本文關(guān)鍵詞：新霉素人工抗原的制備及鑒定

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【摘要】：新霉素(neomycin, NEO)是一種氨基糖苷類抗生素(aminoglycosides),因其具有高效、廣譜的抗菌作用,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和獸藥領(lǐng)域。新霉素雖然是重要的抗感染類藥物,但因其對(duì)人和動(dòng)物存在潛在的腎毒性和耳毒性等毒副作用,危害人體健康,使動(dòng)物源性食品安全受到威脅,而被多個(gè)國(guó)家禁止和限制使用。所以建立新霉素殘留的快速檢測(cè)方法十分必要。 國(guó)內(nèi)外對(duì)新霉素殘留的檢測(cè)方法主要有理化方法、微生物法和免疫學(xué)分析方法。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)因其具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、特異等優(yōu)點(diǎn),在獸藥殘留檢測(cè)的領(lǐng)域得到了較為廣泛的應(yīng)用,發(fā)展迅速。 本研究旨在制備出具有良好免疫原性的新霉素人工抗原,對(duì)其進(jìn)行鑒定及免疫效果評(píng)價(jià)。由于新霉素為小分子半抗原,不具備免疫原性,應(yīng)用蛋白質(zhì)連接技術(shù),將新霉素與牛血清白蛋白(bovine serum aibumin, BSA)、卵清蛋白(ovaibumin, OVA)進(jìn)行偶聯(lián),制備出新霉素人工抗原NEO-BSA及NEO-OVA,用紫外光譜分析法測(cè)定其蛋白質(zhì)濃度,用紅外光譜分析法(IR)、SDS-PAGE電泳法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行初步鑒定；用NEO-BSA免疫BALB/c小鼠,間接ELISA法測(cè)定多抗上清(pAb)抗體效價(jià),阻斷ELISA法鑒定pAb敏感性,交叉反應(yīng)試驗(yàn)鑒定pAb特異性,綜合評(píng)價(jià)新霉素人工抗原的免疫效果。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：測(cè)定偶聯(lián)產(chǎn)物NEO-BSA、 NEO-OVA的蛋白濃度分別為6.344、4.122mg/ml; NEO-BSA的紅外光譜結(jié)果與BSA相比,發(fā)生了相對(duì)明顯的改變,NEO-BSA的電泳條帶與BSA的相比,NEO-BSA相對(duì)滯后,并出現(xiàn)了明顯的拖尾現(xiàn)象,表明新霉素人工抗原制備成功。用NEO-BSA免疫小鼠,獲得的pAb效價(jià)為1：3200,半數(shù)抑制濃度為105μg/ml,該pAb只與新霉素有強(qiáng)特異性反應(yīng),與鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素的交叉反應(yīng)率均小于0.5%,與沙丁胺醇、土霉素交叉反應(yīng)率均小于0.1%。本研究制備出了具有良好免疫原性的新霉素人工抗原,為進(jìn)一步制備高親和力抗新霉素單克隆抗體,建立新霉素殘留的免疫學(xué)檢測(cè)方法,研制新霉素快速診斷試劑奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：新霉素 人工抗原 ELISA 合成 鑒定
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：TQ465;R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文縮寫一覽表9-12
• 1 文獻(xiàn)綜述12-28
• 1.1 食品中的獸藥殘留問(wèn)題12-16
• 1.1.1 獸藥殘留現(xiàn)狀12-13
• 1.1.2 獸藥殘留原因13
• 1.1.3 獸藥殘留危害13-15
• 1.1.4 國(guó)內(nèi)外對(duì)獸藥殘留的監(jiān)控15-16
• 1.2 氨基糖苷類抗生素簡(jiǎn)介16-19
• 1.3 新霉素19-23
• 1.3.1 新霉素簡(jiǎn)介19-20
• 1.3.2 新霉素的殘留及危害20-21
• 1.3.3 新霉素殘留的檢測(cè)方法21-23
• 1.4 酶聯(lián)免疫吸附法簡(jiǎn)介23-24
• 1.4.1 基本原理23
• 1.4.2 ELISA主要類型23-24
• 1.5 新霉素人工抗原制備的理論基礎(chǔ)24-26
• 1.5.1 載體蛋白的選擇25
• 1.5.2 新霉素人工抗原制備的常用方法25-26
• 1.5.3 偶聯(lián)條件26
• 1.6 本課題研究目的及意義26-27
• 1.7 本課題研究?jī)?nèi)容27-28
• 2 材料與方法28-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備29-30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物30
• 2.4 常用溶液的配制30-34
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法34-38
• 2.5.1 新霉素人工抗原的制備34
• 2.5.2 新霉素人工抗原的鑒定34-35
• 2.5.3 新霉素多抗血清(pAb)鑒定35-38
• 3 結(jié)果與討論38-45
• 3.1 結(jié)果38-43
• 3.1.1 偶聯(lián)產(chǎn)物濃度的測(cè)定38
• 3.1.2 新霉素人工抗原的鑒定38-39
• 3.1.3 新霉素多抗血清(pAb)鑒定39-43
• 3.2 討論43-45
• 3.2.1 新霉素人工抗原的制備43
• 3.2.2 新霉素人工抗原的鑒定43-45
• 4 結(jié)論45-46
• 5 展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 作者簡(jiǎn)介52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1007054