本文關(guān)鍵詞：FoxM1核酸探針的構(gòu)建及應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 核酸探針 FoxM1 蛋白 制備 應(yīng)用 檢測

【摘要】：核酸探針，是指能夠與特定的靶分子發(fā)生特異性的相互作用，并被特定方法探知的分子，是一種可以從分子水平上進(jìn)行設(shè)計、合成以及應(yīng)用的新興研究手段，為推動分子生物學(xué)和分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展起了重要的作用。 本論文以ForkheadBox（Fox）轉(zhuǎn)錄因子家族中的FoxM1為靶標(biāo)，建立了一套篩選能夠特異性、高親和力靶定轉(zhuǎn)錄因子FoxM1的核酸適配體（aptamer）的SELEX（指數(shù)富集配體進(jìn)化技術(shù)）體系，并對篩選得到的核酸適配體與靶物質(zhì)的特異性與親和力進(jìn)行了驗證。在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了一種利用分子信標(biāo)（MB）簡單、快速、超微量檢測脫氧核酶酶切產(chǎn)物的方法。 主要工作如下： 1．建立了一套篩選特定蛋白的SELEX技術(shù)方法。運用已構(gòu)建正確的PGEX-4T-1-GST-FoxM1-220-335以及PGEX-4T1-GST質(zhì)粒，在大腸桿菌中表達(dá)并純化了GST-FoxM1-220-335融合蛋白及其GST蛋白，經(jīng)過八輪體外篩選得到了四條核酸適配體。 2．對篩選得到的核酸適配體對靶物質(zhì)的其特異性與親和力進(jìn)行了驗證。經(jīng)熒光檢測、核酸凝膠阻滯實驗（EMSA）和免疫共沉淀實驗（co-ip）等證實篩選得到的核酸適配體能夠特異性、高親和力的靶定轉(zhuǎn)錄因子FoxM1。 3．基于微球富集技術(shù)，利用篩選得到的核酸適配體在體外檢測GST-FoxM1-220-335。 4．在附錄B中，我們建立了一種利用分子信標(biāo)簡單、快速、超微量檢測脫氧核酶酶切產(chǎn)物的方法。分子信標(biāo)（MB）被用來檢測模擬的HCV-RNA酶切產(chǎn)物，檢測下限為0.02nmol/L。
【關(guān)鍵詞】：核酸探針 FoxM1 蛋白 制備 應(yīng)用 檢測
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文縮寫7-8
• 目錄8-10
• 第1章 緒論10-16
• 1.1 前言10
• 1.2 SELEX 技術(shù)簡介10-11
• 1.3 核酸適配體（aptamer）簡介11-12
• 1.4 轉(zhuǎn)錄因子 FoxM1 簡介12-13
• 1.5 分子信標(biāo)簡介13-14
• 1.6 本文構(gòu)思14-16
• 1.6.1 研究目的14
• 1.6.2 研究方法及技術(shù)14-16
• 第2章 GST-FoxM1-220-335 融合蛋白的純化16-22
• 2.1 前言16-17
• 2.2 實驗材料17-18
• 2.3 實驗方法18-19
• 2.3.1 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與小量提取18-19
• 2.3.2 重組質(zhì)粒的酶切與鑒定19
• 2.3.3 GST-FoxM1-220-335 融合蛋白的純化19
• 2.4 實驗結(jié)果19-21
• 2.4.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和鑒定19-20
• 2.4.2 GST-FoxM1-220-335 融合蛋白的純化20-21
• 2.5 討論21-22
• 第3章 轉(zhuǎn)錄因子 FoxM1 核酸探針的構(gòu)建22-38
• 3.1 前言22-23
• 3.2 實驗材料23-24
• 3.3 實驗方法24-31
• 3.3.1 SELEX 文庫的構(gòu)建及其引物的設(shè)計24-25
• 3.3.2 轉(zhuǎn)錄因子 FoxM1 核酸適配體的篩選25-27
• 3.3.3 克隆測序及二級結(jié)構(gòu)分析27
• 3.3.4 核酸適配體與 FoxM1 結(jié)合能力分析27-31
• 3.4 實驗結(jié)果31-36
• 3.4.1 轉(zhuǎn)錄因子 FoxM1 核酸適配體的篩選31-33
• 3.4.2 核酸適配體與 FoxM1 結(jié)合能力分析33-36
• 3.5 討論36-38
• 第4章 基于微球富集的核酸適配子體外檢測轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子 FoxM138-43
• 4.1 前言38-39
• 4.2 實驗材料39
• 4.3 實驗方法39-41
• 4.3.1 核酸探針的設(shè)計39-40
• 4.3.2 實驗條件優(yōu)化40
• 4.3.3 基于微球富集技術(shù)利用核酸適配子體外檢測轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子 FoxM140-41
• 4.4 實驗結(jié)果41-42
• 4.4.1 實驗條件優(yōu)化41-42
• 4.4.2 基于微球富集核酸適配子體外檢測靶蛋白 GST-FoxM1-220-33542
• 4.5 討論42-43
• 結(jié)論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 附錄A 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄49-50
• 附錄B 分子信標(biāo)用于脫氧核酶切割產(chǎn)物的快速檢測50-55
• B.1 前言50
• B.2 實驗材料50-51
• B.3 實驗方法51-52
• B.3.1 人工合成的脫氧核酶酶切產(chǎn)物的檢測51-52
• B.3.2 脫氧核酶模擬的 HCV-RNA 酶切產(chǎn)物的檢測52
• B.4 實驗結(jié)果52-54
• B.4.1 人工合成的脫氧核酶酶切產(chǎn)物的檢測52-53
• B.4.2 脫氧核酶模擬的 HCV-RNA 酶切產(chǎn)物的檢測53-54
• B.5 討論54-55
• 附錄C 常用緩沖液和試劑配方55-58
• 致謝58

