本文關(guān)鍵詞：弓形蟲(chóng)棒狀體ROP16基因轉(zhuǎn)染RAW264.7的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的比較目前常用的5種基因?qū)爰夹g(shù)將弓形蟲(chóng)棒狀體ROP16基因?qū)隦AW264.7,選擇合適的方法提高轉(zhuǎn)染效率。方法以綠色熒光蛋白p EGFP-ROP16融合表達(dá)構(gòu)建質(zhì)粒,采用Lipofectamine汶3000、Attractene、Fugene汶HD轉(zhuǎn)染試劑以及電穿孔轉(zhuǎn)染和慢病毒載體感染RAW264.7,利用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀觀察目的基因的表達(dá)、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)并分析轉(zhuǎn)染效率,從而確定最佳的基因?qū)胪緩�。結(jié)果上述質(zhì)粒載體對(duì)RAW264.7的轉(zhuǎn)染效率依次為電轉(zhuǎn)法Fugene汶HDLipofectamine汶3000Attractene。但是電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率較高,細(xì)胞貼壁不牢或死亡;而慢病毒感染效率可達(dá)61.2%,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)佳,顯著優(yōu)于質(zhì)粒載體(P0.05)。慢病毒組顯著優(yōu)于4個(gè)質(zhì)粒組(P0.05)。結(jié)論慢病毒感染可將弓形蟲(chóng)棒狀體ROP16成功轉(zhuǎn)入RAW264.7,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,效果顯著優(yōu)于質(zhì)粒載體,目的基因在細(xì)胞內(nèi)獲得高效表達(dá)。為弓形蟲(chóng)ROP16的功能研究提供了重要基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室;安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院輸血科;
【關(guān)鍵詞】： ROP基因 RAW. 慢病毒感染
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81471983,81171606) 安徽省高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目(編號(hào):KJ2014A106)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 2015-05-26接收弓形蟲(chóng)廣泛寄生于溫血?jiǎng)游锏挠泻思?xì)胞內(nèi),能夠侵入單核巨噬細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)增殖。棒狀體蛋白16(rhoptry protein 16,ROP16)是由蟲(chóng)體棒狀體分泌的重要毒力相關(guān)因子,具有激酶樣活性,可以直接磷酸化Stat3和Stat6[1-2],上調(diào)白介素(interleukin,IL)-4和下調(diào)IL-12的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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4 李

本文編號(hào)：1009843