本文關(guān)鍵詞：小鼠胚胎定向造血發(fā)育的表面標(biāo)志研究

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【摘要】：作為小鼠定向造血（definitive hematopoiesis）的起始，造血干細(xì)胞（hemato-poietic stem cells，HSC）的產(chǎn)生在胚胎發(fā)育時(shí)期一直廣為關(guān)注。Medvinsky等人證實(shí)第一個(gè)HSC產(chǎn)生于胚胎期10.5天（E10.5）小鼠胚內(nèi)的主動(dòng)脈-性腺-中腎區(qū)（aorta-gonad-mesonephros region，，AGM區(qū)）。與此同時(shí)，HSC也被發(fā)現(xiàn)存在于E10.5的胚胎的頭部、臍動(dòng)脈與卵黃動(dòng)脈。至E11.0-E11.5時(shí)，HSC也在血管豐富的卵黃囊（yolk sac，YS）、胎盤（placenta，PL）和胎肝(fetal liver，F(xiàn)L)中出現(xiàn)，E12.0后FL成為HSC的主要擴(kuò)增位點(diǎn)。E17.0時(shí)HSC開始轉(zhuǎn)移至骨髓（bone marrow，BM）并大量增殖。可見HSC的發(fā)育在胚胎的多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行，且自我更新活躍。 探索HSC起源的精確位點(diǎn)一直以來都是其發(fā)育學(xué)研究的難點(diǎn)之一，這是由于在第一個(gè)功能型HSC被發(fā)現(xiàn)的同時(shí)，胚胎循環(huán)系統(tǒng)已經(jīng)建立，因而無法得知HSC是否產(chǎn)生于單一且獨(dú)立的原發(fā)位點(diǎn)。而且，至今尚未發(fā)現(xiàn)有任何單一標(biāo)志能特異性富集胚胎期的HSC。這也使尋找其精確的原發(fā)位點(diǎn)變得異常困難。 本研究的第一部分，主要考察了Flk-1分子在胚胎期10.5天（E10.5）的AGM區(qū)不同類型造血前體細(xì)胞的表達(dá)情況。流式細(xì)胞學(xué)分析發(fā)現(xiàn)低于10%的Flk-1~+細(xì)胞與CD41、CD45/Ter119有共表達(dá)。繼而分選出CD31~+CD45-Ter119-Flk-1~+CD41~+（R1，代表不成熟的造血前體細(xì)胞）和CD31~+CD45-Ter119-Flk-1~+CD41-（R2，代表內(nèi)皮細(xì)胞）兩群細(xì)胞，利用造血集落培養(yǎng)和OP9共培養(yǎng)體系分別考察其體外的髓系與淋系潛能。結(jié)果表明：僅R1組細(xì)胞能在造血集落培養(yǎng)體系中形成典型的造血集落；但與OP9共培養(yǎng)7-9天后，兩組細(xì)胞均能產(chǎn)生豐富的造血前體細(xì)胞（CD45~+c-Kit~+）、髓系細(xì)胞（Gr-1~+/Mac-1~+）、紅細(xì)胞（Ter119~+）和B淋巴細(xì)胞（CD19~+）。上述結(jié)果表明：E10.5的小鼠胚胎AGM區(qū)，F(xiàn)lk-1仍然在幼稚的造血前體細(xì)胞以及更早期的生血內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。但是，此時(shí)的造血干細(xì)胞前體和造血干細(xì)胞是否表達(dá)Flk-1仍需通過體內(nèi)功能實(shí)驗(yàn)明確。 本研究的第二部分，主要考察了CD47分子在E10.0-E12.5相關(guān)造血位點(diǎn)不同類型造血細(xì)胞的表達(dá)情況。流式分析顯示：E10.5AGM/YS/循環(huán)血、E11.5AGM/YS/PL和E12.5循環(huán)血中的活細(xì)胞中分別有1.0%/13.3%/2.1%、1.4%/13.4%/13.6%和0.9%的細(xì)胞表達(dá)CD47。流式分選出E10.0AGM/卵黃囊/循環(huán)血中的CD47~+與CD47-兩群細(xì)胞后，應(yīng)用體外的CFU-C實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩群細(xì)胞的體外髓系潛能，培養(yǎng)7-9天后發(fā)現(xiàn)E10.0AGM/YS/循環(huán)血中僅CD47~+細(xì)胞群能產(chǎn)生典型的造血集落（CFU-C）。說明在CFU-C培養(yǎng)體系中，僅CD47~+群中含有髓系祖細(xì)胞。隨后我們利用流式細(xì)胞術(shù)分選出E10.5AGM區(qū)內(nèi)的c-Kit~+CD47~+（R1）與c-Kit~+CD47-（R2）兩群細(xì)胞，利用OP9共培養(yǎng)體系檢測(cè)上述兩群細(xì)胞的體外造血潛能，培養(yǎng)7-9天發(fā)現(xiàn)兩群均能在OP9共培養(yǎng)體系下形成一定比例的CD45~+c-Kit~+細(xì)胞（造血細(xì)胞）、Ter119~+細(xì)胞（紅細(xì)胞）、Gr-1~+/Mac-1~+細(xì)胞（髓系祖細(xì)胞）、B220~+細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞或前體），這表明：在OP9共培養(yǎng)體系下，E10.5AGM區(qū)內(nèi)CD47~+細(xì)胞與CD47-細(xì)胞均具有一定的造血潛能。為明確HSC表面是否表達(dá)CD47，我們同樣利用流式細(xì)胞術(shù)將E11.5AGM區(qū)、卵黃囊和胎盤的細(xì)胞分選為c-Kit~+CD47~+（R1）與c-Kit~+CD47-（R2）兩群細(xì)胞。隨后的移植實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示僅R1群能產(chǎn)生造血重建。這表明E11.5AGM、卵黃囊和胎盤中的HSC均表達(dá)CD47，從而進(jìn)一步證實(shí)CD47能富集此時(shí)AGM區(qū)、卵黃囊和胎盤中所有的HSC。有趣的是，當(dāng)我們將E12.5循環(huán)血中的R1群分選至c-Kit~+CD47high與c-Kit~+CD47low群之后，造血重建卻全部發(fā)生在c-Kit~+CD47low群中，表明此時(shí)循環(huán)血中所有的HSC集中在CD47low群。
【關(guān)鍵詞】：造血前體細(xì)胞 造血干細(xì)胞 造血發(fā)育 小鼠胚胎 Flk-1 CD47
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 目錄4-5
• 縮略詞5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分 Flk-1 在小鼠胚胎造血前體細(xì)胞中的表達(dá)15-24
• 實(shí)驗(yàn)流程15-16
• 材料與方法16-18
• 結(jié)果18-23
• 小結(jié)23-24
• 第二部分 CD47 在小鼠胚胎造血細(xì)胞中的表達(dá)24-42
• 實(shí)驗(yàn)流程24-25
• 材料與方法25-28
• 結(jié)果28-41
• 小結(jié)41-42
• 討論42-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-58
• 附錄58-59
• 致謝59-60
• 綜述60-78
• 參考文獻(xiàn)67-78

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王建;盧光t;;血液血管干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2005年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王躍嗣;人nthESC向HSC誘導(dǎo)分化和胚胎造血標(biāo)志物表達(dá)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

2 郭虹;胎兒多種組織間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特征及胎兒骨髓血液血管干細(xì)胞特性的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

本文編號(hào)：1012354