本文關(guān)鍵詞：小劑量TNF-α預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)豬急性心肌梗死后心功能的影響

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 腫瘤壞死因子-α 急性心肌梗死 移植 心功能

【摘要】：背景急性心肌梗死是一種嚴(yán)重的心血管疾病,具有發(fā)病急、病死率和致殘率高等特點(diǎn),給患者和家庭帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān),因此針對(duì)心肌梗死的治療成為醫(yī)學(xué)界關(guān)心和研究的焦點(diǎn)。自O(shè)rlic等[1]利用干細(xì)胞治療冠心病以來(lái),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞已被廣泛應(yīng)用于心肌梗死的治療,雖然取得了一定的療效,總體治療效果仍然差強(qiáng)人意。如何提高BMSCs的治療效果,以及BMSCs發(fā)揮治療作用的機(jī)制仍需更加深入的研究。目的1.分離、培養(yǎng)、鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2.探討TNF-α預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植對(duì)豬急性心肌梗死后心功能的影響,小劑量TNF-α是否可以提高BMSCs對(duì)心肌梗死的治療效果,為心肌梗死的干細(xì)胞治療提供理論依據(jù)。方法1.利用密度梯度離心法分離豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)、傳代,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞表面抗原及定向誘導(dǎo)分化潛能,鑒定BMSCs。2.12頭巴馬香豬,隨機(jī)分為T(mén)NF-α預(yù)處理組、BMSCS組和對(duì)照組,利用心導(dǎo)管介入球囊封堵左冠狀動(dòng)脈前降支方法,建立心肌梗死模型。預(yù)處理組經(jīng)導(dǎo)管注入DAPI標(biāo)記過(guò)的TNF-α預(yù)處理后BMSCs; BMSCs組注入DAPI標(biāo)記過(guò)的BMSCs;對(duì)照組注入等量無(wú)菌培養(yǎng)基。造模前、術(shù)后1w、2w、3w、4w采取血標(biāo)本,提取血清,酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent, Elisa)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-a, TNF-α)濃度,術(shù)前、術(shù)后4w行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心功能變化,術(shù)后4w處死動(dòng)物,HE、Masson染色觀察梗死區(qū)組織學(xué)變化,Ⅷ因子免疫組化染色比較新生血管變化,熒光顯微鏡下觀察移植細(xì)胞分布情況,Ⅷ因子免疫熒光染色,觀察移植細(xì)胞與Ⅷ因子表達(dá)情況。結(jié)果1.密度梯度離心法獲得原代BMSCs量比較少,接種后貼壁生長(zhǎng),大部分呈梭形,接種后1周以內(nèi)生長(zhǎng)緩慢,12-14天進(jìn)行第一次傳代,3代后生長(zhǎng)速度加快,形態(tài)比較均一呈長(zhǎng)梭形,旋渦狀或輻射狀排列。免疫熒光檢測(cè)顯示高表達(dá)CD29,不表達(dá)CD34。取第3代細(xì)胞進(jìn)行體外定向誘導(dǎo)分化,可成功分化為骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。2.總計(jì)12頭動(dòng)物參與造模。成功率100%。術(shù)前各組動(dòng)物心功能均正常,無(wú)差異。心梗后4周,預(yù)處理組及BMSCs組心功能較對(duì)照組明顯改善,差異有顯著意義,(P0.05)；預(yù)處理組左室射血分?jǐn)?shù)較BMSCs組有明顯改善,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.HE及Masson染色結(jié)果顯示預(yù)處理組梗死區(qū)形態(tài)改變好于其他各組。4.預(yù)處理組Ⅷ因子及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)率均高于MSCS組和對(duì)照組。5.預(yù)處理組TNF-a表達(dá)量高于對(duì)照組,差異顯著(P0.05)；心梗后第2周、3周,預(yù)處理組高于BMSCs組,BMSCs組高于對(duì)照組,差異顯著(P0.05)。結(jié)論BMSCs在體外誘導(dǎo)條件下易分化為軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞。BMSCs經(jīng)小劑量TNF-a預(yù)處理后,可提高其在梗死心肌中存活率,減輕梗死區(qū)炎癥反應(yīng),更加明顯的促進(jìn)梗死區(qū)血管再生,能夠更好地改善心功能。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 腫瘤壞死因子-α 急性心肌梗死 移植 心功能
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R542.22
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-26
• 結(jié)果26-31
• 討論31-34
• 小結(jié)34-35
• 附圖35-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展43-61
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 附錄61-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況62-63
• 致謝63-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁文景;王越洪;黃耀熊;王迪;;應(yīng)用Percoll密度梯度分離法觀察懸浮紅細(xì)胞的保存效果[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2012年02期

2 劉曉丹,郭子寬,李秀森,張雙喜,毛寧;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)方法的建立[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2000年04期

3 張利銘;陳智超;鄒萍;李秋柏;;全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及成骨誘導(dǎo)分化[J];臨床血液學(xué)雜志;2012年03期

4 孫玉河;方五旺;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年19期

5 張利銘;李秋柏;李新建;陳智超;鄒萍;;不同代次骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化潛能的體外研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年02期

6 孫海燕;王顯良;何飛;武惠敏;劉迎春;楊秀麗;李波;趙國(guó)安;;經(jīng)導(dǎo)管移植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)豬急性心肌梗死后心功能的影響[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

7 王文;李靜;王宗仁;張金洲;師長(zhǎng)宏;;不同分離方法與培養(yǎng)條件下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況比較[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年03期

8 彭朝權(quán);高雅;項(xiàng)鵬;楊珂;鄒麗媛;吳曉;;心肌營(yíng)養(yǎng)素1誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞[J];中國(guó)病理生理雜志;2011年11期

9 李世元;付晉鳳;;豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞常用檢測(cè)方法[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2011年01期

10 周昆鵬;陳曉禾;常麗;李秀群;李馴虎;張玨;鄧力;;成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)BMSCs誘導(dǎo)分化作用研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2009年02期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 賀繼剛;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞亞群向心肌樣細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：784525