本文關(guān)鍵詞：小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)及其機(jī)制

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【摘要】：目的：研究全反式維甲酸（RA）、乙醇等藥物作用下，以及S180荷瘤病理變化的條件下，小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)，并在蛋白質(zhì)水平上分析DANCE反應(yīng)的組織細(xì)胞代謝變化，探討肝臟細(xì)胞DANCE反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制。 方法： 1.正常昆明小鼠，雌雄各半，20-25g/只。以脫臼法處死小鼠，取小鼠肝臟組織約0.15g，加600μl生理鹽水并勻漿，取200μl肝勻漿進(jìn)行不連續(xù)蔗糖密度梯度離心(DSGC)。蔗糖密度梯度從上到下依次為30%、40%、50%、60%、70%（w/v），離心速度為3500RPM（約1650g），時間5min，分離得3條細(xì)胞帶，分別為S40、S50、S60（“S”代表蔗糖Sucrose）。通過對各條帶的HE染色，分析DSGC條帶的組成成分。 2.對昆明小鼠進(jìn)行全反式維甲酸（RA）灌胃，以不同RA劑量和不同作用時間制備RA反應(yīng)模型，以上述方法測定RA引起的小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)，分析其劑量、時間的依賴性。 3.以75%乙醇對昆明小鼠灌胃，按上述方法測定乙醇引起的小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)，分析其劑量、時間的依賴性。小鼠血清以全自動生化分析儀檢測其AST、ALT活力水平(廣州華僑醫(yī)院檢驗中心)，分析肝臟細(xì)胞DANCE反應(yīng)與血清AST、ALT活力水平變化的關(guān)系。 4.構(gòu)建S180荷瘤小鼠模型，按上述方法測定種瘤后不同時間小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)，分析肝臟細(xì)胞DANCE反應(yīng)與S180腫瘤形成的關(guān)系。 5.采用ELISA、全自動生化分析儀檢測不同時間點(diǎn)S180荷瘤小鼠血清CRP、ALT含量變化。 結(jié)果： 1.正常昆明小鼠肝臟細(xì)胞經(jīng)DSGC分離得到三條分離條帶，即S60、S50、S40（分別位于60%、50%和40%蔗糖梯度層之上）。經(jīng)HE染色分析，三條帶的成分主要是肝臟的組織碎片，各碎片由幾個至十幾個數(shù)量不等的肝細(xì)胞組成，且各碎片的肝細(xì)胞形態(tài)和大小基本一致。 2. RA灌胃可引起小鼠肝臟細(xì)胞發(fā)生DANCE-UP（條帶上移）反應(yīng)，且DANCE-UP反應(yīng)與RA的劑量、時間具有明顯的依賴性關(guān)系。 3.乙醇灌胃可引起小鼠肝臟細(xì)胞發(fā)生DANCE-UP反應(yīng)，并且與乙醇的劑量、時間具有明顯的依賴性關(guān)系。全自動生化分析儀檢測結(jié)果顯示，，相比于對照組，乙醇組小鼠的血清ALT、AST的活力水平明顯升高。 4.接種S180腫瘤細(xì)胞后，在不同時間點(diǎn)的小鼠肝臟細(xì)胞發(fā)生不同程度的DANCE反應(yīng)，其中，接種S180腫瘤細(xì)胞后第10天與第25天，小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)概率最高。 5. ELISA和全自動生化分析儀檢測結(jié)果顯示，S180荷瘤小鼠血清CRP和ALT含量均較對照組的高，且具有顯著性差異。結(jié)論：在經(jīng)口給藥條件下，RA和乙醇可引起小鼠肝臟細(xì)胞發(fā)生不同程度DANCE反應(yīng)，且與藥物劑量和給藥時間具有明顯的依賴關(guān)系；在S180腫瘤形成與發(fā)展病理過程中，小鼠肝臟細(xì)胞出現(xiàn)規(guī)律性的DANCE反應(yīng)；小鼠血清的CRP和ALT的含量改變，提示至少部分肝臟細(xì)胞發(fā)生免疫/炎癥反應(yīng)或凋亡，這可能是肝臟DANCE發(fā)生的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：DSGC DANCE 小鼠肝臟細(xì)胞 S180荷瘤小鼠
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 目錄8-10
• 緒論10-17
• 1. 離心技術(shù)10
