本文關(guān)鍵詞：雄激素剝奪對油酸誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷肺泡上皮鈉離子通道的影響

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【摘要】：目的：了解雄激素剝奪對油酸（oil acid,OA）誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征（Acute lung injury/Acute respiratory distresssyndrome，ALI/ARDS）模型中肺組織病理學評分、W/D差異、肺組織肺泡上皮鈉通道ａ亞基(Epithelial sodium channelａsubunit，ENaC-ａ)的mRNA及蛋白表達影響；完善性別激素在ALI中的可能作用； 方法：健康清潔級雄性SD大鼠20只，體重180-220g，購自重慶醫(yī)科大學動物實驗中心。動物使用許可證號：SYXK（渝）2007-0001，整個飼養(yǎng)及實驗過程中，均遵守實驗動物管理保護相關(guān)規(guī)定，所有SD大鼠實驗前8h禁食不禁飲。按隨機數(shù)字表法將大鼠分為對照組、模型組、假手術(shù)模型組、去勢手術(shù)模型組4組，每組5只。去勢手術(shù)模型組和假手術(shù)模型組分別于造模前兩周（14天）行開腹雙側(cè)睪丸切除術(shù)或開腹但不行睪丸切除。雙側(cè)睪丸切除后兩周時，雄性大鼠體內(nèi)雄激素水平降至最低水平。所有ALI/ARDS模型組均用尾靜脈注射油酸0.15ml/kg復(fù)制，通過觀察大鼠唇周粘膜顏色變化、毛發(fā)是否豎立、呼吸頻率是否增快及活動能力是否減弱來判斷造模成功與否。各組大鼠于造模成功后6h行開胸手術(shù)并取相應(yīng)的肺組織備用：右上肺行W/D比檢測，右中肺行組織病理學檢測，右下肺行逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）檢測，左肺行蛋白質(zhì)免疫印跡法(western blot,WB)檢測。 結(jié)果： 1.1去勢手術(shù)及假手術(shù)后對大鼠一般情況的影響 無論去勢手術(shù)組還是假手術(shù)組，2周后均沒有任何動物死亡，而其中去勢手術(shù)組大鼠體重較正常組大鼠及假手術(shù)組大鼠無明顯增加。 1.2大鼠造模后的一般情況 正常組大鼠一般情況良好,精神狀態(tài)可，呼吸平穩(wěn),頻率為（84.50±3.749）次/分,唇周皮膚粘膜未見紫紺，且無一例大鼠死亡。模型組大鼠于造模后1~6h呼吸頻率顯著增加,達（119.10±7.172）次/分,全身毛發(fā)豎立，唇周粘膜發(fā)紺，蜷縮成團，活動明顯減少。假手術(shù)模型組與模型組大鼠造模后表現(xiàn)類似，其中呼吸頻率同樣顯著增加至(118.20±5.808)次/分,唇周粘膜紫紺，，全身毛發(fā)豎立。去勢手術(shù)后大鼠造模后呼吸頻率增加至（106.70±8.920）次/分，活動較少，全身毛發(fā)豎立，唇周發(fā)紺，但其呼吸頻率增加比模型組和假手術(shù)模型組慢，并具有統(tǒng)計學意義。 1.3肺組織形態(tài)學觀察及病理學評分 開胸后肉眼下觀察發(fā)現(xiàn)，正常組肺組織表面光滑，呈粉紅色，未見明顯充血、水腫，胸腔內(nèi)無血性積液，HE染色光鏡下觀察可見肺泡壁結(jié)構(gòu)完整清晰，無明顯炎癥細胞及水腫液肺泡內(nèi)聚集；急性肺損傷模型組肉眼觀察發(fā)現(xiàn)肺組織呈暗紅色，肺組織明顯充血、水腫，肺組織表面可見廣泛點狀或灶狀出血，胸腔內(nèi)可見血性液體聚集, HE染色光鏡下觀察可見肺泡壁斷裂不完整，炎性細胞及肺水廣泛聚集于肺泡腔內(nèi)；假手術(shù)模型組無論肉眼下觀察還是HE染色光鏡下觀察均可見同模型組類似的改變；去勢手術(shù)模型組肉眼下可見肺組織輕度腫脹，部分肺組織呈暗紅色，偶可見點狀出血灶，胸腔內(nèi)少許暗紅色積液，HE染色光鏡下觀察可見輕度水腫，較多炎細胞及紅細胞浸潤，但病理學評分顯著小于模型組及假手術(shù)模型組。