血管性癡呆大鼠海馬DG區(qū)幾種氨基酸含量的變化
【部分圖文】：
手術(shù)前后大鼠學(xué)習(xí)記憶改變；每次訓(xùn)練開始前１ｄ，為了讓大鼠熟悉環(huán)境，讓大鼠在水池中自由游泳３ｍｉｎ，此時(shí)撤出平臺(tái)；為了評(píng)估大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力，我們進(jìn)行大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)，設(shè)定為每天訓(xùn)練４次，第５次進(jìn)行測試，共需５ｄ完成；將大鼠從入水點(diǎn)背向水池中央放置，記錄６０ｓ內(nèi)大鼠從入水到爬上平臺(tái)所需的時(shí)間，即逃避潛伏期；有的大鼠在６０ｓ內(nèi)能夠找到平臺(tái)，讓其在平臺(tái)上站立１０ｓ，有的大鼠找不到，將大鼠引上平臺(tái)，并讓其停留１０ｓ，此時(shí)潛伏期記為６０ｓ。圖１Ｍｏｒｒｉｓ水迷宮行為學(xué)檢測系統(tǒng)１．５海馬區(qū)微量透析探針及其外套管固定手術(shù)大鼠用１０％水合氯醛（３００ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射麻醉，待大鼠完全麻醉后頭部去毛備皮，將大鼠腹臥位固定于立體腦定位儀上；根據(jù)Ｐａｘｉｎｏｓ和Ｗａｔｓｏｎ所繪制的大鼠腦圖譜，將透析探針外套管插入到ＤＧ區(qū)；ＤＧ區(qū)定位以前囟為參考點(diǎn)，后退３．１～３．３ｍｍ，旁開（左右皆可）１．９～２．１ｍｍ，深度為高于ＤＧ區(qū)１．５ｍｍ的位置，然后用牙托粉將其固定在大鼠顱骨上；術(shù)后把大鼠放在長３０ｃｍ，寬３０ｃｍ，高３５ｃｍ的實(shí)驗(yàn)用不透明的塑料小箱中飼養(yǎng)；第２ｄ大鼠狀態(tài)恢復(fù)后經(jīng)外套管將透析探針插入到海馬ＤＧ區(qū)，用蠟將探針固定在外套管上，探針超出外套管１．５ｍｍ（前端附有半透膜），待大鼠安靜后進(jìn)行腦部微量透析實(shí)驗(yàn)；微量透析探針及其外套管埋入（圖２）。·３３５卒中與神經(jīng)疾菠２０１２年１２月第１９卷第６期
圖２微量透析探針及其外套管的埋入位置模式圖１．６微量透析樣本的收集和氨基酸含量的測定根據(jù)Ｊｉｎ等的方法［５］，微量透析探針連接微量泵，向大鼠海馬ＤＧ區(qū)灌流Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ液，流速為１．５μＬ／ｍｉｎ，待穩(wěn)定９０ｍｉｎ后開始進(jìn)行樣本收集，每管收集量為１５μＬ，收集１０ｍｉｎ，保存在－８０℃冰箱，以備進(jìn)行氨基酸含量分析；每只大鼠收集３個(gè)管，取其平均值；氨基酸含量測定采用高效液相色譜和電化學(xué)檢測系統(tǒng)（ＥＣＤ－３００），�。保拨蹋虡颖竞停矗恚偷模希校寥芤海肠蹋蹋靹蛟谑覝叵路磻�(yīng)２．５ｍｉｎ，抽取上述溶液１０μＬ，通過手動(dòng)進(jìn)樣口注入到系統(tǒng)中進(jìn)行分析，其參數(shù)為流動(dòng)液流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ，壓力＜１０Ｍｐ。１．７組織學(xué)鑒定待樣本收集完后將大鼠麻醉處死，小心剝離腦組織，固定在１０％甲醛溶液中，采用連續(xù)手動(dòng)冰凍切片法做厚度為６０μｍ的腦切片，干燥１ｄ后即可在顯微鏡下觀察。１．８統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（ｍｅａｎｓ±ＳＥ）表示，采用ｔ檢驗(yàn)或單因素方差分析。Ｐ＜０．０５表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。２結(jié)果２．１ＶＤ模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力造模前對(duì)照組、假手術(shù)組和ＶＤ組大鼠的逃避潛伏期隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加逐漸縮短，各組間無顯著性差異（表１）。造模３０ｄ后對(duì)照組和假手術(shù)組與造模前相似，其逃避潛伏期也隨訓(xùn)練天數(shù)的增加而明顯減小，而ＶＤ組的逃避潛伏期雖然也有隨訓(xùn)練天數(shù)而減小的傾向，但減小幅度緩慢，與對(duì)照組和假手術(shù)組相比較有顯著性差異（表２）。２
計(jì)學(xué)意義。２結(jié)果２．１ＶＤ模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力造模前對(duì)照組、假手術(shù)組和ＶＤ組大鼠的逃避潛伏期隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加逐漸縮短，各組間無顯著性差異（表１）。造模３０ｄ后對(duì)照組和假手術(shù)組與造模前相似，其逃避潛伏期也隨訓(xùn)練天數(shù)的增加而明顯減小，而ＶＤ組的逃避潛伏期雖然也有隨訓(xùn)練天數(shù)而減小的傾向，但減小幅度緩慢，與對(duì)照組和假手術(shù)組相比較有顯著性差異（表２）。２．２組織學(xué)鑒定根據(jù)Ｐａｘｉｎｏｓ＆Ｗａｓｔｏｎ的大鼠腦圖譜，對(duì)腦切片標(biāo)本進(jìn)行了組織學(xué)鑒定。圖３是一張典型的組織學(xué)顯微鏡照片，圖中透析探針位于海馬ＤＧ區(qū)。定位不準(zhǔn)確者不計(jì)入統(tǒng)計(jì)。表１造模前各組大鼠逃避潛伏期的比較（ｓ）天數(shù)逃避潛伏期對(duì)照組假手術(shù)組ＶＤ組１ｄ６０６０６０２ｄ５１．４７±２．３５５０．５９±２．５４５０．５９±１．１８３ｄ４０．９８±２．１６４２．３４±１．５６４２．３４±２．０７４ｄ３０．００±２．１３２９．８７±２．３５３０．０４±２．１５５ｄ１７．９４±１．７２１８．４２±１．６７１８．７９±１．９９表２造模３０ｄ后各組大鼠逃避潛伏期的比較（ｓ）天數(shù)逃避潛伏期對(duì)照組假手術(shù)組ＶＤ組１ｄ５０．９８±２．２４５２．４８±２．５４６０２ｄ４０．７８±２．６７４１．５９±３．４１５５．５９±３．６７△３ｄ３３．４３±２．５３３４．５３±２．３６４９．３４±３．１２△４ｄ２３．５７±２．３１２３．２７±２．１９４１．１４±２．５５△５ｄ１４．２８±２．４５１５．２８±２．１１３２．８９±２．７９△注：與對(duì)照組和假手術(shù)組比較，△Ｐ＜０．０５圖３微量透析探針位置標(biāo)記
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