56
• 3.3.2 TNHH 與 PLG 的 D-二聚體轉(zhuǎn)換實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-57
• 3.3.3 實(shí)驗(yàn)討論57-58
• 3.4 重組白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）的靶點(diǎn)驗(yàn)證結(jié)果58-69
• 3.4.1 TNHH 與 FIB、AT-III 和 PLG 的 CADD 靶點(diǎn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-67
• 3.4.2 實(shí)驗(yàn)討論67-69
• 4. 全文討論與結(jié)論69-79
• 4.1 討論69-78
• 4.1.1 展望77
• 4.1.2 不足之處77-78
• 4.2 結(jié)論78-79
• 致謝79-81
• 參考文獻(xiàn)81-85
• 附錄 英文縮寫(xiě)索引85-87
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的研究成果87

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 葛月賓;王麗君;廖矛川;;計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的應(yīng)用[J];科技創(chuàng)業(yè)月刊;2008年12期

2 鄭彥;呂莉;;計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)在藥物合成中的應(yīng)用[J];齊魯藥事;2008年10期

3 李洪林,沈建華,羅小民,沈旭,朱維良,王希誠(chéng),陳凱先,蔣華良;虛擬篩選與新藥發(fā)現(xiàn)[J];生命科學(xué);2005年02期

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本文編號(hào)：1079659