本文關(guān)鍵詞：ILK在SD大鼠皮膚燒傷創(chuàng)面愈合過程中的作用

  更多相關(guān)文章： 整合素連接激酶 創(chuàng)面愈合 慢病毒載體 QLT0267

【摘要】：研究背景： 隨著社會(huì)人口老齡化趨勢增長，糖尿病潰瘍、放射性潰瘍、壓力性潰瘍等慢性創(chuàng)面發(fā)病率明顯增加。因此，創(chuàng)面愈合已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究重點(diǎn)之一。創(chuàng)面愈合是局部組織的再生，涉及到表皮結(jié)構(gòu)再生和真皮組織重構(gòu)的復(fù)雜生物學(xué)過程。目前，創(chuàng)面愈合確切機(jī)制尚未明確，組織修復(fù)的效果尚不能令人滿意。有關(guān)創(chuàng)面愈合分子機(jī)制已成為學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)。進(jìn)一步深入研究創(chuàng)面愈合分子機(jī)制，有利于拓展創(chuàng)面治療的思路和手段，對(duì)提高創(chuàng)面愈合的速度和質(zhì)量具有積極意義。 整合素連接激酶（integrin-linked kinase，ILK）是一種組織器官廣泛表達(dá)的絲氨酸/蘇氨酸激酶。它介導(dǎo)PKB/AKT、Wnt、LEF-1和β-catenin等多種細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控，對(duì)細(xì)胞的遷移、增殖、分化和凋亡等生物學(xué)功能起重要作用，并介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）之間的相互作用。國內(nèi)外最新研究發(fā)現(xiàn)ILK在維持皮膚真皮穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用，是損傷修復(fù)必不可少的細(xì)胞應(yīng)答組成部分[1-2]。本課題前期研究在細(xì)胞水平發(fā)現(xiàn)ILK能夠通過AKT下游信號(hào)通路參與成纖維細(xì)胞（fibroblast，F(xiàn)b）的遷移、分化、增殖、凋亡，影響創(chuàng)面愈合，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)ILK與大鼠燒傷創(chuàng)面愈合有高度相關(guān)性，但I(xiàn)LK對(duì)燒傷創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制還需進(jìn)一步探討。 本研究以大鼠皮膚深Ⅱ°燒傷創(chuàng)面為模型，利用ILK重組慢病毒技術(shù)轉(zhuǎn)染大鼠創(chuàng)面周圍，上調(diào)ILK表達(dá)；同時(shí)使用ILK特異性抑制劑QLT0267抑制ILK活性，觀察ILK在創(chuàng)面愈合過程中的作用以及與Fn、I型膠原、α-SMA和AKT磷酸化的關(guān)系，這將有助于完善創(chuàng)面愈合的分子生物學(xué)理論，為創(chuàng)面分子水平和基因治療提供新思路。 第一部分燒傷創(chuàng)面動(dòng)物模型的制備 目的制備穩(wěn)定準(zhǔn)確的大鼠燒傷創(chuàng)面模型。 方法20只SD大鼠隨機(jī)分為4組，采用恒溫恒壓燙傷儀分別致傷4、6、8、10s，致傷過程以底面積2.5cm2、質(zhì)量0.5kg的80℃圓柱形燙頭垂直接觸大鼠脊柱左右兩側(cè)對(duì)稱皮膚，24h后采集各組大鼠的創(chuàng)面組織行病理組織學(xué)檢查，根據(jù)病理結(jié)果篩選出深Ⅱ°創(chuàng)面的致傷時(shí)間，制備大鼠皮膚燒傷創(chuàng)面模型。 結(jié)果根據(jù)病理切片檢查證實(shí)8s燙傷的實(shí)驗(yàn)創(chuàng)面為深Ⅱ°燒傷創(chuàng)面。 結(jié)論應(yīng)用YLS-5Q型燙傷儀底面積2.5cm2、質(zhì)量0.5kg、燙頭溫度80℃、作用時(shí)間8s致傷大鼠背部皮膚，可制備深Ⅱ°燒傷模型。第二部分燒傷創(chuàng)面內(nèi)ILK基因轉(zhuǎn)染及對(duì)創(chuàng)面愈合率的影響 目的探討燒傷創(chuàng)面內(nèi)ILK基因轉(zhuǎn)染及對(duì)創(chuàng)面愈合率的影響。 方法采用ILK重組慢病毒載體，將三質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝慢病毒，用Western Blot法檢測目的基因ILK質(zhì)粒表達(dá)。正式試驗(yàn)采用SD大鼠75只，在其背部皮膚制備深Ⅱ°創(chuàng)面，并隨機(jī)分成5組，每組15只，分別是：①對(duì)照組：每天注射生理鹽水100μL；②LV-GFP組：一次性注射空質(zhì)粒慢病毒100μL （2E+8TU/mL）；③LV-GFP-ILK組：一次性注射ILK過表達(dá)慢病毒液100μL（2E+8TU/mL）；④QLT0267組：每天注射濃度100μMQLT0267液100μL；⑤DMSO組：每天注射含0.3%DMSO液100μL。實(shí)驗(yàn)持續(xù)21d，各組大鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，自由采食和飲水。