發(fā)布時(shí)間：2017-10-13 23:01

  本文關(guān)鍵詞：壇紫菜R-藻藍(lán)蛋白的抗食物過(guò)敏性質(zhì)研究

  更多相關(guān)文章： 原肌球蛋白 食物過(guò)敏 小鼠模型 壇紫菜 R-藻藍(lán)蛋白 抗過(guò)敏活性 TH細(xì)胞極化

【摘要】：在過(guò)去的幾十年中,食物過(guò)敏的發(fā)生率在全世界范圍內(nèi)有上升趨勢(shì)。食物過(guò)敏常常會(huì)引起皮膚、消化道或呼吸道等部位一系列病理反應(yīng)的發(fā)生,嚴(yán)重的還會(huì)危及到患者的生命。通過(guò)開(kāi)發(fā)新型抗過(guò)敏性活性物質(zhì)預(yù)防或治療食物過(guò)敏逐漸成為一個(gè)新的研究趨勢(shì)。R-藻藍(lán)蛋白(R-phycocyanin,RPC)是存在于紅藻中的一類(lèi)光合色素,在光合作用過(guò)程中發(fā)揮傳遞光能的作用。之前研究結(jié)果顯示RPC具有免疫調(diào)節(jié)的作用,但是關(guān)于RPC抗食物過(guò)敏的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。探究RPC的抗食物過(guò)敏功效,并深入研究其抗食物過(guò)敏機(jī)理,對(duì)于開(kāi)發(fā)新型抗過(guò)敏保健品或原料藥具有重要的意義。本研究首先通過(guò)飽和硫酸銨鹽析、等電點(diǎn)沉淀等方法完成擬穴青蟹(Scylla paramamosain)主要過(guò)敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)的分離純化,Western-blotting證實(shí)從擬穴青蟹鹽溶性肌原纖維中純化得到的38 kDa蛋白為T(mén)M。然后,通過(guò)飽和硫酸銨鹽析、柱層析等方法從壇紫菜(Porphyra haitanensis)中純化得到RPC,純度為A620/A2806.0,紫外-可見(jiàn)分光光度法分析顯示純化得到的藍(lán)色蛋白在615 nm、555 nm處有兩個(gè)特征吸收峰,證明其為RPC;Native-PAGE顯示為一條帶,說(shuō)明RPC已經(jīng)高度純化;SDS-PAGE顯示RPC由α、β兩個(gè)亞基組成,分子量分別為17.7 kDa、20.5 kDa。利用純化得到的TM免疫小鼠,建立食物過(guò)敏動(dòng)物模型評(píng)價(jià)RPC的抗過(guò)敏功效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,二次免疫后致敏小鼠血清中免疫球蛋白E(IgE)水平是免疫前的3倍,血清、糞便中的組胺含量分別升高到大約150 ng/mL、15μg/mg,與對(duì)照組有顯著差異,證明已經(jīng)建立食物過(guò)敏動(dòng)物模型;另外,RPC能夠顯著降低小鼠血清中TM特異性IgE及血清、糞便中的組胺水平,初步確定RPC具有抗食物過(guò)敏效果。隨后,利用TM混合RPC刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中食物過(guò)敏相關(guān)的細(xì)胞因子分泌量和胞內(nèi)細(xì)胞因子基因表達(dá)量。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,TM能夠顯著提高TH2型淋巴細(xì)胞因子IL-13(120pg/m L)、IL-4(300 pg/mL)的蛋白分泌量和基因表達(dá)量,RPC則能夠降低TH2型,但促進(jìn)TH1型淋巴細(xì)胞因子的蛋白分泌量和基因表達(dá)量,并且這種調(diào)節(jié)作用具有明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系。由此推斷RPC是通過(guò)調(diào)節(jié)TH淋巴細(xì)胞由TH2型向TH1型轉(zhuǎn)化發(fā)揮抗食物過(guò)敏作用效果。研究還發(fā)現(xiàn)RPC能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生大量IFN-γ(1600 pg/mL),較其它細(xì)胞因子作用效果顯著。因此,我們進(jìn)一步利用磷酸激酶抑制劑探究RPC誘導(dǎo)IFN-γ產(chǎn)生的信號(hào)通路途徑。結(jié)果顯示,由RPC誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ是通過(guò)JAK2和JNK信號(hào)途徑。綜上所述,從壇紫菜中提取得到的高純度RPC能夠降低血清特異性IgE及組胺水平,并通過(guò)調(diào)節(jié)TH細(xì)胞向TH1型轉(zhuǎn)化發(fā)揮抗食物過(guò)敏功效;RPC通過(guò)JAK2和JNK兩條途徑誘導(dǎo)產(chǎn)生TH1型淋巴細(xì)胞因子IFN-γ。
【關(guān)鍵詞】：原肌球蛋白 食物過(guò)敏 小鼠模型 壇紫菜 R-藻藍(lán)蛋白 抗過(guò)敏活性 TH細(xì)胞極化
【學(xué)位授予單位】：集美大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：Q946;R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要符號(hào)表11-12
