本文關(guān)鍵詞：聯(lián)合應(yīng)用泛素分子基因的漢灘病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建含有泛素(ubiquitin,Ub)基因的漢灘病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重組腺病毒。方法通過PCR擴(kuò)增獲得Ub基因,分別克隆入本室已構(gòu)建的重組腺病毒轉(zhuǎn)移載體p Shuttle-p CAG-Gn S0.7和p Shuttle-p CAG-Gc S0.7中,進(jìn)一步通過雙酶切將轉(zhuǎn)移載體中的嵌合基因分別克隆入腺病毒載體,得到重組腺病毒載體r Ad-p CAG-Ub-Gn S0.7和r Adp CAG-Ub-Gc S0.7,使用PacⅠ線性化后轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,包裝后獲得重組腺病毒,感染HEK293細(xì)胞后用免疫熒光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果限制性內(nèi)切酶酶切鑒定、PCR擴(kuò)增和測(cè)序結(jié)果顯示,各重組腺病毒轉(zhuǎn)移載體及重組腺病毒載體構(gòu)建正確。IFA檢測(cè)到各重組腺病毒中目的蛋白的表達(dá)。結(jié)論成功制備了含有Ub基因的漢灘病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重組腺病毒,為進(jìn)一步研究聯(lián)合Ub基因的漢灘病毒重組腺病毒的免疫學(xué)特性奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)微生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 漢坦病毒 腺病毒科 泛素
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31070810);國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81001344)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 漢灘病毒(Hantaan virus,HTNV)隸屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬。1976年,韓國學(xué)者李鎬汪于該國疫區(qū)漢灘河流域黑線姬鼠的肺組織中首次成功分離該病毒[1]。該病毒主要宿主為鼠類等嚙齒類動(dòng)物,一般通過動(dòng)物排泄物污染而經(jīng)由呼吸道、消化道及破損的皮膚等途徑傳播給人類,引起腎綜合

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1000301