發(fā)布時間：2017-09-30 00:06

  本文關(guān)鍵詞：小分子水凝膠攜帶miR-499轉(zhuǎn)染的MSCs移植治療大鼠急性心肌梗死的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 小分子水凝膠 microRNA 骨髓間充質(zhì)干細胞 心肌分化 心肌梗死 心肌組織工程

【摘要】：研究目的 1.探討miR-499對誘導MSCs向心肌細胞分化的作用。 2.觀察小分子水凝膠攜帶過表達miR-499的MSCs移植對AMI大鼠心臟功能的影響以及植入MSCs存活、滯留、分化等情況。 研究方法 1.將用嘌呤霉素篩選后帶有GFP熒光標記和嘌呤霉素抗性的miR-499慢病毒載體轉(zhuǎn)染MSCs，48小時后檢測感染效率，以MOI=200確定慢病毒感染的最佳濃度；7天后qRT-PCR檢測細胞中miR-499、心肌特異性基因GATA4、Nkx2.5、cTnI的表達情況。 2.在MSCs中過表達miR-499后，qRT-PCR檢測心肌特異性基因GATA4、Nkx2.5、cTnI mRNA的表達變化。 3.通過結(jié)扎S-D大鼠冠狀動脈左前降支的方法建立急性心肌梗死模型，1周后將成模大鼠隨機分為5組：PBS注射組、MSCs注射組、SMHs注射組、miR-499MSCs注射組、SMHs+miR-499MSCs注射組。 4.細胞移植術(shù)后4周行心臟彩超檢測心功能。 5.取材立即冰凍切片，熒光倒置顯微鏡下觀察各組細胞滯留情況，免疫熒光組織化學檢測植入MSCs中cTnT、Desmin、Cx43等蛋白的表達情況。 6.石蠟切片，CD31免疫組織化學染色計算各組梗死區(qū)以及梗死周邊區(qū)新生血管數(shù)，HE染色、Masson三色染色觀察各組心肌梗死區(qū)心肌纖維化程度、室壁厚度以及梗死面積。 實驗結(jié)果 1.經(jīng)篩選穩(wěn)定表達miR-499的MSCs與NC-puro-GFP慢病毒載體轉(zhuǎn)染的MSCs比較，qRT-PCR檢測細胞中miR-499、心肌特異性基因GATA4、Nkx2.5、cTnI的表達變化，前者的表達明顯上升。 2.細胞移植治療4周后，各組動物行心臟彩超檢測心功能，結(jié)果顯示各處理組均有不同程度的改善，SMHs+miR-499MSCs組最明顯，MSCs組、SMHs組、miR-499MSCs組次之； 3.取材冰凍切片，熒光倒置顯微鏡下觀察，SMHs+miR-499MSCs組細胞滯留明顯增多，MSCs組、miR-499MSCs組較少； 4.免疫熒光組織化學檢測結(jié)果顯示，與MSCs組比較，SMHs+miR-499MSCs組心肌特異性蛋白cTnT、Desmin、Cx-43的表達最強，miR-499MSCs組次之； 5.石蠟切片，HE染色、Masson三色染色可見，與PBS組比較，SMHs+miR-499MSCs組心梗死區(qū)面積明顯減小、纖維化程度低、室壁明顯增厚，MSCs組、SMHs組、miR-499MSCs組也有所改善，但次于SMHs+miR-499MSCs組； 6. CD31免疫組織化學染色結(jié)果顯示，SMHs+miR-499MSCs組梗死區(qū)新生血管數(shù)最多，但梗死周邊區(qū)新生血管數(shù)與PBS組比較無明顯差異，其他各組梗死周邊區(qū)新生血管數(shù)增多，但各組間比較無顯著差異。 結(jié)論 1. miR-499可誘導MSCs向心肌樣細胞分化。 2.在體內(nèi)通過心肌內(nèi)注射用SMHs三維包裹過表達miR-499的MSCs更有利于MSCs移植后向心肌細胞分化，減輕心肌纖維化程度，促進梗死區(qū)血管再生，，改善心臟功能。SMHs體內(nèi)移植使細胞滯留明顯增多；miR-499與SMHs聯(lián)合應(yīng)用心臟功能改善更明顯。
【關(guān)鍵詞】：小分子水凝膠 microRNA 骨髓間充質(zhì)干細胞 心肌分化 心肌梗死 心肌組織工程
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 英漢名詞縮略語3-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 第一部分 MIR 499 體外誘導 MSCS 向心肌樣細胞分化13-30
• 一 研究目的13
• 二 材料與方法13-24
• 三 結(jié)果24-26
• 四 討論26-29
• 小結(jié)29-30
• 第二部分 小分子水凝膠攜帶MIR 499轉(zhuǎn)染的MSCS移植對梗死心肌的修復(fù)作用30-54
• 一 實驗?zāi)康?/span>30
• 二 材料和方法30-38
• 三 結(jié)果38-47
• 四 討論47-53
• 小結(jié)53-54
• 全文結(jié)論54-55
• 參考文獻55-61
• MIRNA 在心血管疾病中的研究進展61-69
• 參考文獻66-69
• 致謝69-70
• 學位攻讀期間論文發(fā)表情況70-71

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