本文關(guān)鍵詞：褪黑激素對增生性瘢痕成纖維細胞轉(zhuǎn)化的影響及機制研究

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【摘要】：研究背景： 成纖維細胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞是增生性瘢痕形成過程中重要的病理變化。研究證明轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)在成纖維細胞轉(zhuǎn)化過程中起中心作用。TGF-β1結(jié)合成纖維細胞膜上的TGF-βⅡ型受體后，與磷酸化的TGF-βⅠ型受體形成異源二聚體復合物，該聚合體進一步活化Smad2和Smad3,并與Smad4形成異源寡聚體，轉(zhuǎn)運到細胞核內(nèi)，與平滑肌肌動蛋白-α（α-SMA）基因的啟動部分結(jié)合表達α-SMA成為肌成纖維細胞。近期研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1與細胞膜結(jié)合以后，細胞內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生及釋放增加，是其刺激成纖維細胞轉(zhuǎn)為肌成纖維細胞一個重要的信號途徑。 褪黑激素是一種由松果體分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，具有調(diào)控細胞周期、分化和凋亡、抗腫瘤、調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律、抗氧化和清除自由基等作用。皮膚是褪黑激素的靶器官，同時皮膚本身和皮膚細胞能產(chǎn)生褪黑激素并表達褪黑激素受體，因此，褪黑激素在維護皮膚正常結(jié)構(gòu)和功能中起重要作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕組織中褪黑激素的含量降低，組織褪黑激素受體表達異常；細胞研究顯示褪黑激素可抑制瘢痕成纖維細胞的增殖，同時促進瘢痕成纖維細胞的凋亡，結(jié)果提示皮膚局部組織褪黑激素系統(tǒng)功能失調(diào)與增生型瘢痕形成有關(guān)。成纖維細胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞是增生性瘢痕形成過程中的重要病理變化，因此，本研究進一步探討褪黑激素對增生性瘢痕成纖維細胞轉(zhuǎn)化的影響及機理。 第一部分褪黑激素對增生性瘢痕成纖維細胞α-SMA、TGF-βⅠ型受體表達的影響 目的研究褪黑激素對增生性瘢痕成纖維細胞轉(zhuǎn)化的影響。 方法收集6例增生性瘢痕組織，采用組織塊法進行成纖維細胞分離培養(yǎng)，細胞傳代培養(yǎng)至第3-6代，細胞分為兩組：對照組（單純培養(yǎng)基）和褪黑激素組（10-3mM），培養(yǎng)48h。采用Western-Blot技術(shù)檢測成纖維細胞α-SMA、TGF-βⅠ型受體蛋白的含量，RT-PCR技術(shù)檢測成纖維細胞α-SMA、TGF-βⅠ型受體mRNA的表達。本實驗采用配對t檢驗進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。 結(jié)果褪黑激素作用于增生性瘢痕成纖維細胞后，成纖維細胞α-SMA和TGF-βⅠ型受體蛋白含量分別為0.40±0.08和0.46±0.25，明顯低于對照組（0.80±0.13和0.55±0.30，P＜0.05），同時α-SMA和TGF-βⅠ型受體mRNA的表達（0.16E-2±0.22E-2和11.85±1.17），低于對照組（0.50E-2±0.57E-2和17.15±0.58，P＜0.05）。 結(jié)論研究數(shù)據(jù)顯示褪黑激素可抑制增生性瘢痕成纖維細胞的轉(zhuǎn)化。 第二部分褪黑激素對TGF-β1刺激正常皮膚成纖維細胞轉(zhuǎn)化作用的影響 目的探討褪黑激素影響成纖維細胞轉(zhuǎn)化的作用機制。 方法收集6例正常皮膚組織，采用組織塊法進行成纖維細胞分離培養(yǎng)，細胞傳代至第3-6代，細胞分為四組：對照組（單純培養(yǎng)基）、TGF-β1組（10ng/ml）、褪黑激素組(10-3mM)、TGF-β1組（10ng/ml）+褪黑激素組（10-3mM），培養(yǎng)72h。采用Western-Blot技術(shù)檢測成纖維細胞α-SMA、TGF-βⅠ型受體蛋白含量。RT-PCR檢測成纖維細胞α-SMA、TGF-βⅠ型受體mRNA的表達。本實驗采用S-N-K進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。 