參照文獻對4組大鼠肺損傷病理學評分結(jié)果示，模型組、假手術(shù)模型組及去勢手術(shù)模型組均較正常組升高差異具有統(tǒng)計學意義，其中假手術(shù)模型組與模型組組相比差異無統(tǒng)計學意義，但去勢手術(shù)模型組病理學評分較模型組和假手術(shù)模型組減少，且具有統(tǒng)計學意義。 1.4肺濕／干質(zhì)量比值 所有模型組W/D比值顯著高于正常對照組（模型組vs.對照組，P=0.000；假手術(shù)模型組vs.對照組，P=0.000；去勢手術(shù)模型組vs.對照組，P=0.000），去勢手術(shù)模型組W/D比值較模型組顯著降低（P=0.000），而假手術(shù)模型組中W/D比值與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義（P=0.183）。 1.5雄激素剝奪對肺組織中ENaC-ａ基因在轉(zhuǎn)錄水平的影響 RT-PCR檢測肺組織中ENaC-ａmRNA的表達發(fā)現(xiàn)，所有模型組其肺組織中ENaC-ａmRNA的表達，都比正常對照組顯著降低（模型組vs.對照組，P=0.000；假手術(shù)模型組vs.對照組，P=0.000；去勢手術(shù)模型組vs.對照組，P=0.001）。而去勢手術(shù)模型組，其肺組織中的ENaC-ａmRNA的表達比模型組顯著上調(diào)并具有統(tǒng)計學差異（P=0.002）；假手術(shù)模型組和模型組中的表達無統(tǒng)計學差異（P=0.940）。 1.6雄激素剝奪對肺組織中ENaC-ａ基因在翻譯水平的影響 通過western blot檢查發(fā)現(xiàn)，所有模型組中肺組織中ENaC-ａ蛋白的表達比正常組顯著降低（模型組vs.對照組，P=0.000；假手術(shù)模型組vs.對照組，P=0.000；去勢手術(shù)模型組vs.對照組，P=0.045）；而去勢手術(shù)模型組，其肺組織中ENaC-ａ蛋白的表達比模型組顯著上調(diào)并具有統(tǒng)計學差異（P=0.030）；假手術(shù)模型組與模型組中的表達無統(tǒng)計學差異（P=0.834）。 結(jié)論： 1）降低雄激素水平可緩解急性肺損傷肺組織病理損傷程度，減少肺水聚集； 2）降低雄激素水平可促進急性肺損傷肺組織中肺泡上皮細胞鈉離子通道的mRNA及蛋白的表達； 3）通過降低體內(nèi)雄激素水平，間接提示雄激素本身可能在急性肺損傷中起著不利作用，通過抑制肺泡上皮細胞鈉離子通道的mRNA及蛋白的表達，促進肺水聚集，加重肺組織病理損傷程度，導(dǎo)致男性在ALI/ARDS患病中死亡率高于女性。
【關(guān)鍵詞】：急性肺損傷 雄激素 肺泡上皮鈉離子通道
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-16
• 1 材料與方法16-24
• 2 結(jié)果24-27
• 3 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-34
• 附圖34-36
• 文獻綜述36-48
• 參考文獻43-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表文章49-50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 程青,陳忠慶;外源性雌激素在脂多糖誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷中的作用[J];西南國防醫(yī)藥;2004年04期

2 ;Protective effect of raloxifene on lipopolysaccharide and acid-induced acute lung injury in rats[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年10期

3 陳中華,周有生;雌激素及其受體在急性肺損傷中作用的研究[J];中國急救醫(yī)學;2004年05期

本文編號：876956