本文關鍵詞：YAP（yes-associated-protein）在兔耳增生性瘢痕中表達的實驗研究

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【摘要】：目的:Hippo信號通路是在果蠅身上發(fā)現(xiàn)控制器官大小的重要信號通路,yap蛋白是其中重要核心組件。組織器官對外界機械張力轉化為生物化學分子效應與Hippo信號通路密切相關。創(chuàng)面愈合及瘢痕形成涉及一系列復雜生物細胞學過程,增生性瘢痕的發(fā)生與多方面因素相關,如性別、年齡、體質、感染等,病理上表現(xiàn)則是成纖維細胞大量增殖及細胞外基質沉淀,yap蛋白與成纖維細胞感受瘢痕壓力、增殖及生長因子的分泌密切相關。本實驗擬通過觀察兔耳創(chuàng)面愈合至增生性瘢痕形成這一過程中yap蛋白的表達、分布及變化,探討yap蛋白在創(chuàng)面修復及瘢痕增生中的作用,為瘢痕的形成提供分子水平的理論依據,為瘢痕治療提供新的思路方法及治療靶點。方法:選取10只新西蘭大耳白兔(由瀘州醫(yī)學院動物實驗中心中心提供),雌雄不限,體重平均2.5-3.0Kg。將每只兔子左耳設定為A組,右耳設定為B組,A組每只大耳兔用打孔器在左耳打3個直徑0.6cm圓形全層皮損至軟骨,并徹底破壞軟骨膜,熱凝止血;B組每只大耳兔耳用打孔器打3個直徑1cm圓形全層皮損至軟骨,徹底破壞軟骨膜,熱凝止血,每個創(chuàng)面間隔1cm。其后,每只兔子飼養(yǎng)條件相同,7天后祛除痂殼。14天時取靠近頭部創(chuàng)面;30天時取兔耳中間創(chuàng)面;60天取剩下創(chuàng)面。將所取標本置于10%中性福爾馬林中固定12小時,常規(guī)梯度酒精脫水,浸蠟包埋切片,做免疫組化組織學染色。yap蛋白免疫組化染色陽性信號為棕黃色顆粒。yap圖像分析方法:1、在400倍顯微鏡下分別觀察各切片中表皮及表皮下細胞中yap陽性顆粒個數(shù),并計算。每張切片觀察5個視野取其均數(shù)進行比較。2、用image-pro6.0圖像分析軟件系統(tǒng),將yap的表達強度用iod值表示,每張切片取5個視野,分別測定每個視野的iod值并取其均數(shù)作為該標本的iod值,進行比較。結果:一、新西蘭大耳白兔瘢痕造模成功率:a組造模出24個合格瘢痕,成功率為80%,b組造模出27個合格瘢痕,成功率為90%(模型成功標準:肉眼可見明顯創(chuàng)面組織增生、質硬,瘢痕表面較周圍正常組織高出2mm);二、顯微鏡下yap免疫組化染色結果:1、14天時,a組及b組創(chuàng)面周圍組織向創(chuàng)面中心回縮,大部分創(chuàng)面干燥,顯微鏡下創(chuàng)面肉芽組織、炎性細胞及毛細血管增生,表皮細胞中yap蛋白主要表達于細胞質,表現(xiàn)為細胞質中可見細小棕黃色顆粒,此期成纖維細胞數(shù)量少,棕黃色顆粒少數(shù)發(fā)現(xiàn)于細胞核中;2、30天時,肉眼觀察,創(chuàng)面愈合且瘢痕增生明顯,增生瘢痕色紅、質硬,瘢痕中心高于周圍皮面,b組較a組瘢痕增生明顯,纖維鏡下看,瘢痕表面為薄層表皮細胞并伴角化,正常皮膚附件如毛囊、皮脂腺等缺乏,瘢痕下,部分成纖維細胞生成,呈梭形并排列整齊,棕黃色顆粒出現(xiàn)于成纖維細胞核,細胞質棕黃色淡染;3、60天時,肉眼觀察,a組部分模型瘢痕較30天縮小,其余個別瘢痕較30天垂直直徑增大,且硬度增加,顯微鏡下看,瘢痕表皮下大量成纖維細胞生成,成纖維細胞呈梭形并排列整齊,b組部分瘢痕成纖維細胞排列紊亂,漩渦狀排列形成,個別瘢痕可見玻璃樣變。4、70-90天觀察,肉眼見瘢痕縮小,纖維鏡下看,成纖維細胞減少,部分正常細胞結構消失玻璃樣變。三、數(shù)據統(tǒng)計學分析:1、14天時,b組在陽性顆粒數(shù)、積分光密度、平均光密度數(shù)值上均高于a組,且p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義;2、30天時,b組在在陽性顆粒數(shù)高于a組,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義,積分光密度、平均光密度數(shù)值上均高于a組,且p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義;3、60天時,b組在在陽性顆粒數(shù)高于a組,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義,積分光密度、平均光密度數(shù)值上均高于a組,且p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義;4、陽性顆粒數(shù)a組第14天:22.38±5.12,第30天:34.88±3.56,第60天:32.38±5.82,30天與60天數(shù)值均高于14天,p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義,60天數(shù)值小于30天,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義;b組第14天:35.13±6.12,第30天:39.63±5.68,第60天;34.50±2.4430天數(shù)值高于14天及60天,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義,60天數(shù)值小于30天,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義;5、平均光密度a組第14天:0.20±0.01,第30天:0.24±0.03,第60天:0.22±0.06,30天數(shù)值大于14天,p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義,30天數(shù)值大于60天,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義;b組第14天:0.22±0.01,第30天:0.30±0.04,第60天:0.31±0.02,30天大于14天,p0.05,差異具有統(tǒng)計學意義,30天小于60天數(shù)值,p0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義;6、積分光密度a組第14天:1016.63±90.07,第30天:1368.00±169.01,第60天:1355.13±162.87,30天與60天數(shù)值均大于14天,且P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義,30天數(shù)值大于60天,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義;B組第14天:1358.38±186.57,第30天:1921.75±100.76,第60天:1911.88±114.00,30天與60天數(shù)值高于14天,P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義,60天數(shù)值小于30天,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義。結論:1、瘢痕表皮細胞中yap主要表達于細胞質中;2、成纖維細胞細胞質與細胞核均可見yap蛋白的表達,但在瘢痕增生期間主要表達于細胞核中;3、yap蛋白的表達與創(chuàng)面面積大小呈正相關,創(chuàng)面面積越大,愈合后瘢痕中yap蛋白表達越多;4、yap蛋白不是持續(xù)貫穿表達于創(chuàng)面愈合致瘢痕退縮期間,當瘢痕開始萎縮時,yap蛋白表達減少。
【關鍵詞】：兔耳瘢痕 yap蛋白 成纖維細胞 細胞信號通路 張力
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R641
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-18
• 材料與方法18-24
• 結果24-39
• 討論39-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-53
• 英漢縮略詞對照表53-54
• 致謝54-55
• YAP與皮膚瘢痕關系的研究進展 （綜述）55-63
• 參考文獻60-63

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本文編號：899458