【摘要】：目的： 外傷、皮膚黏膜病、放射性因素以及各種生化因素等導(dǎo)致的上皮損傷,往往伴隨著組織的嚴(yán)重缺損,依靠自身的恢復(fù)能力難以恢復(fù)到正常的組織結(jié)構(gòu)和功能狀態(tài),快速的創(chuàng)面再上皮化是減少創(chuàng)面感染和提高患者救治成功率的關(guān)鍵。目前組織工程為上皮缺損修復(fù)開(kāi)辟了新途徑,已有研究證明大鼠骨髓MSC經(jīng)誘導(dǎo)后可以表達(dá)上皮特異性蛋白-角蛋白。但MSC的獲取較難。 目前研究發(fā)現(xiàn)：牙齦成纖維細(xì)胞自我更新能力活躍,在牙周、牙齦組織的保護(hù)和修復(fù)中起重要作用。最近發(fā)現(xiàn)的牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞具有易取材,增殖快,有成骨、成脂肪、成軟骨細(xì)胞等多向分化的能力,表明牙齦成纖維細(xì)胞中可能儲(chǔ)存有部分干細(xì)胞特性的細(xì)胞,因此牙齦成纖維細(xì)胞有望成為組織損傷修復(fù)的相對(duì)理想的種子細(xì)胞。 為探討牙齦成纖維細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞應(yīng)用于上皮損傷修復(fù)的可能性,本次實(shí)驗(yàn)采用表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)誘導(dǎo)法誘導(dǎo)牙齦成纖維細(xì)胞向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化,同時(shí)在條件培養(yǎng)基中加入一定濃度的IL-6、IL-10初步模擬炎性環(huán)境,探討炎癥因子對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞上皮化的影響,檢測(cè)牙齦成纖維細(xì)胞向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的潛力,以及不同炎癥環(huán)境對(duì)其轉(zhuǎn)化效率的影響,以期為將牙齦成纖維細(xì)胞引入創(chuàng)傷修復(fù)的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)支持。 方法： 1.組織塊法體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞,傳代培養(yǎng)至第4-7代,細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)其角蛋白及波形蛋白表達(dá)。 2.傳代培養(yǎng)牙齦成纖維細(xì)胞至4-7代,調(diào)整細(xì)胞密度0.5×106/L,配制條件培養(yǎng)基(含10μg/L EGF、2%胎牛血清、1%雙抗的EpicM培養(yǎng)基),設(shè)置分別加入10μg/L IL-6、10μg/LIL-10的條件培養(yǎng)基,用于誘導(dǎo)培養(yǎng)；對(duì)照組為完全培養(yǎng)基(含10%FBS、1%雙抗的α-DMEM培養(yǎng)基),誘導(dǎo)期為4天。細(xì)胞免疫化學(xué)法及免疫熒光染色法檢測(cè)角蛋白以及波形蛋白的表達(dá),流式細(xì)胞儀法定量檢測(cè)角蛋白表達(dá)率。 結(jié)果： 1.約4天左右,細(xì)胞開(kāi)始從組織塊周圍爬出,一個(gè)半月左右細(xì)胞可傳至第3代,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)良好,形態(tài)穩(wěn)定,均一,雜質(zhì)細(xì)胞少,細(xì)胞純度較高,滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的條件。細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)見(jiàn)角蛋白表達(dá)陰性波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)。 2.誘導(dǎo)培養(yǎng)4天后,細(xì)胞免疫化學(xué)染色EGF組、EGF+IL-6組、EGF+IL-10組均可見(jiàn)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白角蛋白的陽(yáng)性表達(dá),波形蛋白表達(dá)陽(yáng)性；免疫熒光染色顯示,各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞角蛋白熒光表達(dá)陽(yáng)性的同時(shí),波形蛋白熒光表達(dá)也呈陽(yáng)性,但相同曝光度下角蛋白熒光表達(dá)強(qiáng)度較波形蛋白強(qiáng)度弱,對(duì)照組角蛋白表達(dá)陰性,波形蛋白表達(dá)陽(yáng)性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞角蛋白表達(dá)率分別為條件培養(yǎng)基(EGF)組72.5%、條件培養(yǎng)基+IL-6誘導(dǎo)組(EGF+IL-6)91.9%、條件培養(yǎng)基+IL-10誘導(dǎo)組(EGF+IL-10)86.3%、對(duì)照組68.9%。 結(jié)論： 實(shí)驗(yàn)表明人牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)具有易取材、增殖快、形態(tài)穩(wěn)定的特點(diǎn)。牙齦成纖維細(xì)胞在一定濃度EGF存在下可以被誘導(dǎo)表達(dá)角蛋白,具有向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的潛能。炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-10可明顯提高EGF誘導(dǎo)牙齦成纖維細(xì)胞表達(dá)角蛋白的效率,為將牙齦成纖維細(xì)胞引入上皮損傷的修復(fù)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R781.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2639776