本文關(guān)鍵詞：胞磷膽堿對(duì)偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中TRPM8表達(dá)影響的研究

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【摘要】：目的:通過(guò)建立硝酸甘油偏頭痛大鼠模型，并對(duì)其進(jìn)行預(yù)防性的藥物(氟桂利嗪、胞磷膽堿、聯(lián)合用藥)干預(yù)，留取顱底三叉神經(jīng)組織，觀察各組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中TRPM8及谷氨酸受體的表達(dá)變化。證實(shí)TRPM8通過(guò)谷氨酸受體的激活參與偏頭痛發(fā)作機(jī)制,也為臨床使用胞磷膽堿預(yù)防性治療偏頭痛提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:月齡為2-3個(gè)月的清潔級(jí)健康雄性Sprague-Dawley大鼠（體重180-200g），共50只，按隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（n=10）和硝酸甘油模型組（n=40），其比例為1:4�？瞻讓�(duì)照組將生理鹽水(NS,10ml／kg)注入大鼠頸背部皮下，模型組依從Tassorelli法：在大鼠頸背部皮下注射硝酸甘油(NTG,10mg／kg)，每周注射一次，并進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分；隨后，再將模型組大鼠按之前分組方法隨機(jī)分為4組，分別為模型對(duì)照組（n=10，灌胃注射NS10ml／kg），氟桂利嗪組（n=10，1.25mg/Kg灌胃），胞磷膽堿組（n=10，0.1g/Kg）,聯(lián)合組（n=10，即，氟桂利嗪膠囊1.25mg/Kg，胞磷膽堿鈉0.1g/Kg），從第二周第一天開(kāi)始，每只大鼠每周仍一次頸部皮下注射硝酸甘油，并同時(shí)每天給予不同藥物灌胃,第5周頸部皮下注射硝酸甘油，分別灌藥，4小時(shí)后，用10%水合氯醛麻醉，心臟灌注，開(kāi)顱取顱底三叉神經(jīng)節(jié)，一部分用4%多聚甲醛固定并處于4℃保存：（1）采用HE染色法對(duì)三叉神經(jīng)組織進(jìn)行染色，觀察三叉神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)變化情況；（2）采用免疫組織化學(xué)方法（SP法）檢測(cè)谷氨酸受體在各組偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)變化；（3）另外一部分三叉神經(jīng)節(jié)在液氮中保存：采用Western blot檢測(cè)TRPM8受體蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果：每周每只大鼠行為學(xué)評(píng)分結(jié)果提示：模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，大鼠行為學(xué)評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）,故成功建立了硝酸甘油偏頭痛大鼠模型；通過(guò)預(yù)防性藥物治療后，氟桂利嗪組,胞磷膽堿組，聯(lián)合組與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），提示各藥物對(duì)大鼠行為均存在影響。胞磷膽堿組與氟桂利嗪組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），提示胞磷膽堿減輕大鼠行為學(xué)表現(xiàn)效果優(yōu)于氟桂利嗪；聯(lián)合組與氟桂利嗪組、胞磷膽堿組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），聯(lián)合用藥預(yù)防控制偏頭痛大鼠的行為表現(xiàn)優(yōu)于單獨(dú)藥物干預(yù)。三叉神經(jīng)節(jié)HE染色提示：模型組與空白對(duì)照組三叉神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)一致，進(jìn)而說(shuō)明偏頭痛的發(fā)生可能不影響三叉神經(jīng)節(jié)的結(jié)構(gòu)變化，只發(fā)生了功能性紊亂；谷氨酸受體免疫組織化學(xué)（SP法）顯示：模型對(duì)照組中的谷氨酸受體呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，明顯高于空白對(duì)照組，氟桂利嗪組呈陽(yáng)性，胞磷膽堿組呈弱陽(yáng)性，聯(lián)合組幾乎是陰性表達(dá)，其OD值的單因素方差分析結(jié)果顯示：谷氨酸受體在每一個(gè)組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；TRPM8的Westernblot結(jié)果顯示：模型對(duì)照組中TRPM8蛋白水平上調(diào)比空白對(duì)照組顯著，氟桂利嗪組稍下降，胞磷膽堿組比氟桂利嗪組下調(diào)幅度大，以聯(lián)合組下調(diào)幅度最為顯著，其灰度值經(jīng)單因素的方差分析提示TRPM8在每個(gè)組別中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。模型對(duì)照組第五周評(píng)分與TRPM8灰度值相關(guān)分析顯示：r=0.822,P0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示TRPM8的上調(diào)與評(píng)分呈正相關(guān)，TRPM8表達(dá)增加，評(píng)分升高，臨床癥狀越嚴(yán)重，應(yīng)用胞磷膽堿預(yù)防干預(yù)后，TRPM8表達(dá)下調(diào)，提示胞磷膽堿通過(guò)降低TRPM8表達(dá)，，從而使行為學(xué)評(píng)分減低，癥狀減輕，提示胞磷膽堿有預(yù)防治療偏頭痛的作用。從模型對(duì)照組中谷氨酸受體OD值與TRPM8灰度值相關(guān)分析結(jié)果顯示：r=0.794,P0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示谷氨酸受體與TRPM8表達(dá)呈正相關(guān)，谷氨酸受體表達(dá)升高可能對(duì)TRPM8蛋白表達(dá)有促進(jìn)協(xié)同作用。 結(jié)論：（1）偏頭痛發(fā)作時(shí)，三叉神經(jīng)組織在解剖結(jié)構(gòu)上無(wú)明顯改變，提示只是功能性異常。（2）TRPM8蛋白上調(diào)和谷氨酸受體的激活可能參與了偏頭痛發(fā)生機(jī)制，并具有協(xié)同作用；（3）胞磷膽堿作為一種神經(jīng)保護(hù)藥，可預(yù)防神經(jīng)功能紊亂，保護(hù)神經(jīng)元，在預(yù)防偏頭痛發(fā)作這類神經(jīng)性疼痛疾病中起到了可觀的效果，若聯(lián)合經(jīng)典預(yù)防性藥物效果更明顯。
【關(guān)鍵詞】：TRPM8 胞磷膽堿 谷氨酸 硝酸甘油 偏頭痛 大鼠
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R747.2;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-25
• 結(jié)果25-33
• 討論33-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 英漢縮略詞對(duì)照表43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-54
• 參考文獻(xiàn)51-54

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本文編號(hào)：1027145