測量各組大鼠創(chuàng)面愈合時(shí)間和愈合率。LV-GFP-ILK組用慢病毒液注射大鼠創(chuàng)面周圍皮下，于注射后第14d取材，每組5只大鼠，標(biāo)本行冰凍切片，倒置熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況；于注射后第7d、10d、14d、21d取材，Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染后ILK蛋白表達(dá)，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。 結(jié)果LV-GFP-ILK組大鼠創(chuàng)面皮膚樣品的冰凍切片在熒光顯微鏡可見GFP表達(dá)，且ILK蛋白表達(dá)水平高LV-GFP組。第14d時(shí)，LV-GFP-ILK組創(chuàng)面愈合率為96.89%，QLT0267組創(chuàng)面愈合率56.32%，在各個(gè)時(shí)相均顯著低于其他3組（P0.05），對(duì)照組、LV-GFP組和DMSO組三組之間創(chuàng)面愈合率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論皮下注射ILK重組慢病毒能成功感染大鼠創(chuàng)面周圍的正常組織，并能顯著上調(diào)ILK蛋白水平，且這一效應(yīng)相對(duì)持久、穩(wěn)定。上調(diào)ILK表達(dá)創(chuàng)面愈合率增高，抑制ILK活性則創(chuàng)面愈合率降低，，說明ILK具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用。 第三部分ILK在創(chuàng)面愈合過程中的作用以及與Fn、I型膠原、α-SMA和AKT磷酸化的關(guān)系 目的通過上調(diào)ILK表達(dá)或抑制ILK活性，檢測Fn、I型膠原、α-SMA等影響創(chuàng)面愈合過程的重要蛋白表達(dá)，探討ILK在創(chuàng)面愈合過程的作用及其可能機(jī)制。 方法動(dòng)物試驗(yàn)分組及處理同第二部分。在試驗(yàn)第14d，各組隨機(jī)選擇5只大鼠，應(yīng)用免疫組化SP法和Western Blot法分別檢測ILK、AKT、PAKT在各組大鼠創(chuàng)面中的表達(dá)；對(duì)創(chuàng)面肉芽組織進(jìn)行組織學(xué)染色，觀察創(chuàng)面及周圍組織結(jié)構(gòu)的改變；PCR檢測大鼠皮膚組織Fn、I型膠原、 ILK、α-SMA的基因表達(dá)。 結(jié)果SP法和Western Blot法檢測：5組AKT蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），LV-GFP-ILK組ILK蛋白表達(dá)增高（P0.05）， PAKT蛋白表達(dá)也明顯增高（P0.05），創(chuàng)面新生表皮更厚、膠原沉積率更多； QLT0267組PAKT蛋白表達(dá)較其他組明顯降低（P0.05）。PCR檢測顯示ILK mRNA表達(dá)增強(qiáng)后Fn mRNA、I型膠原mRNA、α-SMAmRNA表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論燒傷創(chuàng)面組織中ILK水平提高能顯著上調(diào)Fn、I型膠原、α-SMA基因的表達(dá)；ILK活性與PAKT蛋白表達(dá)量呈正相關(guān)。因此，ILK可能通過PI3K-AKT-PAKT途徑，促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。
【關(guān)鍵詞】：整合素連接激酶 創(chuàng)面愈合 慢病毒載體 QLT0267
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R644
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-10
• 目錄10-11
• 前言11-14
• 第一部分 燒傷創(chuàng)面動(dòng)物模型的制備14-19
• 材料與方法14-16
• 結(jié)果16-17
• 討論17
• 結(jié)論17-19
• 第二部分 燒傷創(chuàng)面內(nèi) ILK 基因轉(zhuǎn)染及對(duì)創(chuàng)面愈合率的影響19-31
• 材料與方法19-23
• 結(jié)果23-24
• 討論24-25
• 結(jié)論25-31
• 第三部分 ILK 在創(chuàng)面愈合過程中的作用以及與 Fn、I 型膠原、α-SMA和 AKT 磷酸化的關(guān)系31-53
• 材料與方法31-37
• 結(jié)果37-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 中英文縮略詞對(duì)照表59-60
• 攻讀期間取得成果60-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張迪敏;許愛娥;常淑彪;李永偉;尉曉冬;;治療白癜風(fēng)外用中藥對(duì)大鼠皮膚微環(huán)境的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2007年11期