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余曉峰;嚴(yán)軼;嚴(yán)偉民;姚劍;鄭海松;;SELEX技術(shù)在致病菌檢測中應(yīng)用進(jìn)展[J];家禽科學(xué);2011年07期

2 徐發(fā)良;肖覺;;SELEX技術(shù)的靶標(biāo)范圍拓展[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年04期

3 劉玲玲;韓躍武;祝凱華;李真真;韓亞萍;路艷;王春霞;;慢性髓細(xì)胞性白血病K562細(xì)胞適體的篩選與鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年13期

4 徐敦明;吳敏;鄒遠(yuǎn);張強(qiáng);吳崔晨;周昱;劉賢進(jìn);;核酸適體技術(shù)在食品安全分析中的應(yīng)用[J];分析化學(xué);2011年06期

5 王一嫻;葉尊忠;斯城燕;應(yīng)義斌;;適配體生物傳感器在病原微生物檢測中的應(yīng)用[J];分析化學(xué);2012年04期

6 陳棟;黃慶;黃君富;府偉靈;;適配子及其臨床診斷的應(yīng)用進(jìn)展[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

7 王麗;桑宏慶;;核酸適體及其在食品安全領(lǐng)域的應(yīng)用[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報;2013年05期

8 屈鋒;劉允;任肖敏;趙新穎;張經(jīng)華;;毛細(xì)管電泳在核酸適配體研究及核酸適配體篩選中的應(yīng)用[J];化學(xué)進(jìn)展;2009年Z2期

9 邵可可;王惠民;馬達(dá);;SELEX技術(shù)中分離方法的研究進(jìn)展[J];臨床檢驗雜志;2011年06期

10 陳樺;葛廷;王小琦;廖世奇;馬瑾;王黎;龐鑫;張寧;張麗瓊;張潔瑜;王曉清;;靶標(biāo)替換消減SELEX技術(shù)篩選小鼠IgG Fc片段的DNA配基及其活性鑒定[J];蘭州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚朗;候祺;鄧一夫;;SELEX技術(shù)在毒理學(xué)研究中的應(yīng)用[A];中國毒理學(xué)會生化與分子毒理專業(yè)委員會第六屆全國學(xué)術(shù)會議、中國毒理學(xué)會遺傳毒理專業(yè)委員會第五屆全國學(xué)術(shù)會議、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議、廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董喬梅;食管癌相關(guān)分子功能和納米材料量子點新特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 程偉;腫瘤相關(guān)標(biāo)志物及細(xì)胞表面聚糖檢測新方法[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

3 蒲穎;高胰島素處理相關(guān)核酸適體的篩選及基于核酸適體技術(shù)的胰島素檢測[D];中南大學(xué);2011年

4 吳紅兵;Ras蛋白ssDNA適配子的篩選與鑒定[D];武漢大學(xué);2011年

5 牛文澤;識別氨基酸序列的aptamer蛋白配體研究[D];華東師范大學(xué);2006年

6 李曉霞;凝血酶和可卡因電化學(xué)適體傳感器的研究[D];陜西師范大學(xué);2008年

7 魯娜;基于功能核酸組裝結(jié)構(gòu)的腺苷和汞離子傳感器研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2009年

8 張朝陽;rHuEPO的特異性寡核苷酸適配體的篩選、評價及其應(yīng)用[D];沈陽藥科大學(xué);2009年

9 王麗;四種有機(jī)磷農(nóng)藥核酸適體的篩選、鑒定及其活性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

10 吳世嘉;基于上轉(zhuǎn)換熒光納米探針的高靈敏微生物毒素檢測方法研究[D];江南大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郎春燕;CP4-EPSPS轉(zhuǎn)基因蛋白的適體篩選與親和性分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

2 李衛(wèi)濱;篩選環(huán)孢霉素A適體的Bio Mag-SELEX方法的建立[D];福建醫(yī)科大學(xué);2006年

3 許少涵;體外SELEX法篩選淋病奈瑟菌適體方法的建立[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

4 劉豐偉;體外篩選銅綠假單胞菌適體的研究及初步應(yīng)用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

5 曾賢銘;B淋巴細(xì)胞活化因子特異的適體進(jìn)化及功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 馮香玲;采用SELEX技術(shù)篩選脫氧雪腐鐮刀菌烯醇適配子的初步研究[D];南昌大學(xué);2007年

7 秦川;SELEX技術(shù)篩選青霉素類抗生素適體及其運用方法的初步探索[D];西南大學(xué);2008年

8 曾燕麗;體外SELEX技術(shù)篩選滅活銅綠假單胞菌適體的研究及初步應(yīng)用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

9 張月俠;蛋白質(zhì)寡核苷酸適配體的篩選與應(yīng)用研究[D];山東師范大學(xué);2009年

10 鄧珂;核酸適體探針對血液腫瘤細(xì)胞的識別及其穩(wěn)定性研究[D];湖南大學(xué);2009年

，

本文編號：1066789