【摘要】：胸腺瘤約占縱隔腫瘤的20%,占前縱隔腫瘤的50%,是目前前縱隔腫瘤中最常見的。因胸腺瘤的產(chǎn)生而出現(xiàn)的異常改變有:自身免疫耐受喪失以及出現(xiàn)多種自身免疫性疾病。在此類自身免疫性疾病中,胸腺瘤患者伴發(fā)自免病中最常見的為重癥肌無力。而患有重癥肌無力的患者,當(dāng)其發(fā)現(xiàn)胸腺出現(xiàn)異常時(shí),選擇手術(shù)切除異常胸腺是有效的治療方法;若未發(fā)現(xiàn)胸腺異常,而且在使用一段時(shí)間藥物治療后癥狀控制效果不佳時(shí),切除胸腺也可以使患者很大程度上改善病情。MG發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,牽涉到體液和細(xì)胞免疫的復(fù)雜生理過程,同時(shí)胸腺在發(fā)病過程中也起到了重要作用。目前已知單核巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞活化后以及內(nèi)皮細(xì)胞等可以生產(chǎn)分泌IL-6,是具有調(diào)節(jié)T、B細(xì)胞功能的重要促炎因子。IL-21可以誘導(dǎo)T、B細(xì)胞增殖、刺激NK細(xì)胞的增殖、分化。IL-6、IL-21通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞在自身免疫性疾病的病理過程中起到重要的作用。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自免病中已有過系統(tǒng)的研究,但在重癥肌無力中的作用還未完全探明。而在大多數(shù)人類腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn),IL-6的基因表達(dá)上調(diào),是癌癥相關(guān)性炎癥的關(guān)鍵參與因子;IL-21起到抑制腫瘤內(nèi)血管的生長增殖并且殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。目的:本研究目的在于進(jìn)一步評(píng)價(jià)IL-6、IL-21在胸腺瘤合并重癥肌無力的發(fā)生發(fā)展過程中起到的影響;明確胸腺瘤細(xì)胞是否有分泌此二種白細(xì)胞介素的功能,并通過這兩種白細(xì)胞介素影響腫瘤周圍環(huán)境,從而造成胸腺瘤組織周圍淋巴細(xì)胞的浸潤和形態(tài)功能變化;明確胸腺瘤對(duì)重癥肌無力的發(fā)生發(fā)展的影響,進(jìn)而拓寬對(duì)胸腺瘤合并MG這類疾病的認(rèn)知,為指導(dǎo)臨床工作提供更多的幫助。方法:本實(shí)驗(yàn)的第一部分將本院心胸外科住院治療的胸腺瘤病人79例,應(yīng)用ELISA方法針對(duì)此臨床病例外周血中IL-6、IL-21的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),用免疫組化方法對(duì)其切除的胸腺組織中IL-6、IL-21的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),通過單因素分析、多因素分析評(píng)價(jià)其表達(dá)水平與臨床病理特征如Osserman分型、病理學(xué)分型等的相關(guān)性,以及二者之間的相關(guān)性。第二部分體外實(shí)驗(yàn)通過培養(yǎng)Thy0517細(xì)胞系,在梯度分段時(shí)間利用RT-PCR及Western Blot分別從mRNA和蛋白水平檢測(cè)Thy0517細(xì)胞系內(nèi)胸腺瘤細(xì)胞IL-6和IL-21的表達(dá)水平變化,驗(yàn)證胸腺瘤細(xì)胞是否有分泌IL-6、IL-21的功能,從而促進(jìn)重癥肌無力的發(fā)生發(fā)展。結(jié)果:第一部分:IL-6的表達(dá)水平在三組樣本中比較顯示,胸腺瘤—MG(+)組高于胸腺瘤—MG(-)(t=2.361,p=0.021),胸腺瘤—MG(+)組顯著高于健康對(duì)照組(t=6.832,p=0.000),胸腺瘤—MG(-)組高于健康對(duì)照組(t=5.248,p=0.000);IL-6的表達(dá)水平在胸腺瘤—MG(+)組內(nèi),重型表達(dá)高于輕型(t=3.804,p=0.000),輕型與胸腺瘤—MG(-)組表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.467,p=0.642)。IL-21的表達(dá)水平在三組樣本中比較顯示,胸腺瘤—MG(+)組高于胸腺瘤—MG(-)組(t=6.673,p=0.000),胸腺瘤—MG(+)組顯著高于健康對(duì)照組(t=11.097,p=0.000),胸腺瘤—MG(-)組高于健康對(duì)照組(t=6.173,p=0.000);IL-21的表達(dá)水平在胸腺瘤—MG(+)組內(nèi),重型表達(dá)高于輕型(t=4.297,p=0.000),輕型表達(dá)高于胸腺瘤—MG(-)組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=4.856,p=0.000)。在79例胸腺瘤病例中,IL-6和IL-21的表達(dá)成正相關(guān),在Osserman分型中,IL-6、IL-21在Ⅳ、Ⅲ、ⅡB型即中重型中表達(dá)高于ⅡA、Ⅰ型即輕型,分型越重,表達(dá)越高;IL-6、IL-21的表達(dá)和胸腺瘤病理學(xué)分型無明顯相關(guān)。