發(fā)布時(shí)間：2017-10-18 05:31

  本文關(guān)鍵詞：AphA蛋白對(duì)副溶血弧菌vopT的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 副溶血弧菌 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 AphA vopT

【摘要】：【目的】研究副溶血弧菌AphA對(duì)vop T的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。【方法】提取野生株(WT)和aphA突變株(ΔaphA)的總RNA,采用引物延伸實(shí)驗(yàn)研究vop T的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),并根據(jù)產(chǎn)物的豐度差異判斷AphA對(duì)其調(diào)控關(guān)系。分別將WT和ΔaphA的總RNA逆轉(zhuǎn)錄成c DNA,利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR進(jìn)一步研究AphA對(duì)靶基因的調(diào)控關(guān)系。將vop T的啟動(dòng)子區(qū)克隆入p HRP309質(zhì)粒的β-半乳糖苷酶基因上游,構(gòu)建Lac Z重組質(zhì)粒,并將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入WT和ΔaphA中,通過測(cè)定并比較兩株菌中β-半乳糖苷酶活性的差異來判定AphA對(duì)vop T的調(diào)控關(guān)系。PCR擴(kuò)增靶基因整個(gè)啟動(dòng)子區(qū)DNA序列,并純化His-AphA蛋白,利用凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(EMSA)驗(yàn)證His-AphA對(duì)靶基因啟動(dòng)子區(qū)是否具有直接的結(jié)合作用�！窘Y(jié)果】vop T只有一個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)A(-86),且其轉(zhuǎn)錄活性受AphA的間接抑制。RT-PCR和EMSA結(jié)果顯示AphA對(duì)vtrA的轉(zhuǎn)錄也具有間接的抑制作用�！窘Y(jié)論】AphA間接抑制vop T轉(zhuǎn)錄,且該間接抑制作用與VtrA無關(guān)。
【作者單位】： 河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院微生物科;江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院;北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 副溶血弧菌 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 AphA vopT
【基金】：江蘇大學(xué)高級(jí)人才科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(No.14JDG166) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31170127)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一種嗜鹽的革蘭氏陰性弧菌,主要棲息于海水和海產(chǎn)品中。當(dāng)人們食用生的或未被徹底煮熟的海產(chǎn)品時(shí),可能會(huì)被其感染而引起以腹痛、腹瀉、惡心、發(fā)熱等為主要癥狀的急性胃腸炎[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示副溶血弧菌已成為沿海地區(qū)引發(fā)食物中毒的

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1053210