本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌生物膜形成相關(guān)基因的篩選與鑒定

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核分枝桿菌 MycoMarT7噬菌體轉(zhuǎn)座子 菌落形態(tài) 生物膜

【摘要】：目的通過菌落表型變化并結(jié)合生物膜生長缺陷篩選并鑒定可能與結(jié)核分枝桿菌生物膜形成相關(guān)基因。 方法利用帶有Himar1轉(zhuǎn)座子的MycoMarT7轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)建立結(jié)核分枝桿菌H37Ra隨機(jī)插入突變庫；篩選細(xì)菌表面結(jié)構(gòu)發(fā)生變化和生物膜形成有變化的突變菌株；運(yùn)用T-A克隆法并結(jié)合抗性標(biāo)記挽救法獲得突變菌株的隨機(jī)插入基因側(cè)翼序列，使用通用引物M13F和M13R進(jìn)行測序，將測序結(jié)果與結(jié)核分枝桿菌H37Ra全基因組序列進(jìn)行比對，并分析判斷從而鑒定轉(zhuǎn)座子插入位點。并運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析預(yù)測突變基因的功能，進(jìn)而鑒定出與菌落形態(tài)或者生物膜形成相關(guān)基因。 結(jié)果成功構(gòu)建庫容量約為1×104結(jié)核分枝桿菌轉(zhuǎn)座子隨機(jī)插入突變文庫。通過菌落形態(tài)變化及生物膜缺陷表型篩選出39株突變株，成功鑒定出插入位點的突變菌株有16株，涉及16個基因發(fā)生突變，與野生株相比，其中8株成膜能力未發(fā)生任何變化，在20~25d即可形成生物膜，而編號P7C8的突變株為生物膜完全缺陷株，細(xì)菌培養(yǎng)觀察至7周時間，依然未見生物膜形成表型；其余7株均出現(xiàn)生物膜生長或成熟延遲情況，其中2株成膜時間為30d時在氣液界面才出現(xiàn)薄膜樣，5株在40d左右才開始在氣液表面形成肉眼可見的薄膜層。運(yùn)用生物信息學(xué)方法預(yù)測，16個發(fā)生突變的基因中5個與脂質(zhì)代謝相關(guān)，4個與細(xì)胞壁合成相關(guān)、2個與中間代謝和呼吸作用相關(guān)、1個調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)基因，1個毒力相關(guān)基因，1個PE/PPE家族基因，還有2個功能未知基因。結(jié)合生物膜形成缺陷分析，其中8個基因可能與H37Ra體外生物膜的形成相關(guān)。 結(jié)論本研究以結(jié)核分枝桿菌H37Ra菌株為研究對象，成功構(gòu)建庫容量約為1×104結(jié)核分枝桿菌轉(zhuǎn)座子隨機(jī)插入突變文庫。以菌落形態(tài)變化及生物膜缺陷表型為切入點，篩選獲得生物膜生長受損突變株及可能與結(jié)核分枝桿菌生物膜形成相關(guān)的基因信息，，為結(jié)核分枝桿菌生物膜形成相關(guān)基因的分離鑒定提供新方法，同時為研究其致病機(jī)制及生物膜形成調(diào)控機(jī)制提供候選基因，為后續(xù)深入開展生物膜形成機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 MycoMarT7噬菌體轉(zhuǎn)座子 菌落形態(tài) 生物膜
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378.911
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 中英文縮略詞表8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-36
• 結(jié)果36-43
• 討論43-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 綜述50-59
• 綜述參考文獻(xiàn)56-59
• 致謝59-60
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章60-61
• 個人簡歷61

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本文編號：1078975