本文關(guān)鍵詞：STAT3-TLR2信號(hào)軸在沙眼衣原體持續(xù)感染中的作用初探

  更多相關(guān)文章： 持續(xù)性感染 干擾素-γ 沙眼衣原體 STAT3 TLR2 IL-6

【摘要】：目的：沙眼衣原體是最常見的性傳播性疾病的病原體,炎癥反應(yīng)是沙眼衣原體感染的主要病理特點(diǎn)。在沙眼衣原體持續(xù)性感染狀態(tài)下,可能存在著STAT3-TLR2正反饋調(diào)節(jié)軸,介導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的異常分泌。因此,我們擬通過研究STAT3-TLR2信號(hào)軸在沙眼衣原體持續(xù)感染細(xì)胞中的作用,探索炎性細(xì)胞因子異常分泌的分子機(jī)制,為防治衣原體的感染提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：以HeLa細(xì)胞為研究對(duì)象建立沙眼衣原體的急性感染和IFN-γ誘導(dǎo)的持續(xù)感染模型。采用RNAi技術(shù)在HeLa細(xì)胞中沉默STAT3基因,通過藥物篩選構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,在此細(xì)胞系中建立相應(yīng)的沙眼衣原體感染模型。采用qRT-PCR、western blo、ELISA等方法比較不同感染狀態(tài)下,HeLa細(xì)胞STAT3-TLR2信號(hào)軸相關(guān)分子的蛋白表達(dá)和活化水平以及炎性細(xì)胞因子的分泌水平。 結(jié)果：在沙眼衣原體持續(xù)性感染狀態(tài)下,上皮細(xì)胞分泌的IL-6、IL-1α以及STAT3和TLR2的表達(dá)量均明顯增加,IL-6的分泌、STAT3蛋白表達(dá)與活化和TLR2表達(dá)水平呈一致性的升高。干擾靶細(xì)胞STAT3基因表達(dá)后,沙眼衣原體持續(xù)性感染狀態(tài)下的IL-6和IL-1α分泌水平以及TLR2蛋白表達(dá)水平均明顯的降低,并且IL-6和IL-1α分泌降低水平與STAT3的干擾效果顯著相關(guān)。 結(jié)論：1、在IFN-γ誘導(dǎo)的沙眼衣原體持續(xù)感染狀態(tài)下,炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-1α的分泌以及STAT3、TLR2的表達(dá)明顯增加。 2、在沙眼衣原體持續(xù)感染狀態(tài)下,STAT3在炎性細(xì)胞因子IL-6和IL-1α的異常分泌中起關(guān)鍵作用。 3、在沙眼衣原體持續(xù)感染狀態(tài)下,存在著STAT3-TLR2信號(hào)軸的活化。
【關(guān)鍵詞】：持續(xù)性感染 干擾素-γ 沙眼衣原體 STAT3 TLR2 IL-6
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392.9
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• ~.寫詞10-11
• 前言11-15
• 第一章 沙眼衣原體持續(xù)感染狀態(tài)下STAT3-TLR2信號(hào)軸的活化15-29
• 1. 前言15-16
• 2 材料16-17
• 2.1 細(xì)胞16
• 2.2 菌株16
• 2.3 主要試劑和試劑盒16
• 2.4 主要儀器與設(shè)備16-17
• 3. 方法17-22
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 3.2 Ct的感染和增殖17
• 3.3 Ct的滴度測(cè)定17
• 3.4 吉姆薩染色17
• 3.5 建立Ct不同感染模型17-18
• 3.6 qRT-PCR檢測(cè)基因的轉(zhuǎn)錄18-19
• 3.7 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌19-20
• 3.8 Western blot檢測(cè)蛋白的表達(dá)20-21
• 3.9 統(tǒng)計(jì)分析21-22
• 4. 結(jié)果22-26
• 4.1 采用低濃度IFN-γ刺激建立Ct持續(xù)感染的HeLa細(xì)胞模型22
• 4.2 Ct持續(xù)感染狀態(tài)下TLR2、IL-6和STAT3的表達(dá)升高22-23
• 4.3 Ct持續(xù)感染狀態(tài)下TLR2的表達(dá)增加23-24
• 4.4 Ct持續(xù)感染狀態(tài)下IL-6、IL-1α的分泌升高24
• 4.5 Ct持續(xù)感染狀態(tài)下STAT3的表達(dá)與活化增加24-26
• 5 討論26-28
• 6 結(jié)論28-29
• 第二章 STAT3對(duì)沙眼衣原體持續(xù)感染狀態(tài)下STAT3-TLR2信號(hào)軸的影響29-40
• 1 前言29-30
• 2 材料30-31
• 2.1 細(xì)胞30
• 2.2 菌株30
• 2.3 試劑和試劑盒30-31
• 3. 方法31-34
• 3.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化31
• 3.2 質(zhì)粒抽提31-32
• 3.3 重組質(zhì)粒的鑒定32
• 3.4 STAT3基因沉默穩(wěn)定HeLa細(xì)胞系的鑒定32
• 3.5 利用穩(wěn)定干擾HeLa細(xì)胞建立不同Ct感染模型32-33
• 3.6 免疫印跡技術(shù)檢測(cè)STAT3基因沉默后TLR2的表達(dá)33
• 3.7 ELISA檢測(cè)STAT3基因沉默后IL-6和IL-1α的分泌33
• 3.8 統(tǒng)計(jì)分析33-34
• 4 結(jié)果34-37
• 4.1 STAT3干擾慢病毒載體測(cè)序結(jié)果34
• 4.2 慢病毒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率34
• 4.3 STAT3基因沉默穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的沉默效果34-35
• 4.4 STAT3干擾后,TLR2表達(dá)降低35
• 4.5 STAT3干擾后,TLR2的基礎(chǔ)表達(dá)35-36
• 4.6 STAT3干擾后,IL-6和IL-1α分泌減少36-37
• 5 討論37-39
• 6 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述43-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 攻讀學(xué)位期間主要研究成果目錄55-56
• 致謝56

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1007719