發(fā)布時(shí)間：2017-09-29 23:34

  本文關(guān)鍵詞：REG3A誘導(dǎo)SHP-1調(diào)節(jié)非感染傷口TLR3-依賴型炎癥發(fā)生的功能機(jī)制

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【摘要】：傷口愈合是機(jī)體維持穩(wěn)態(tài)的一個(gè)不可或缺的生理過程,其中炎癥期對(duì)于傷口愈合過程至關(guān)重要。適度的炎癥反應(yīng)有助于清除細(xì)菌和細(xì)胞碎片,促進(jìn)組織修復(fù),而過度的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致傷口的難以愈合、組織壞死甚至多器官衰竭。長(zhǎng)久以來科學(xué)家們研究的熱點(diǎn)集中在微生物感染導(dǎo)致的炎癥反應(yīng),而忽略了非微生物感染引發(fā)的過度炎癥帶來的危害。因此,對(duì)非感染傷口炎癥機(jī)制的探究迫在眉睫。REG3A是一種多功能蛋白,雖然能夠抑制胰腺炎、腸炎和角膜炎等炎癥反應(yīng)的發(fā)生,但對(duì)皮膚炎癥的調(diào)節(jié)作用尚未有報(bào)道,其機(jī)制的研究更是空白。本課題首次發(fā)現(xiàn)除了已知的MyD88信號(hào)通路外,非依賴于接頭分子MyD88的TLR3信號(hào)通路也能介導(dǎo)REG3A的表達(dá),較于野生型小鼠傷口,TLR3基因敲除小鼠非感染傷口皮膚中RegⅢγ表達(dá)明顯降低,并且在原代角質(zhì)形成細(xì)胞中沉默TLR3受體后,poly(I:C)誘導(dǎo)的REG3A也明顯變少。此外,小鼠背部皮間注射重組蛋白R(shí)egⅢγ后能夠抑制非感染傷口TLR3依賴性炎癥因子的產(chǎn)生,重組蛋白R(shí)EG3A在原代角質(zhì)形成細(xì)胞中也能夠抑制poly(I:C)誘導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá),表明REG3A對(duì)非感染傷口炎癥的負(fù)調(diào)節(jié)功能。揭示了機(jī)體中存在的一種“穩(wěn)態(tài)”機(jī)制,即TLR3的激活促進(jìn)炎癥反應(yīng)的同時(shí)還會(huì)誘導(dǎo)抗炎蛋白R(shí)EG3A的表達(dá),防止過度炎癥的發(fā)生。隨后,我們?cè)敱M的探究了REG3A的抗炎機(jī)制。首先我們純化得到不同結(jié)構(gòu)域的REG3A蛋白與poly(I:C)共刺激角質(zhì)形成細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)REG3A的CTLD (C類凝集素結(jié)構(gòu)域)是其發(fā)揮抗炎功能的主要片段。在角質(zhì)形成細(xì)胞中通過抑制劑篩選發(fā)現(xiàn)TLR3主要通過激活JNK信號(hào)通路誘導(dǎo)炎癥因子的產(chǎn)生,而REG3A正是通過抑制TLR3介導(dǎo)的JNK2的磷酸化從而發(fā)揮抗炎功能,小鼠在體實(shí)驗(yàn)也證明了這一點(diǎn)。為了進(jìn)一步證明REG3A是如何發(fā)揮去磷酸化功能的,我們對(duì)REG3A刺激角質(zhì)形成細(xì)胞樣品進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)REG3A并不能誘導(dǎo)TLR下游負(fù)調(diào)節(jié)子A20、SARM或TRAF1的表達(dá),卻能夠誘導(dǎo)負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的表達(dá),并且小鼠背部皮間注射RegⅢγ也發(fā)現(xiàn)能夠時(shí)間依賴性誘導(dǎo)SHP-1的表達(dá)。而REG3A主要是通過結(jié)合其受體EXTL3 (1-141aa)激活A(yù)KT-STAT3信號(hào)通路,從而誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞中負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1的表達(dá)。將SHP-1基因沉默后,REG3A將不能夠使JNK2去磷酸化及抑制TLR3介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),表明REG3A是通過誘導(dǎo)SHP-1的表達(dá)使TLR3介導(dǎo)的JNK2去磷酸化從而抑制炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生。綜上所述,我們的研究首次發(fā)現(xiàn)了TLR3信號(hào)通路的激活能夠介導(dǎo)REG3A的表達(dá),并且REG3A能夠通過誘導(dǎo)負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1使JNK2去磷酸化從而抑制非感染傷口TLR3-依賴型炎癥的過表達(dá),詳盡的證明了其中的調(diào)控機(jī)制,為防止非感染傷口的發(fā)炎提供了一種非抗生素治療的新方法。
【關(guān)鍵詞】：胰再生源蛋白3A EXTL3 SHP-1 炎癥
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R641
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-12