• 2. 密度梯度離心法10-11
• 3. 不連續(xù)蔗糖密度梯度離心11-12
• 4. 細(xì)胞反應(yīng)12
• 5. 細(xì)胞DANCE反應(yīng)12-14
• 6. 動物肝臟組織細(xì)胞 DANCE 反應(yīng)的生物學(xué)意義14-16
• 7. 本研究目的16-17
• 實(shí)驗材料與方法17-27
• 1 實(shí)驗材料17-20
• 1.1 實(shí)驗動物17
• 1.2 實(shí)驗細(xì)胞17
• 1.3 試劑及耗材17
• 1.4 實(shí)驗儀器17-18
• 1.5 試劑配制18-20
• 1.5.1 0.9%生理鹽水配制18
• 1.5.2 蔗糖濃度配置18-19
• 1.5.3 乙醇溶液的配制19
• 1.5.4 全反式維甲酸（RA）溶液的配制19-20
• 2 實(shí)驗方法20-27
• 2.1 小鼠肝臟細(xì)胞 HE 染色20-21
• 2.1.1 正常小鼠肝臟細(xì)胞 DSGC 分離20
• 2.1.2 小鼠肝臟 S60、S50、S40 條帶 HE 染色20-21
• 2.2 全反式維甲酸（RA）引起小鼠肝臟細(xì)胞 DANCE 反應(yīng)的研究21-22
• 2.2.1 實(shí)驗分組21
• 2.2.2 小鼠灌胃21-22
• 2.2.3 RA 與小鼠肝臟細(xì)胞 DANCE 反應(yīng)的關(guān)系22
• 2.3 乙醇引起小鼠肝臟細(xì)胞DANCE反應(yīng)的研究22-23
• 2.3.1 實(shí)驗分組22
• 2.3.2 血清收集22-23
• 2.3.3 小鼠肝臟 DANCE 反應(yīng)分析23
• 2.3.4 血清 ALT、AST 活力檢測23
• 2.4 S180荷瘤小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)及其機(jī)制研究23-26
• 2.4.1 實(shí)驗分組23
• 2.4.2 S180細(xì)胞的復(fù)蘇及小鼠腹水瘤制備23-24
• 2.4.3 S180 荷瘤小鼠模型的建立24
• 2.4.4 S180 荷瘤小鼠處理24
• 2.4.5 S180 荷瘤小鼠 DANCE 反應(yīng)測定24
• 2.4.6 S180 荷瘤小鼠血清 CRP、ALT 水平檢測24-26
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析26-27
• 實(shí)驗結(jié)果與分析27-40
• 1 小鼠肝臟細(xì)胞HE染色27-29
• 1.1 小鼠肝臟細(xì)胞HE染色結(jié)果27
• 1.2 小鼠肝臟細(xì)胞S60、S50、S40 HE染色結(jié)果分析27-29
• 2 RA與小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)29-31
• 2.1 RA作用下的小鼠肝臟細(xì)胞DSGC反應(yīng)結(jié)果29-31
• 2.2 RA作用下小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)分析31
• 3 乙醇引起的小鼠肝臟細(xì)胞 DANCE 反應(yīng)機(jī)制的研究31-35
• 3.1 乙醇引起的小鼠肝臟細(xì)胞DANCE反應(yīng)測定31-33
• 3.2 小鼠血清ALT和AST活力檢測結(jié)果33-34
• 3.3 乙醇引起的小鼠肝臟細(xì)胞DANCE反應(yīng)和血清ALT、AST水平變化的分析34-35
• 4 S180荷瘤小鼠肝臟細(xì)胞的DANCE反應(yīng)及其反應(yīng)機(jī)制研究35-40
• 4.1 S180荷瘤小鼠的DANCE反應(yīng)測定結(jié)果35-36
• 4.2 ELISA測定血清CRP和全自動生化分析儀測定血清ALT活力的結(jié)果36-37
• 4.3 荷瘤小鼠肝臟細(xì)胞 DANCE 反應(yīng)與血清 ALT 和 CRP 的變化趨勢37-38
• 4.4 S180 荷瘤小鼠肝臟細(xì)胞的 DANCE 反應(yīng)及其反應(yīng)機(jī)制分析38-40
• 討論40-44
• 1 肝臟細(xì)胞的 DANCE 反應(yīng)40-41
• 2 肝臟細(xì)胞的 DANCE 反應(yīng)機(jī)制41-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 全文總結(jié)47-48
• 不足與展望48-49
• 英文縮略詞49-50
• 致謝50-51
• 在校期間發(fā)表的論文51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1002719