本文關(guān)鍵詞：CecropinA-thanatin雜合肽對小鼠生長性能及免疫功能的影響

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【摘要】：目的 本研究測定了課題組前期合成、表達的CecropinA-thanatin雜合肽對臨床分離的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌的體外抑菌活性，并通過動物實驗，對該雜合肽不同劑量、不同給藥途徑對小鼠生長性能及免疫功能的影響進行研究和探討，為該基因工程抗菌肽的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 方法 1以課題組人工設(shè)計合成的CecropinA-thanatin雜合肽為研究對象，進行大規(guī)模的蛋白表達，對不同批次的表達產(chǎn)物進行混合后測定混合液的MIC，，并對臨床分離的革蘭氏陽性菌（金葡菌）和革蘭氏陽性菌陰性菌（大腸桿菌）進行體外抑菌活性的測定； 2選擇3－4周齡、近交系BALB/c小鼠，進行分組、稱重；處理因素分別為高、中、低劑量灌胃抗菌肽，中劑量腹腔注射抗菌肽，中劑量灌胃慶大霉素，空白對照組灌胃pPICZαA空載體轉(zhuǎn)化酵母的上清，各處理方法連續(xù)處理4周；4周后脫臼處死小鼠，稱量體重、脾臟、胸腺； 3腹腔注射2%SRBC免疫小鼠，脫臼處死小鼠后取脾進行脾淋巴增值試驗、抗體細胞生成試驗； 4提前一小時注射5%雞紅細胞，脫臼處死小鼠后吸取腹腔滲出液涂片鏡檢，油鏡下計算巨噬細胞吞噬率、巨噬細胞吞噬指數(shù)； 5摘眼球取血后收集血清，ELISA試驗檢測血清中的TNF-α含量；收集小鼠的腸組織標本，進行熒光定量PCR試驗檢測空腸組織中的TNF-α含量。 結(jié)果 1大規(guī)模表達了CecropinA-thanatin雜合肽，經(jīng)測定雜合肽混合液的MIC為0.45×10-3mol/L，經(jīng)體外抑菌活性測定，CecropinA-thanatin雜合肽對革蘭陽性菌(金葡菌)和革蘭氏陰性菌(大腸桿菌)均具有明顯的抑菌活性； 2在不同處理因素的作用下，4周后各組小鼠之間的體重增長率有差別，高劑量CecropinA-thanatin雜合肽灌胃組小鼠的生長性能明顯優(yōu)于其他組小鼠的生長性能； 3檢測各組小鼠的免疫器官指數(shù)，在不同處理因素的作用下，4周后各組小鼠之間的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)有差別，灌胃高劑量CecropinA-thanatin雜合肽可以顯著提高小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)； 4檢測各組小鼠的脾淋巴細胞增殖能力，在不同處理因素的作用下，4周后各組小鼠之間的脾淋巴細胞刺激指數(shù)有差別，灌胃、腹腔注射中劑量CecropinA-thanatin雜合肽均可以提高小鼠的脾淋巴細胞刺激指數(shù)； 5檢測各組小鼠的抗體生成細胞數(shù)，在不同處理因素的作用下，4周后各組小鼠之間的抗體生成細胞數(shù)有差別，灌胃中劑量CecropinA-thanatin雜合肽可以提高小鼠的抗體生成細胞數(shù)； 6檢測各組小鼠的巨噬細胞吞噬功能，在不同處理因素的作用下，4周后各組小鼠之間的巨噬細胞吞噬率、巨噬細胞吞噬指數(shù)有差別，灌胃中劑量CecropinA-thanatin雜合肽可以顯著提高小鼠的巨噬細胞吞噬功能； 7檢測各組小鼠血清、空腸組織中的TNF-α蛋白水平及mRNA表達水平，在不同處理因素的作用下，4周后各組小鼠之間的TNF-α的濃度及mRNA表達水平有差別，灌胃低劑量CecropinA-thanatin雜合肽、慶大霉素可以顯著提高小鼠的TNF-α的濃度及mRNA表達水平。 結(jié)論 大批量的表達了人工合成的CecropinA-thanatin雜合肽，混合液經(jīng)MIC試驗測定其MIC值為0.45×10~(-3)mol/L，體外抑菌實驗證實其對臨床分離的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌均有抑菌活性；本研究在此研究基礎(chǔ)上對該雜合肽進行動物實驗，驗證其在體內(nèi)的生物功能以及該CecropinA-thanatin雜合肽對小鼠的生長性狀及免疫功能的影響，得出結(jié)論為CecropinA-thanatin雜合肽對小鼠的生長性能有作用，可以提高小鼠的體重增長率；合適的CecropinA-thanatin雜合肽給藥劑量和給藥途徑可以顯著提高小鼠的免疫器官指數(shù)，細胞、體液免疫能力，巨噬細胞吞噬能力，以上實驗結(jié)果說明課題組前期設(shè)計、合成、表達的CecropinA-thanatin雜合肽可以提高小鼠的生長性能及免疫功能。為該基因工程抗菌肽的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：CecropinA-thanatin雜合肽 小鼠 免疫功能
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 中英文縮略詞表11-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-36
• 實驗結(jié)果36-48
• 討論48-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-56
• 綜述56-64
• 綜述參考文獻62-64
• 致謝64-65
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄65-66
• 個人簡歷66

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1 陳輝華;陳曉光;;惡性瘧原蟲動合子表面蛋白單鏈抗體與按蚊Cecropin A融合基因的構(gòu)建、原核表達及生物活性的初步評價[J];中國病原生物學雜志;2008年05期

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10 陳潔;陳e

本文編號：1032308