發(fā)布時間：2017-10-17 19:37

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲表面抗原SAG2基因的克隆表達(dá)純化及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲表面抗原2(SAG2)基因重組質(zhì)粒并在大腸埃希菌中表達(dá)。方法根據(jù)SAG2基因序列設(shè)計并合成引物,用PCR法從弓形蟲基因組DNA中擴(kuò)增SAG2基因片段,再克隆到p GEX-4T載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定并測序后,在大腸埃希菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析并純化,以Western blotting分析其反應(yīng)原性。結(jié)果 SAG2基因PCR產(chǎn)物大小約為561 bp,與預(yù)期相符。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及PCR鑒定構(gòu)建成功,測序結(jié)果與已知序列吻合。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)的SAG2融合蛋白分子量約為47 ku,該蛋白可被GST標(biāo)簽抗體識別。結(jié)論成功重組了弓形蟲SAG2基因,表達(dá)蛋白具有反應(yīng)原性。
【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 山東省寄生蟲病防治研究所;濟(jì)南大學(xué) 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 表面抗原 基因克隆 融合蛋白 蛋白純化
【基金】：山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2009ZRC03083) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項(xiàng)目(2011HW049、2014WS0330)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲病(Toxoplasmosis)是由專性細(xì)胞內(nèi)寄生的致病原蟲——剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)引起的全球性人獸共患寄生蟲病[1],能引起人類多種先天及獲得性疾病,造成多臟器及組織損傷。本病為全身性疾病,人群普遍易感,但多為隱性感染,發(fā)病者臨床表現(xiàn)復(fù)雜并缺乏特異性,易誤診,對

【參考文獻(xiàn)】

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5 何艷燕;張述義;朱民;錢e，

本文編號：1050658