本文關鍵詞：胞磷膽堿對偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中TRPM8表達影響的研究

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【摘要】：目的:通過建立硝酸甘油偏頭痛大鼠模型，并對其進行預防性的藥物(氟桂利嗪、胞磷膽堿、聯(lián)合用藥)干預，留取顱底三叉神經(jīng)組織，觀察各組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中TRPM8及谷氨酸受體的表達變化。證實TRPM8通過谷氨酸受體的激活參與偏頭痛發(fā)作機制,也為臨床使用胞磷膽堿預防性治療偏頭痛提供理論和實驗依據(jù)。 方法:月齡為2-3個月的清潔級健康雄性Sprague-Dawley大鼠（體重180-200g），共50只，按隨機數(shù)字表法，將大鼠隨機分為空白對照組（n=10）和硝酸甘油模型組（n=40），其比例為1:4。空白對照組將生理鹽水(NS,10ml／kg)注入大鼠頸背部皮下，模型組依從Tassorelli法：在大鼠頸背部皮下注射硝酸甘油(NTG,10mg／kg)，每周注射一次，并進行行為學評分；隨后，再將模型組大鼠按之前分組方法隨機分為4組，分別為模型對照組（n=10，灌胃注射NS10ml／kg），氟桂利嗪組（n=10，1.25mg/Kg灌胃），胞磷膽堿組（n=10，0.1g/Kg）,聯(lián)合組（n=10，即，氟桂利嗪膠囊1.25mg/Kg，胞磷膽堿鈉0.1g/Kg），從第二周第一天開始，每只大鼠每周仍一次頸部皮下注射硝酸甘油，并同時每天給予不同藥物灌胃,第5周頸部皮下注射硝酸甘油，分別灌藥，4小時后，用10%水合氯醛麻醉，心臟灌注，開顱取顱底三叉神經(jīng)節(jié)，一部分用4%多聚甲醛固定并處于4℃保存：（1）采用HE染色法對三叉神經(jīng)組織進行染色，觀察三叉神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)變化情況；（2）采用免疫組織化學方法（SP法）檢測谷氨酸受體在各組偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中的表達變化；（3）另外一部分三叉神經(jīng)節(jié)在液氮中保存：采用Western blot檢測TRPM8受體蛋白的表達變化。 結(jié)果：每周每只大鼠行為學評分結(jié)果提示：模型對照組與空白對照組比較，大鼠行為學評分差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）,故成功建立了硝酸甘油偏頭痛大鼠模型；通過預防性藥物治療后，氟桂利嗪組,胞磷膽堿組，聯(lián)合組與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），提示各藥物對大鼠行為均存在影響。胞磷膽堿組與氟桂利嗪組,差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），提示胞磷膽堿減輕大鼠行為學表現(xiàn)效果優(yōu)于氟桂利嗪；聯(lián)合組與氟桂利嗪組、胞磷膽堿組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），聯(lián)合用藥預防控制偏頭痛大鼠的行為表現(xiàn)優(yōu)于單獨藥物干預。三叉神經(jīng)節(jié)HE染色提示：模型組與空白對照組三叉神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)一致，進而說明偏頭痛的發(fā)生可能不影響三叉神經(jīng)節(jié)的結(jié)構(gòu)變化，只發(fā)生了功能性紊亂；谷氨酸受體免疫組織化學（SP法）顯示：模型對照組中的谷氨酸受體呈強陽性表達，明顯高于空白對照組，氟桂利嗪組呈陽性，胞磷膽堿組呈弱陽性，聯(lián)合組幾乎是陰性表達，其OD值的單因素方差分析結(jié)果顯示：谷氨酸受體在每一個組中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；TRPM8的Westernblot結(jié)果顯示：模型對照組中TRPM8蛋白水平上調(diào)比空白對照組顯著，氟桂利嗪組稍下降，胞磷膽堿組比氟桂利嗪組下調(diào)幅度大，以聯(lián)合組下調(diào)幅度最為顯著，其灰度值經(jīng)單因素的方差分析提示TRPM8在每個組別中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。模型對照組第五周評分與TRPM8灰度值相關分析顯示：r=0.822,P0.01,差異有統(tǒng)計學意義，提示TRPM8的上調(diào)與評分呈正相關，TRPM8表達增加，評分升高，臨床癥狀越嚴重，應用胞磷膽堿預防干預后，TRPM8表達下調(diào)，提示胞磷膽堿通過降低TRPM8表達，，從而使行為學評分減低，癥狀減輕，提示胞磷膽堿有預防治療偏頭痛的作用。從模型對照組中谷氨酸受體OD值與TRPM8灰度值相關分析結(jié)果顯示：r=0.794,P0.01，差異有統(tǒng)計學意義，提示谷氨酸受體與TRPM8表達呈正相關，谷氨酸受體表達升高可能對TRPM8蛋白表達有促進協(xié)同作用。 結(jié)論：（1）偏頭痛發(fā)作時，三叉神經(jīng)組織在解剖結(jié)構(gòu)上無明顯改變，提示只是功能性異常。（2）TRPM8蛋白上調(diào)和谷氨酸受體的激活可能參與了偏頭痛發(fā)生機制，并具有協(xié)同作用；（3）胞磷膽堿作為一種神經(jīng)保護藥，可預防神經(jīng)功能紊亂，保護神經(jīng)元，在預防偏頭痛發(fā)作這類神經(jīng)性疼痛疾病中起到了可觀的效果，若聯(lián)合經(jīng)典預防性藥物效果更明顯。
【關鍵詞】：TRPM8 胞磷膽堿 谷氨酸 硝酸甘油 偏頭痛 大鼠
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R747.2;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-25
• 結(jié)果25-33
• 討論33-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-43
• 英漢縮略詞對照表43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-54
• 參考文獻51-54

