目的： 探討急性肝衰竭（ALF）大鼠模型腸道防御素-5(RD-5)、分泌型磷脂酶A2（sPLA2）和溶菌酶(Lysozyme)表達(dá)變化及與細(xì)菌移位的關(guān)系。 方法： 清潔級(jí)常規(guī)喂養(yǎng)雄性SD大鼠，1周后隨機(jī)分為正常對(duì)照組和ALF模型組。正常對(duì)照組8只，腹腔注射0.9%氯化鈉溶液1.2ml/100g；ALF模型組40只，按造模后不同觀察時(shí)間點(diǎn)分為8、16、24、48、72小時(shí)5個(gè)時(shí)間亞組，每組8只，一次性腹腔注射10%D-氨基半乳糖1.2ml/100g。于各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè)：①取各組肝、脾和腸系膜淋巴結(jié)組織勻漿進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)；②檢測(cè)血清ALT、AST、Tbil、Alb水平；③肝組織和末段回腸組織經(jīng)HE染色后光鏡下觀察病理變化；④RT-PCR法檢測(cè)各組末段回腸RD-5、sPLA2、LysozymemRNA表達(dá)；⑤Western blot和免疫組化法檢測(cè)sPLA2和Lysozyme蛋白表達(dá)。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。 結(jié)果： 1、急性肝衰竭模型組ALT、AST逐漸升高，于48h達(dá)到高峰，并出現(xiàn)總膽紅素明顯升高，隨后轉(zhuǎn)氨酶下降，總膽紅素繼續(xù)上升。模型組72h肝臟組織正常結(jié)構(gòu)消失，呈大片融合壞死，超過(guò)整個(gè)切片面積的2/3，殘留少量肝細(xì)胞，匯管區(qū)及壞死區(qū)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇充血、出血明顯，符合急性肝衰竭病理改變，成功誘導(dǎo)急性肝衰竭模型。 2、正常對(duì)照組未出現(xiàn)臟器細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性，模型組24h、48h和72h臟器細(xì)菌移位率分別為8.3%、37.5%和58.3%，但是，72h大鼠模型的末端回腸結(jié)構(gòu)尚完整，未見(jiàn)粘膜上皮細(xì)胞明顯脫落壞死情況。 3、模型組大鼠回腸RD-5、sPLA2mRNA在早期逐漸升高，16h上升至高峰（1.291±0.153、1.131±0.128），與對(duì)照組（0.725±0.116、0.722±0.112）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=69.25、95.71，均P=0.000），隨后逐漸下降，72h（0.415±0.104、0.425±0.076）明顯低于對(duì)照組（t=31.55、44.98，均P=0.000）；對(duì)照組LysozymemRNA為0.853±0.093，模型組早期亦升高，8h上升至高峰(1.211±0.107)，最后下降，72h(0.704±0.103），明顯低于對(duì)照組（t=9.224；p=0.009）。Western blot法檢測(cè)sPLA2和Lysozyme蛋白表達(dá)，對(duì)照組分別為0.583±0.121和0.650±0.093，模型組72h分別為0.327±0.086和0.382±0.057，均明顯低于對(duì)照組（t=12.28、15.83，p=0.004、0.001）。sPLA2蛋白在對(duì)照組回腸潘氏細(xì)胞內(nèi)呈粗顆粒棕色信號(hào)，而在模型組72h時(shí)僅可見(jiàn)少量點(diǎn)狀棕色信號(hào)分布；Lysozyme蛋白在對(duì)照組回腸所有潘氏細(xì)胞中呈粗顆粒強(qiáng)信號(hào)，而在模型組72h時(shí)在部分潘氏細(xì)胞中呈散在點(diǎn)狀信號(hào)。 結(jié)論： 急性肝衰竭大鼠模型的回腸粘膜免疫屏障功能下降，隨著潘氏細(xì)胞RD-5、sPLA2和Lysozyme的表達(dá)下降，臟器細(xì)菌移位率增加，且不伴有明顯腸粘膜損傷的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類(lèi)】：R575.3
【部分圖文】：

圖 1 肝臟和末段回腸組織病理檢查結(jié)果和末段回腸 sPLA2、Lysozyme 蛋白的表達(dá)。A常對(duì)照組肝臟（HE×200）；B：模型組 72h 肝臟（HE×200）；C：正常對(duì)照組末段回腸HE×200）；D：模型組 72h 末段回腸（HE×200）；E：正常對(duì)照組回腸 Lysozyme 蛋白的達(dá)（DAB ×400）；F：模型組 72h 回腸 Lysozyme 蛋白的表達(dá)（DAB ×400）；G：正常照組回腸 sPLA2 蛋白的表達(dá)（DAB ×400）；H：模型組 72h 回腸 sPLA2 蛋白的表達(dá)（DA400）。

第 3 章 結(jié)果計(jì)學(xué)意義（t=69.25、95.71，均 P<0.01），隨后逐漸下降，72h（0.41.076）明顯低于對(duì)照組（t=31.55、44.98，均 P<0.01）；對(duì)照組 為 0.853±0.093，模型組早期亦升高，8h 上升至高峰（1.211±0.172h(0.704±0.103）明顯低于對(duì)照組（t=9.224；p<0.01）

3 Western blot 檢測(cè)末段回腸 sPLA2、Lysozyme 蛋白水平。1 為正常對(duì)照組；2～6 分別型組 8、16、24、48、72h。與對(duì)照比相比，**P<0.01，*P<0.05。.6 急性肝衰竭大鼠末段回腸 sPLA2、Lysozyme 蛋白免疫組織化學(xué)色sPLA2、Lysozyme 蛋白分布于腸隱窩潘氏細(xì)胞內(nèi)。sPLA2 蛋白在對(duì)照組潘氏細(xì)胞內(nèi)呈粗顆粒棕色信號(hào)，而在模型組 72h 時(shí)僅可見(jiàn)少量點(diǎn)狀棕色信布；Lysozyme 蛋白在對(duì)照組回腸所有潘氏細(xì)胞中呈粗顆粒強(qiáng)信號(hào)，而在模 72h 時(shí)在部分潘氏細(xì)胞中呈散在點(diǎn)狀信號(hào)（圖 1）。
【參考文獻(xiàn)】

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1 李鋼;胡祖健;王凱誠(chéng);羅靜;趙金鋒;劉世賓;嚴(yán)萍;陳海平;;實(shí)驗(yàn)性重癥急性胰腺炎對(duì)SD大鼠小腸防御素-5基因表達(dá)的影響[J];肝膽胰外科雜志;2007年06期

2 趙希敏;劉霞;;顱腦損傷大鼠腸道防御素-5 mRNA表達(dá)[J];臨床神經(jīng)外科雜志;2007年01期

3 劉冬妍;丁鵬;劉沛;;急性肝壞死動(dòng)物模型腸道SIgA的變化[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年08期

本文編號(hào)：2844461