本文關(guān)鍵詞：左旋多巴對馬爾尼菲青霉黑素合成的影響、藥敏及其黑素抗體的制備

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【摘要】：目的探索左旋多巴（L-DOPA）誘導(dǎo)馬爾尼菲青霉（Penicilliummarneffei, PM）酵母相合成黑素的影響因素，研究黑素化后的PM對常見抗真菌藥物的敏感性是否改變以及PM黑素的抗原性。 方法將PM臨床人分離株GXMU121011接種于沙氏培養(yǎng)平皿（SDA）中37℃培養(yǎng)7天，觀察不同L-DOPA濃度（0.1mM，1mM，3mM，6mM，10mM）和不同PM菌接種密度（105CFU/ml，106CFU/ml，107CFU/ml）對PM黑素合成的影響；使用紙片法進行體外抗真菌藥敏試驗，，分別測定伊曲康唑、氟康唑和兩性霉素B對8株P(guān)M菌株在添加L-DOPA和無L-DOPA培養(yǎng)時的抑菌圈大�。焕肞M黑素作為抗原經(jīng)腹腔免疫BALB/c小鼠，在PEG介導(dǎo)下小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進行融合反應(yīng)制備單克隆抗體，通過凝集試驗和ELISA法檢測免疫小鼠血清和所制備PM黑素抗體的效價，免疫熒光法檢測免疫小鼠血清中抗體與黑素化培養(yǎng)PM酵母相細(xì)胞結(jié)合情況；此外，采集PM感染患者血清，通過凝集試驗檢測血清中的抗體與PM黑素顆粒凝集反應(yīng)情況。 結(jié)果（1）①PM受試菌株在含不同多巴濃度的SDA平皿中37℃培養(yǎng)7天后，含L-DOPA的菌落或菌落周圍培養(yǎng)基顏色均有不同程度的加深或變黑，而不含L-DOPA的則未見明顯改變；②L-DOPA濃度由0.1mM增加至1mM時，PM菌落變黑程度隨之增加；L-DOPA濃度處在1mM、3mM時菌落顏色最黑，菌落變黑程度隨著濃度的遞增逐漸降低；L-DOPA濃度在10mM時菌落出現(xiàn)形態(tài)皺縮。（2）不同接種密度的PM菌懸液在含1mM L-DOPA的SDA平皿中37℃培養(yǎng)7天后，菌落顏色變黑程度不一，菌落顏色隨著菌密度的逐漸升高而加深。（3）8株P(guān)M菌株在含L-DOPA和不含L-DOPA（對照組）的SDA培養(yǎng)，48~96h測量抑菌圈大小。測得伊曲康唑、兩性霉素B和氟康唑?qū)M抑菌圈平均直徑依次為：伊曲康唑，26.88±1.81mm（對照組，34.13±1.81mm）；兩性霉素B，17.13±2.59mm（對照組，22.25±4.80mm）；氟康唑，19.50±6.46mm（對照組，25.87±7.34mm）；含L-DOPA和不含L-DOPA培養(yǎng)兩組比較均有顯著性差異（P0.05）。（4）①PM黑素腹腔免疫接種小鼠4周后，小鼠均出現(xiàn)不同程度腹水和脫毛；②PM黑素免疫小鼠的腹水、血清和融合雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液均與PM黑素顆粒和人工合成DOPA黑素產(chǎn)生凝集反應(yīng)，ELISA法檢測示免疫小鼠的腹水、血清和融合雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液中抗體OD值依次為1.635±0.085、1.820±0.249、0.671±0.142。免疫熒光法顯示當(dāng)加入免疫小鼠血清，L-DOPA培養(yǎng)的PM酵母相細(xì)胞壁出現(xiàn)綠色熒光。PM感染患者血清與PM黑素顆粒出現(xiàn)凝集反應(yīng)。 結(jié)論（1）L-DOPA的濃度和接種菌落的密度影響PM黑素的生成。（2）以L-DOPA作為底物黑素化培養(yǎng)酵母相PM，其對抗真菌藥物伊曲康唑、兩性霉素B和氟康唑的敏感性下降。（3）PM黑素顆�？梢源碳C體產(chǎn)生抗體。
【關(guān)鍵詞】：馬爾尼菲青霉 左旋多巴 黑素 抗體 體外藥敏試驗
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R914;R392
【目錄】：

• 主要英文縮略詞5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-15
• 第一部分 左旋多巴對 PM 黑素合成影響、藥敏15-39
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-31
• 討論31-39
• 第二部分 PM 黑素抗體的制備39-60
• 材料與方法39-47
• 結(jié)果47-49
• 附圖49-55
• 討論55-60
• 小結(jié)60-61
• 展望61-62
• 參考文獻62-68
• 綜述68-88
• 參考文獻81-88
• 致謝88-90
• 發(fā)表文章90

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 丘立文,彭冬先,徐華,賈娟,車小燕,袁國勇;抗馬爾尼菲青霉單克隆抗體的制備和鑒定[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年01期

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3 劉棟華;譚升順;羅紅;劉曉軍;;氟康唑誘導(dǎo)菌絲相馬爾尼菲青霉菌產(chǎn)67.5kDa蛋白[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2006年12期

本文編號：1052305