• 第一章 綜述12-28
• 1. 皮膚傷口愈合過程12-15
• 1.1 皮膚的組成結(jié)構(gòu)12-13
• 1.2 傷口愈合過程13-15
• 2. TLR與傷口炎癥反應(yīng)15-20
• 2.1 Toll樣受體(TLR)15-17
• 2.2 角質(zhì)形成細(xì)胞中TLR介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)17-20
• 3. 胰再生源蛋白3A(REG3A)20-26
• 3.1 Reg蛋白與受體20-21
• 3.2 Reg蛋白的功能21-24
• 3.3 Reg蛋白的表達(dá)調(diào)節(jié)24-26
• 4. 負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1在炎癥反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用26-28
• 第二章 REG3A誘導(dǎo)SHP-1調(diào)節(jié)TLR3依賴性炎癥的發(fā)生的功能機(jī)制28-83
• 一、引言28-29
• 二、實(shí)驗(yàn)材料29-35
• 三、實(shí)驗(yàn)方法35-50
• 四、結(jié)果與分析50-80
• 1. Tlr3介導(dǎo)皮膚傷口處RegⅢγ表達(dá)50-51
• 2. TLR3介導(dǎo)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞中REG3A表達(dá)51-52
• 3. RegⅢγ抑制小鼠皮膚傷口Tlr3介導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)52-53
• 4. RegⅢγ抑制小鼠皮膚傷口炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)53-54
• 5. REG3A在角質(zhì)形成細(xì)胞中抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答54-55
• 6. REG3A通過CTLD抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)55-56
• 7. REG3A通過其CTLD抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的趨化因子的表達(dá)56-57
• 8. poly(I：C)在角質(zhì)形成細(xì)胞中通過激活JNK2誘導(dǎo)炎癥應(yīng)答57-59
• 9. TLR3通過JNK2信號(hào)通路介導(dǎo)皮膚傷口處炎癥因子表達(dá)59-60
• 10. REG3A通過阻斷JNK pathway抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)60-63
• 11. REG3A在角質(zhì)形成細(xì)胞中不誘導(dǎo)TRAF1、SARM及A20的表達(dá)63-64
• 12. REG3A在角質(zhì)形成細(xì)胞中誘導(dǎo)負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1的表達(dá)64-65
• 13. C-REG3A在角質(zhì)形成細(xì)胞中誘導(dǎo)負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1的表達(dá)65-66
• 14. RegⅢγ體內(nèi)誘導(dǎo)負(fù)調(diào)節(jié)子SHP-1蛋白水平表達(dá)66-67
• 15. 體外超表達(dá)SHP-1能抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答67-68
• 16. REG3A抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答依賴于SHP-168-69
• 17. REG3A與受體EXTL3氮端(1-141aa)相互作用69-70
• 18. REG3A通過CTLD與受體EXTL3氮端(1-141aa)相互作用70-71
• 19. REG3A通過EXTL3誘導(dǎo)SHP-1抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答71-72
• 20. REG3A通過STAT3及AKT信號(hào)通路誘導(dǎo)SHP-1表達(dá)72-74
• 21. REG3A通過AKT-STAT3信號(hào)通路誘導(dǎo)SHP-1表達(dá)74
• 22. SHP-1功能缺陷突變質(zhì)粒的構(gòu)建74-75
• 23. REG3A通過誘導(dǎo)SHP-1抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的JNK2的磷酸化75-77
• 24. REG3A誘導(dǎo)SHP-1能與JNK2相互作用77-78
• 25. JNK2不依賴于其磷酸化位點(diǎn)與SHP-1相互結(jié)合78-80
• 五、討論80-83
• 第三章 總結(jié)83-86
• 參考文獻(xiàn)86-90
• 附錄90-91
• 碩士期間發(fā)表研究論文91-92
• 致謝92-93

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本文編號(hào)：944913