• 第1章 引言12-21
• 1.1 食物過(guò)敏和食物過(guò)敏原12-13
• 1.2 食物過(guò)敏機(jī)理13-17
• 1.2.1 TH_1型免疫細(xì)胞因子IFN-γ14
• 1.2.2 TH_2型免疫細(xì)胞因子IL-4、IL-13和IL-514-15
• 1.2.3 其它免疫細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子15-16
• 1.2.4 TH淋巴細(xì)胞的極化16-17
• 1.4 食物過(guò)敏的治療17-18
• 1.4.1 抗原特異性治療17-18
• 1.4.2 非抗原特異性治療18
• 1.5 抗過(guò)敏的活性物質(zhì)18-20
• 1.5.1 益生菌和中草藥18
• 1.5.2 海藻中抗過(guò)敏的活性物質(zhì)18-20
• 1.6 本研究的目的和意義20-21
• 第2章 材料與方法21-34
• 2.1 材料21-25
• 2.1.1 原料21
• 2.1.2 試劑21-22
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用主要溶液及配制方法22-24
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備24-25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-34
• 2.2.1 擬穴青蟹TM的純化與鑒定25-27
• 2.2.2 壇紫菜RPC的純化、鑒定與光譜性質(zhì)分析27-28
• 2.2.3 食物過(guò)敏的BALB/c小鼠模型建立28-29
• 2.2.4 小鼠腹腔灌洗液的制備及細(xì)胞因子檢測(cè)29-30
• 2.2.5 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞因子檢測(cè)30-32
• 2.2.6 RPC誘導(dǎo)IFN-γ產(chǎn)生的胞內(nèi)信號(hào)途徑分析32-33
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析33-34
• 第3章 結(jié)果與分析34-55
• 3.1 TM的純化與鑒定34-35
• 3.1.1 TM的純化34
• 3.1.2 TM的鑒定34-35
• 3.2 RPC的純化、鑒定與光譜穩(wěn)定性分析35-38
• 3.2.1 RPC的純化35-36
• 3.2.2 RPC的鑒定36-37
• 3.2.3 RPC的光譜穩(wěn)定性分析37-38
• 3.3 小鼠體內(nèi)試驗(yàn)評(píng)價(jià)RPC抗食物過(guò)敏的效果38-42
• 3.3.1 小鼠的癥狀分析38
• 3.3.2 RPC對(duì)小鼠血清特異性IgE水平及組胺含量的影響38-42
• 3.3.3 小鼠空腸組織病理學(xué)分析42
• 3.4 RPC對(duì)淋巴細(xì)胞活力及胞內(nèi)因子表達(dá)量的影響42-53
• 3.4.1 RPC對(duì)淋巴細(xì)胞活力的影響42-43
• 3.4.2 RPC對(duì)小鼠腹腔灌洗液中細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用43-46
• 3.4.3 RPC對(duì)細(xì)胞因子蛋白水平的調(diào)節(jié)作用46-48
• 3.4.4 RPC對(duì)細(xì)胞因子基因水平的調(diào)節(jié)作用48-50
• 3.4.5 RPC對(duì)其它細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子基因水平的調(diào)節(jié)作用50-53
• 3.5 RPC誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平IFN-γ的作用機(jī)制53-55
• 3.5.1 RPC與TM的協(xié)同作用53-54
• 3.5.2 RPC通過(guò)JAK2及JNK途徑誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ54-55
• 第4章 討論與結(jié)論55-59
• 4.1 RPC的純化及光譜穩(wěn)定性分析55-56
• 4.2 RPC對(duì)TM特異性IgE水平及組胺含量的調(diào)節(jié)作用56-57
• 4.3 RPC對(duì)空腸組織過(guò)敏性炎癥的消除作用57
• 4.4 RPC對(duì)食物過(guò)敏相關(guān)細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)作用57-58
• 4.5 與RPC誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ相關(guān)的胞內(nèi)信號(hào)途徑58
• 4.6 結(jié)論與展望58-59
• 致謝59-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 附錄69-73
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及專(zhuān)利73

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本文編號(hào)：1027549