本文關(guān)鍵詞：血運(yùn)重建聯(lián)合曲美他嗪預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死的實驗研究

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【摘要】：目的：利用曲美他嗪（TMZ）預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs），于心肌梗死急性期行血運(yùn)重建聯(lián)合細(xì)胞移植治療，研究其對心功能改善的影響，并初步探尋其作用的機(jī)制。 方法：體外部分：取6-8周齡SD大鼠的脛骨及股骨分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，用全骨髓差異貼壁法培養(yǎng)及純化BMSCs，并取第3代BMSCs用于本實驗。利用1-3天的SD乳鼠心臟在體外分離培養(yǎng)新生大鼠心室肌細(xì)胞（NRVMs），取原代培養(yǎng)第3天的心肌細(xì)胞，分別收集正常和缺氧/復(fù)氧（H/R）處理的心肌細(xì)胞上清液，對其上清液中乳酸脫氫酶（LDH）、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量進(jìn)行檢測。將P3代BMSCs分為以下四組：①Control組：BMSCs+正常細(xì)胞培養(yǎng)液；②H/R組：BMSCs+H/R上清液；③TMZ組：TMZ預(yù)處理BMSCs+正常細(xì)胞培養(yǎng)液；④TMZ+H/R組：TMZ預(yù)處理BMSCs+H/R上清液。利用CCK-8法檢測上述各組BMSCs的細(xì)胞活性，RT-PCR檢測其細(xì)胞Bcl-2、Bax的表達(dá)。 體內(nèi)部分：細(xì)胞移植前用熒光染料CM-Dil標(biāo)記BMSCs，建立大鼠心肌缺血再灌注(I/R)模型32只，隨機(jī)分為四組：①Sham組：冠脈只穿線不結(jié)扎；②I/R組：結(jié)扎冠狀動脈1h后開放阻斷的冠脈（模擬血運(yùn)重建），注射無細(xì)胞的上清液；③BMSCs組：結(jié)扎冠狀動脈1h后開放阻斷的冠脈，注射無藥物預(yù)處理干細(xì)胞；④BMSCs+TMZ組：結(jié)扎冠狀動脈1h后開放阻斷的冠脈，注射藥物預(yù)處理干細(xì)胞。各組于I/R后3h采集大鼠血清進(jìn)行LDH、MDA及SOD的測定。術(shù)后1周各組隨機(jī)處死2只大鼠，檢測其植入體內(nèi)的BMSCs的存活數(shù)量，其余大鼠飼養(yǎng)至移植后4周接受心功能測定，檢查后處死，其中每組3只用于計算梗死面積，其余3只取心臟組織用于蛋白提取，Western Blot分析Bcl-2及Bax的表達(dá)。 結(jié)果：體外部分：1.與正常對照組比較，經(jīng)過H/R處理過的心肌細(xì)胞上清液中LDH、MDA活性顯著升高（P0.05），SOD活性降低（P0.05）。2.在BMSCs與心肌細(xì)胞上清液共培養(yǎng)各組中，H/R組細(xì)胞活力較Control組顯著下降（P0.05），但培養(yǎng)前經(jīng)過TMZ預(yù)處理后，該組細(xì)胞的活力較H/R組可顯著提高（P0.05）。3.RT-PCR結(jié)果表明：H/R組細(xì)胞Bcl-2的基因表達(dá)水平稍有減少，但與正常組相比無差異（P＞0.05），，但TMZ+H/R組細(xì)胞Bcl-2的基因表達(dá)水平較H/R組相比，前者明顯高于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；H/R組細(xì)胞Bax的基因表達(dá)水平稍有增多，可與正常組相比無差異（P＞0.05），但TMZ+H/R組細(xì)胞Bax的基因表達(dá)水平較H/R組相比，前者明顯低于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 體內(nèi)部分：1.用“二線二結(jié)”法能夠方便、成功地建立大鼠在體心肌缺血再灌注模型。2.與Sham組比較，再灌注后3h其余各組LDH、MDA活性均顯著升高（P0.05），SOD活性均顯著降低（P0.05），三組組間兩兩比較無明顯差異（P0.05）。3.術(shù)后1周，將組織進(jìn)行快速冰凍切片，在熒光顯微鏡下計數(shù)雙標(biāo)記BMSCs，發(fā)現(xiàn)BMSCs+TMZ組每個高倍鏡下雙標(biāo)記細(xì)胞數(shù)顯著高于BMSCs組（P＜0.05）。4.術(shù)后4周，BMSCs組和BMSCs+TMZ組均較I/R組心功能得到改善（P0.05），但BMSCs+TMZ組相比BMSCs組心功能改善的更加明顯（P0.05）。5.與I/R組相比，BMSCs組和BMSCs+TMZ組均能減少梗死面積（P0.05），但BMSCs+TMZ組較BMSCs組的梗死面積要減少的更多（P0.05）。6.BMSCs+TMZ組Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯高于I/R和BMSCs組（P0.05），BMSCs+TMZ組Bax蛋白表達(dá)水平明顯低于I/R和BMSCs組（P0.05）。 結(jié)論：1、體外心肌細(xì)胞H/R與大鼠心肌I/R均可使LDH、MDA顯著升高，SOD顯著降低（成功模擬缺血再灌注微環(huán)境）。2、缺血再灌注微環(huán)境中存在的嚴(yán)重細(xì)胞毒性和氧化應(yīng)激不利于移植細(xì)胞存活。3、TMZ預(yù)處理BMSCs在缺血再灌注微環(huán)境中相比未預(yù)處理細(xì)胞其活性顯著增加，其機(jī)制可能與預(yù)處理細(xì)胞上調(diào)Bcl-2及下調(diào)Bax的表達(dá)有關(guān)。4、血運(yùn)重建聯(lián)合TMZ預(yù)處理BMSCs后移植，相比未預(yù)處理移植細(xì)胞組，進(jìn)一步減少了心肌梗死面積，心功能改善更明顯。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 急性心肌梗死 血運(yùn)重建 曲美他嗪預(yù)處理
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 材料和方法11-23
• 結(jié)果23-33
• 討論33-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 英漢雙解縮略詞表54-55
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文55-56
• 致謝56-57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 趙學(xué)，富維駿，袁文俊，楊宗才;清醒大鼠冠狀動脈阻斷再通技術(shù)及其應(yīng)用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1996年05期

2 張勇;陳如坤;;兔缺血心肌中移植自體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的治療作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年01期

3 齊志敏;大鼠心肌缺血再灌注損傷模型幾種開胸方法評述[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年06期

4 蔡繼銳;劉仁光;;骨髓干細(xì)胞動員治療急性心肌梗死研究進(jìn)展[J];中國心血管病研究雜志;2006年03期

5 劉付平,姚宏偉,李俊;大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的改進(jìn)[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2003年03期

6 薛楓;楊向軍;李勛;韓蓮花;王海鵬;鄭冬冬;;兔在體心臟缺血再灌注模型的制作方法的改進(jìn)[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年02期

7 都義日,付小兵,李存保;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2004年08期

本文編號：737663