【摘要】：胸腺瘤約占縱隔腫瘤的20%,占前縱隔腫瘤的50%,是目前前縱隔腫瘤中最常見的。因胸腺瘤的產生而出現的異常改變有:自身免疫耐受喪失以及出現多種自身免疫性疾病。在此類自身免疫性疾病中,胸腺瘤患者伴發(fā)自免病中最常見的為重癥肌無力。而患有重癥肌無力的患者,當其發(fā)現胸腺出現異常時,選擇手術切除異常胸腺是有效的治療方法;若未發(fā)現胸腺異常,而且在使用一段時間藥物治療后癥狀控制效果不佳時,切除胸腺也可以使患者很大程度上改善病情。MG發(fā)病機制復雜,牽涉到體液和細胞免疫的復雜生理過程,同時胸腺在發(fā)病過程中也起到了重要作用。目前已知單核巨噬細胞、T細胞、B細胞等免疫細胞活化后以及內皮細胞等可以生產分泌IL-6,是具有調節(jié)T、B細胞功能的重要促炎因子。IL-21可以誘導T、B細胞增殖、刺激NK細胞的增殖、分化。IL-6、IL-21通過調節(jié)免疫細胞在自身免疫性疾病的病理過程中起到重要的作用。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕關節(jié)炎等自免病中已有過系統(tǒng)的研究,但在重癥肌無力中的作用還未完全探明。而在大多數人類腫瘤的研究中發(fā)現,IL-6的基因表達上調,是癌癥相關性炎癥的關鍵參與因子;IL-21起到抑制腫瘤內血管的生長增殖并且殺傷腫瘤細胞的作用。目的:本研究目的在于進一步評價IL-6、IL-21在胸腺瘤合并重癥肌無力的發(fā)生發(fā)展過程中起到的影響;明確胸腺瘤細胞是否有分泌此二種白細胞介素的功能,并通過這兩種白細胞介素影響腫瘤周圍環(huán)境,從而造成胸腺瘤組織周圍淋巴細胞的浸潤和形態(tài)功能變化;明確胸腺瘤對重癥肌無力的發(fā)生發(fā)展的影響,進而拓寬對胸腺瘤合并MG這類疾病的認知,為指導臨床工作提供更多的幫助。方法:本實驗的第一部分將本院心胸外科住院治療的胸腺瘤病人79例,應用ELISA方法針對此臨床病例外周血中IL-6、IL-21的表達水平進行檢測,用免疫組化方法對其切除的胸腺組織中IL-6、IL-21的表達進行檢測,通過單因素分析、多因素分析評價其表達水平與臨床病理特征如Osserman分型、病理學分型等的相關性,以及二者之間的相關性。第二部分體外實驗通過培養(yǎng)Thy0517細胞系,在梯度分段時間利用RT-PCR及Western Blot分別從mRNA和蛋白水平檢測Thy0517細胞系內胸腺瘤細胞IL-6和IL-21的表達水平變化,驗證胸腺瘤細胞是否有分泌IL-6、IL-21的功能,從而促進重癥肌無力的發(fā)生發(fā)展。結果:第一部分:IL-6的表達水平在三組樣本中比較顯示,胸腺瘤—MG(+)組高于胸腺瘤—MG(-)(t=2.361,p=0.021),胸腺瘤—MG(+)組顯著高于健康對照組(t=6.832,p=0.000),胸腺瘤—MG(-)組高于健康對照組(t=5.248,p=0.000);IL-6的表達水平在胸腺瘤—MG(+)組內,重型表達高于輕型(t=3.804,p=0.000),輕型與胸腺瘤—MG(-)組表達無統(tǒng)計學差異(t=0.467,p=0.642)。IL-21的表達水平在三組樣本中比較顯示,胸腺瘤—MG(+)組高于胸腺瘤—MG(-)組(t=6.673,p=0.000),胸腺瘤—MG(+)組顯著高于健康對照組(t=11.097,p=0.000),胸腺瘤—MG(-)組高于健康對照組(t=6.173,p=0.000);IL-21的表達水平在胸腺瘤—MG(+)組內,重型表達高于輕型(t=4.297,p=0.000),輕型表達高于胸腺瘤—MG(-)組,有統(tǒng)計學差異(t=4.856,p=0.000)。在79例胸腺瘤病例中,IL-6和IL-21的表達成正相關,在Osserman分型中,IL-6、IL-21在Ⅳ、Ⅲ、ⅡB型即中重型中表達高于ⅡA、Ⅰ型即輕型,分型越重,表達越高;IL-6、IL-21的表達和胸腺瘤病理學分型無明顯相關。