在組織中IL-6:胸腺瘤—MG(+)組中高表達(dá)的樣本率為73.33%(33/45)較胸腺瘤—MG(-)組50.00%(17/34)高;在胸腺瘤—MG(+)組中,中重型MG中高表達(dá)的樣本率為94.44%(17/18)較輕型MG 59.26%(16/27)高;胸腺瘤合并MG與單純胸腺瘤比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=4.538,P=0.033);中重型MG與輕型MG比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=6.837,P=0.009),輕型MG與胸腺瘤—MG(-)組比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ~2=0.520,P=0.471)。IL-21:胸腺瘤—MG(+)組中高表達(dá)樣本率為66.67%(30/45)較胸腺瘤—MG(-)組38.24%(13/34)高;在胸腺瘤—MG(+)組中,中重型MG中高表達(dá)樣本率88.89%(16/18)較輕型MG 51.85%(14/27)高。胸腺瘤合并MG與單純胸腺瘤比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=6.312,P=0.012);中重型MG與輕型MG比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=6.667,P=0.010),輕型MG與胸腺瘤—MG(-)組,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ~2=1.131,P=0.288)。上述兩種因子在各病理分型間表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二部分:PCR結(jié)果:IL-6在不同培養(yǎng)時(shí)12h、24h、48h、72h、96h、120h的細(xì)胞系中表達(dá)呈顯著升高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),IL-21在不同培養(yǎng)時(shí)12h、24h、48h、72h、96h、120h的細(xì)胞系中表達(dá)無增高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,Western Blot結(jié)果:IL-6在不同培養(yǎng)時(shí)12h、24h、48h、72h、96h、120h的細(xì)胞系中表達(dá)呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。IL-21在不同培養(yǎng)時(shí)12h、24h、48h、72h、96h、120h的細(xì)胞系中表達(dá)無明顯差異。結(jié)論:1、IL-6、IL-21在胸腺瘤合并重癥肌無力患者外周血及腫瘤組織中表達(dá)明顯增高,而且隨著重癥肌無力的癥狀越重其表達(dá)越高,此二者在MG的發(fā)生發(fā)展過程中起到了作用。2、單純胸腺瘤患者外周血及腫瘤組織中IL-6和IL-21的表達(dá)增高,雖然沒有MG的臨床癥狀,但可能已經(jīng)出現(xiàn)了自身免疫的改變。3、在胸腺瘤合并重癥肌無力以及單純胸腺瘤患者外周血及腫瘤組織中IL-6和IL-21的表達(dá)正相關(guān),此二者共同影響MG的發(fā)生和發(fā)展。4、體外培養(yǎng)上皮型胸腺瘤細(xì)胞,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長,IL-6的基因和蛋白表達(dá)明顯增高,IL-21的基因和蛋白表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)比較未見明顯增高趨勢(shì),結(jié)合臨床結(jié)果,表明IL-6除了免疫細(xì)胞分泌外,也可能來源于胸腺瘤上皮細(xì)胞的分泌,但是IL-21的分泌可能絕大部分來源于胸腺瘤組織浸潤的免疫細(xì)胞,而并不依賴上皮型胸腺瘤細(xì)胞的分泌。
【圖文】：

MG（+）組中 Osserman 分型、病理學(xué)分型分腺瘤病例中，IL-6和IL-21的表達(dá)成正相關(guān)（rman 分型中，IL-6、IL-21 在Ⅳ、Ⅲ、ⅡB 型型，分型越重，表達(dá)越高（見表 2）；IL-6、明顯相關(guān)。表 3： 兩組樣本中 IL-6、IL-21 的表達(dá)水平例數(shù) IL-6（pg/ml） P 值 IL-重型 18 159.22±24.61 0.000a 19型 27 134.04±19.67 1734 131.56±21.29 0.642b 14組內(nèi)中重型與輕型比較，，b 為胸腺瘤—MG（+）組內(nèi)輕計(jì)學(xué)意義

A.胸腺瘤合并中重型 MG 組中高表達(dá) B.胸腺瘤合并中重型 MG 組中低表達(dá)C.胸腺瘤合并輕型 MG 組中高表達(dá) D.胸腺瘤合并輕型 MG 組中低表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R736.3;R746.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳強(qiáng),余青,吳江聲,陳慰峰;ICAM-1抗體誘導(dǎo)小鼠胸腺上皮細(xì)胞分泌IL-6[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1998年04期

本文編號(hào)：2599425