本文關(guān)鍵詞：小干擾RNA沉默脂肪酸合酶基因?qū)θ烁渭?xì)胞株HepG2脂代謝的影響

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【摘要】：目的:研究基因干擾技術(shù)沉默脂肪酸合酶(FAS)基因后對人肝細(xì)胞株HepG2細(xì)胞內(nèi)外脂質(zhì)含量及脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法:合成3對針對FAS mRNA不同位點序列的小干擾RNA(siRNA),分別轉(zhuǎn)染至人肝細(xì)胞株HepG 2,實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測空白對照組(HepG2細(xì)胞不經(jīng)過任何處理)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染沒有任何基因干擾作用的陰性siRNA)、FAS-siR NA-1轉(zhuǎn)染組、FAS-siRNA-2轉(zhuǎn)染組和FAS-siRNA-3轉(zhuǎn)染組的FAS mRNA的表達(dá)。蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,篩選出沉默效果最佳的一對siR NA。將最有效siRNA轉(zhuǎn)染至HepG2細(xì)胞,48 h后測定細(xì)胞內(nèi)外甘油三酯及總膽固醇含量以及脂代謝相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:25 nmol/L si RNA和3μl/孔(24孔板)轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率最高。FAS-siRNA-3對HepG2的FAS基因的沉默效果最好,FAS-si RNA-3轉(zhuǎn)染組的FAS在mRNA水平和蛋白水平分別降低為空白對照組的(52.33±3.07)%和(51.57±3.14)%。FAS-siRNA-3沉默F(xiàn)AS基因后HepG2的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外培養(yǎng)液中甘油三酯含量顯著低于空白對照組,細(xì)胞外總膽固醇含量顯著低于空白對照組。與空白對照組比較,FAS-siRNA-3轉(zhuǎn)染組HepG2的肝脂酶基因mRNA表達(dá)水平顯著升高(P0.0001),微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白基因mRNA表達(dá)水平顯著降低(P0.05),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:FAS基因沉默可顯著降低HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯、細(xì)胞外培養(yǎng)液甘油三酯和總膽固醇的含量,需進(jìn)一步的體內(nèi)外實驗加以驗證。
【作者單位】： 川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室;川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 小干擾RNA 脂肪酸合酶 人肝細(xì)胞株HepG
【基金】：四川省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃(2013JY0072) 四川省教育廳重點項目(12ZA232)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 高甘油三酯血癥(HTG)是動脈粥樣硬化的獨立危險因子,與心血管病(CVD)直接相關(guān)[1-6]。血漿甘油三酯主要來源于肝臟的從頭合成(de novosynthesis)。在肝甘油三酯從頭合成過程中,脂肪酸合酶(FAS)是起關(guān)鍵作用的多功能酶,其表達(dá)水平及活性決定了甘油三酯的合成速率以及血漿甘油三

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李俊,李小敏,楊俊,劉映峰,孔炳耀;老年冠心病冠狀動脈造影結(jié)果與中醫(yī)證型、血脂及脂蛋白亞組分膽固醇含量關(guān)系的研究[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1999年S1期

2 王英杰;沈智杰;王肖龍;毛玉昌;郭蔚;胡卓漢;;健脾化濁方對阿托伐他汀體外代謝的影響[J];國際心血管病雜志;2013年06期

3 劉昌孝;;他汀類藥物的安全性風(fēng)險評價[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2014年08期

4 韓瑛;陳志軍;盧新華;鄧華菲;王岐本;孫陶利;龍石銀;田英;;缺血性腦卒中患者TC/HDL-C、TG/HDL-C比值與HDL亞類分布的關(guān)系[J];湘南學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

5 張春梅;陳婷;李平;曹誠;張部昌;;AHSG對胰島素刺激下的HL-7702細(xì)胞中FAS、SREBP-1基因表達(dá)的影響[J];軍事醫(yī)學(xué);2012年03期

6 李俊,李小敏,劉映峰,楊俊,張f，

本文編號：1019746