結(jié)果TGF-β1刺激后，正常皮膚成纖維細胞中α-SMA蛋白含量為0.86±0.02，α-SMAmRNA表達量為1.18±0.79，均高于對照組(0.41±0.03和0.50±0.38，P＜0.05)；TGF-β1刺激后再加用褪黑激素，，成纖維細胞中α-SMA蛋白含量為0.22±0.01及α-SMAmRNA表達量為0.16±0.07，均低于TGF-β1組（P＜0.05)。TGF-β1刺激后，正常皮膚成纖維細胞中TGF-βⅠ型受體蛋白含量為0.72±0.09，TGF-βⅠ型受體mRNA表達量為5.86±3.41，均高于對照組（0.13±0.05和4.15±2.74，P＜0.05)；TGF-β1刺激后再加用褪黑激素，成纖維細胞中TGF-βⅠ型受體蛋白含量為0.22±0.16及TGF-βⅠ型受體mRNA表達為0.16±0.07，均低于TGF-β1組（P＜0.05)。 結(jié)論實驗結(jié)果表明褪黑激素是通過抑制TGF-β1的作用進而影響成纖維細胞的轉(zhuǎn)化。 第三部分褪黑激素對增生性瘢痕成纖維細胞和正常皮膚成纖維細胞TGF-β1作用后ROS及抗氧化酶的影響 目的探討褪黑激素抑制TGF-β1刺激成纖維細胞轉(zhuǎn)化作用的機制。 方法收集6例增生性瘢痕和6例正常皮膚組織，采用組織塊法進行成纖維細胞分離培養(yǎng)，細胞傳代至第3-6代，增生性瘢痕成纖維細胞分為兩組：對照組（單純培養(yǎng)基）和褪黑激素組（103mM）；正常皮膚成纖維細胞分為四組：對照組（單純培養(yǎng)基）、TGF-β1組（10ng/ml）、褪黑激素組(10-3mM)、TGF-β1組（10ng/ml）+褪黑激素組（10-3mM）。在細胞爬片基礎(chǔ)上，采用免疫熒光技術(shù)標記成纖維細胞中ROS，ELISA法檢測成纖維細胞MDA的含量和SOD的活性。本實驗采用配對t檢驗或S-N-K進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。 結(jié)果增生性瘢痕成纖維細胞中，與對照組比較，褪黑激素組細胞綠色熒光強度降低，細胞內(nèi)MDA的含量降低（1.38±0.31）nmol/mgprot（P＜0.05），SOD的活性升高（2.63E1±0.713）U/mgprot（P＜0.05）。TGF-β1刺激后正常皮膚成纖維細胞綠色熒光的信號增強，同時MDA的含量升高（0.86±0.06）nmol/mgprot（P＜0.05），SOD的活性降低（192.47±11.91）U/mgprot（P＜0.05）；褪黑素可以阻斷TGF-β1的作用，細胞內(nèi)MDA的含量顯著降低（0.723±0.103）nmol/mgprot（P＜0.05），SOD的活性升高（241.20±25.734）U/mgprot（P＜0.05）。 結(jié)論褪黑激素可阻斷成纖維細胞TGF-β1刺激后ROS的釋放，同時可以提高SOD的活性，表明褪黑激素通過抑制TGF-β1下游信號通路，影響TGF-β1對成纖維細胞的轉(zhuǎn)化。
【關(guān)鍵詞】：增生性瘢痕 成纖維細胞 肌成纖維細胞 轉(zhuǎn)化生長因子-β1平滑肌肌動蛋白-α 活性氧 信號通路
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R641
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 前言11-17
• 第一部分 褪黑激素對皮膚成纖維細胞α-SMA、TGF-βⅠ型受體表達的影響17-30
• 材料和方法17-24
• 結(jié)果24-28
• 討論28-29
• 結(jié)論29-30
• 第二部分 褪黑激素對 TGF-β1 刺激正常皮膚成纖維細胞轉(zhuǎn)化作用的影響30-42
• 材料和方法30-36
• 結(jié)果36-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41-42
• 第三部分 褪黑激素對增生性瘢痕成纖維細胞和正常皮膚成纖維細胞 TGF-β1 作用后ROS 及抗氧化酶的影響42-53
• 材料與方法42-45
• 結(jié)果45-50
• 討論50-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-58
• 中英文縮略詞對照表58-59
• 攻讀期間取得成果59-60
• 致謝60

【參考文獻】

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1 馬曉春,張玲,馬紅,于潤江;肺癌血管內(nèi)皮生長因子表達及其與血管新生和腫瘤細胞增殖關(guān)系的研究[J];中華內(nèi)科雜志;2001年01期

本文編號：679067