本文關(guān)鍵詞：H7N9流感病毒血凝素HA在畢赤酵母中的表達(dá)及免疫原性分析

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【摘要】：目的利用畢赤酵母表達(dá)制備H7N9流感病毒血凝素[HA 1~525個(gè)氨基酸(aa)],并對(duì)其免疫原性進(jìn)行研究。方法經(jīng)全基因合成獲得H7N9流感病毒[A/Hangzhou/1/2013(H7N9)]全長(zhǎng)HA,以其為模板,PCR得到片段HA1-525,通過NspⅤ和NotⅠ雙酶切連入p PICZαA載體,轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33,ELISA篩選陽性克隆。發(fā)酵培養(yǎng)后,表達(dá)上清經(jīng)PEG20000沉淀獲取HA1-525,并用糖苷內(nèi)切酶H(endo H)酶切分析其N-糖鏈。將制備的HA1-525免疫BALB/c小鼠,經(jīng)ELISA檢測(cè)特異性HA7抗體滴度,紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)分析血抑活性。結(jié)果培養(yǎng)上清用抗HA7抗體經(jīng)ELISA檢測(cè),重組菌成功表達(dá)HA7,且Western印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有特異性彌散條帶,經(jīng)endo H酶切后,HA1-525為均一條帶,相對(duì)分子質(zhì)量約58×103,與理論大小相當(dāng),表明HA1-525存在甘露糖基化結(jié)構(gòu)。HA1-525兩次免疫小鼠后可產(chǎn)生1∶36 000的抗體滴度。以H7N9裂解苗為抗原,檢測(cè)其血抑活性為1∶700。結(jié)論利用畢赤酵母表達(dá)的H7N9流感病毒HA1-525可以誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生針對(duì)HA7的中和抗體。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;沈陽藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： HN流感病毒 血凝素類 畢赤酵母 紅細(xì)胞凝集抑制
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31200082) 北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(7152112)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 近年來,流感病毒引起的疫情暴發(fā)越來越頻繁,如2003年的H5N1、2009年的H1N1,以及2013年的H7N9等均造成一定數(shù)量的死亡案例。而預(yù)防接種是預(yù)防流感暴發(fā)的主要有效手段。傳統(tǒng)的流感疫苗是在雞胚中擴(kuò)增流感病毒,再經(jīng)過滅活或裂解等方法生產(chǎn),其主要抗原為流感病毒的血凝素(hemag-gl

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張?zhí)?王炳軍;田國華;田國寧;張金玲;侯志高;韓亮;張麗萍;;流感病毒血凝素受體分子的研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年02期

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4 ;感染人H7N9流感病毒血凝素的晶體結(jié)構(gòu)及其與受體結(jié)合特性[J];中國基礎(chǔ)科學(xué);2013年04期

5 郭瑞玲;齊順祥;劉艷芳;劉蘭芬;;河北省2005～2006年H1N1亞型流感病毒血凝素HA1基因特征研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2008年15期

6 龔甜;熊英;劉麗萍;王飛霞;施勇;周s，

本文編號(hào)：1019309