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1 茍奎斌;王焱;金桂善;;胞磷膽堿嚴重不良反應探討[J];藥學情報通訊;1990年03期

2 劉和祥,成平,黃世勛,王以云;胞磷膽堿治療藥源性錐外系副作用[J];中國新藥與臨床雜志;2001年03期

3 李振來;;胞磷膽堿、尼可剎米的臨床新用途[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2008年22期

4 劉然江;;胞磷膽堿——循證醫(yī)學證據(jù)最強的神經(jīng)保護藥物[J];中國藥房;2011年12期

5 陳謙;;胞磷膽堿在臨床治療中的應用[J];天津藥學;2012年05期

6 蒲綺霞;黃雄;余國漢;;利培酮聯(lián)合胞磷膽堿治療老年期精神分裂癥的對照研究[J];臨床醫(yī)學工程;2013年08期

7 于正龍,楊榮先;胞磷膽堿引起休克4例[J];新藥與臨床;1988年05期

8 黃太國,戴培;胞磷膽堿的臨床應用[J];中國醫(yī)院藥學雜志;1992年10期

9 傅存玉,李富玲,劉培琳;胞磷膽堿治療流行性乙型腦炎[J];新藥與臨床;1992年06期

10 王新華;倪根珊;;胞磷膽堿的最新臨床應用[J];藥學情報通訊;1993年03期

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 蔡德山;口服給藥催醒胞磷膽堿[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2008年

2 徐軒;胞磷膽堿口服劑稱雄[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

3 傅德明;胞磷膽堿治療藥源性錐體外系障礙[N];中國醫(yī)藥報;2001年

4 萬同己;胞磷膽堿可用于腦出血急性期[N];中國醫(yī)藥報;2004年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 秦冬梅;胞磷膽堿對偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中TRPM8表達影響的研究[D];瀘州醫(yī)學院;2014年

2 程元元;rhG-CSF及胞磷膽堿對大鼠腦缺血再灌注損傷后Bcl-2和Bax表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2012年

本文編號：1027145