在組織中IL-6:胸腺瘤—MG(+)組中高表達的樣本率為73.33%(33/45)較胸腺瘤—MG(-)組50.00%(17/34)高;在胸腺瘤—MG(+)組中,中重型MG中高表達的樣本率為94.44%(17/18)較輕型MG 59.26%(16/27)高;胸腺瘤合并MG與單純胸腺瘤比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=4.538,P=0.033);中重型MG與輕型MG比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=6.837,P=0.009),輕型MG與胸腺瘤—MG(-)組比較,無統(tǒng)計學差異(χ~2=0.520,P=0.471)。IL-21:胸腺瘤—MG(+)組中高表達樣本率為66.67%(30/45)較胸腺瘤—MG(-)組38.24%(13/34)高;在胸腺瘤—MG(+)組中,中重型MG中高表達樣本率88.89%(16/18)較輕型MG 51.85%(14/27)高。胸腺瘤合并MG與單純胸腺瘤比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=6.312,P=0.012);中重型MG與輕型MG比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=6.667,P=0.010),輕型MG與胸腺瘤—MG(-)組,無統(tǒng)計學差異(χ~2=1.131,P=0.288)。上述兩種因子在各病理分型間表達差異無統(tǒng)計學意義。第二部分:PCR結果:IL-6在不同培養(yǎng)時12h、24h、48h、72h、96h、120h的細胞系中表達呈顯著升高趨勢,各時間點間差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),IL-21在不同培養(yǎng)時12h、24h、48h、72h、96h、120h的細胞系中表達無增高趨勢,各時間點間無統(tǒng)計學差異,Western Blot結果:IL-6在不同培養(yǎng)時12h、24h、48h、72h、96h、120h的細胞系中表達呈現升高趨勢。IL-21在不同培養(yǎng)時12h、24h、48h、72h、96h、120h的細胞系中表達無明顯差異。結論:1、IL-6、IL-21在胸腺瘤合并重癥肌無力患者外周血及腫瘤組織中表達明顯增高,而且隨著重癥肌無力的癥狀越重其表達越高,此二者在MG的發(fā)生發(fā)展過程中起到了作用。2、單純胸腺瘤患者外周血及腫瘤組織中IL-6和IL-21的表達增高,雖然沒有MG的臨床癥狀,但可能已經出現了自身免疫的改變。3、在胸腺瘤合并重癥肌無力以及單純胸腺瘤患者外周血及腫瘤組織中IL-6和IL-21的表達正相關,此二者共同影響MG的發(fā)生和發(fā)展。4、體外培養(yǎng)上皮型胸腺瘤細胞,隨著培養(yǎng)時間延長,IL-6的基因和蛋白表達明顯增高,IL-21的基因和蛋白表達各時間點比較未見明顯增高趨勢,結合臨床結果,表明IL-6除了免疫細胞分泌外,也可能來源于胸腺瘤上皮細胞的分泌,但是IL-21的分泌可能絕大部分來源于胸腺瘤組織浸潤的免疫細胞,而并不依賴上皮型胸腺瘤細胞的分泌。
【圖文】：

MG（+）組中 Osserman 分型、病理學分型分腺瘤病例中，IL-6和IL-21的表達成正相關（rman 分型中，IL-6、IL-21 在Ⅳ、Ⅲ、ⅡB 型型，分型越重，表達越高（見表 2）；IL-6、明顯相關。表 3： 兩組樣本中 IL-6、IL-21 的表達水平例數 IL-6（pg/ml） P 值 IL-重型 18 159.22±24.61 0.000a 19型 27 134.04±19.67 1734 131.56±21.29 0.642b 14組內中重型與輕型比較，，b 為胸腺瘤—MG（+）組內輕計學意義

A.胸腺瘤合并中重型 MG 組中高表達 B.胸腺瘤合并中重型 MG 組中低表達C.胸腺瘤合并輕型 MG 組中高表達 D.胸腺瘤合并輕型 MG 組中低表達
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R736.3;R746.1

【參考文獻】

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1 吳強,余青,吳江聲,陳慰峰;ICAM-1抗體誘導小鼠胸腺上皮細胞分泌IL-6[J];中華微生物學和免疫學雜志;1998年04期

本文編號：2599425