本文關鍵詞：建立基于超薄切片的三維重構技術解析組織精細空間結構

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【摘要】：對生物組織內部精細結構的分析是了解生物體生理功能的基礎，主要方法是對組織樣品進行三維重構。重構技術涉及的主要步驟有對組織樣品的處理，切片，染色、成像、二維拼接和三維重構。目前使用的組織切片主要有石蠟切片，冰凍切片，半薄及超薄切片，臨床上病理分析主要采用石蠟和冰凍切片，切片較厚，分辨率較低；半薄超薄切片主要用于電鏡下組織細胞亞顯微結構的觀察，切片較薄，分辨率遠高于石蠟和冰凍切片。對獲得的圖片進行二維拼接和三維重構可以獲得組織內部精細空間結構，但是目前的方法均存在Z軸分辨率較低的缺陷。 傳統(tǒng)顯微鏡在X、Y軸上的分辨率為250nm，Z軸的分辨率是700nm，實際成像分辨率超過1μm。本文建立基于超薄切片方法的高分辨三維成像技術，可顯著提高Z軸分辨率，用于組織精細結構的研究。對組織樣品處理后，可將組織切成50nm-1000nm的連續(xù)半薄或超薄切片，具體切片的厚度即Z軸的分辨率。另外對切片進行染色，或者多重抗體標記，利用全自動顯微鏡對連續(xù)切片進行成像，對獲得的圖像進行二維拼接和三維重構，可以獲得組織高分辨的三維空間信息。本文所建立的高分辨三維成像技術適用于各種組織內部精細結構研究，，同時超薄切片方法為超高分辨顯微成像技術提供Z軸的解決方案。
【關鍵詞】：超薄切片 組織 高分辨 顯微鏡 抗體標記 三維重構
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R361.2;TP391.41
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 緒論10-15
• 1.1 切片技術的發(fā)展與應用10-13
• 1.1.1 石蠟切片10-11
• 1.1.2 冰凍切片11-12
• 1.1.3 半薄/超薄切片12-13
• 1.2 三維重構技術的發(fā)展與應用13-14
• 1.3 本文的研究和意義14-15
• 第二章 材料與方法15-24
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 主要儀器15
• 2.1.2 主要試劑及配制方法15-16
• 2.2 主要實驗方法16-23
• 2.2.1 樣品采集16
• 2.2.2 組織固定、脫水和包埋16-19
• 2.2.3 組織超薄/半薄連續(xù)切片19-22
• 2.2.4 超薄切片染色22
• 2.2.5 多重抗體標記22
• 2.2.6 自動化成像、圖像處理、二維拼接和三維重構22-23
• 2.3 本章小結23-24
• 第三章 實驗結果24-42
• 3.1 人正常結腸半薄切片高分辨圖像分析24-26
• 3.2 人舌鱗癌半薄切片高分辨圖像分析26-35
• 3.2.1 人舌鱗癌半薄切片與石蠟切片對比28-29
• 3.2.2 人舌鱗癌半薄切片異常增生細胞、癌細胞清晰可見29-33
• 3.2.3 人舌鱗癌半薄切片基底膜的變化33-34
• 3.2.4 人舌鱗癌半薄切片中神經的定位34-35
• 3.3 小鼠肝臟組織的半薄切片染色和三維重構35-40
• 3.3.1 小鼠肝臟組織的半薄切片染色35-37
• 3.3.2 小鼠肝臟組織的二維拼接和三維重構37-39
• 3.3.3 小鼠腦組織超薄切片的多重熒光標記和三維空間重構39-40
• 3.4 本章小結40-42
• 第四章 總結與展望42-44
• 參考文獻44-47
• 致謝47-49
• 攻讀碩士學位期間已發(fā)表或錄用的論文49

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