2 吉木斯;王祿;楊月圓;郝勇;韓慧;石繼海;;絕經(jīng)期大鼠皮膚形態(tài)及相關(guān)因素的測定[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2010年02期

3 苗波;劉宇;劉杰;唐海波;徐雷;文晶;;鹽酸川芎嗪促進(jìn)異種脫細(xì)胞真皮修復(fù)大鼠皮膚缺損的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J];中醫(yī)藥信息;2011年04期

4 方家麟;;紫外線照射對(duì)大鼠皮膚前列腺素D合成酶活性的影響[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊;1990年04期

5 賀玉琢;吳茱萸對(duì)無毛大鼠皮膚滲透消炎痛的促進(jìn)作用[J];國外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊);2005年01期

6 田俊芝;楊天恩;張乃鑫;;不同分割之等效劑量對(duì)大鼠皮膚和脊髓放射性損傷的影響[J];天津醫(yī)藥腫瘤學(xué)附刊;1983年02期

7 王進(jìn)堂;高秀來;李楠;;大鼠皮膚的硫胺素單磷酸酶陽性神經(jīng)支配[J];廣東解剖學(xué)通報(bào);1992年02期

8 李鳳敏,王偉,王錚,強(qiáng)茹玲,周淑梅,徐佩芝;藍(lán)紫光對(duì)大鼠皮膚傷口及燒傷愈合的影響[J];中華理療雜志;2001年05期

9 付小兵,孫同柱,楊銀輝,顧小曼,孫曉慶,盛志勇;表皮細(xì)胞生長因子和堿性成纖維細(xì)胞生長因子在不同發(fā)育階段大鼠皮膚表達(dá)特征的比較性研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2001年06期

10 呂立華;曾澤民;;錢蟲貼對(duì)大鼠皮膚局部毒性的實(shí)驗(yàn)研究[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年12期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔黎麗;江鍵;夏鐘福;方影;宋誠榮;;生物功能材料——大鼠皮膚的介電和駐極特性研究[A];第三屆中國功能材料及其應(yīng)用學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];1998年

2 王波濤;陳璧;胡大海;湯朝武;;大鼠皮膚降鈣素基因相關(guān)肽正常分布及燙傷后改變規(guī)律[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1997年

3 鄭文利;徐成海;鄒惠芬;;凍干大鼠皮膚的實(shí)驗(yàn)研究[A];第六屆全國冷凍干燥學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2000年

4 莫耀南;張其英;趙子琴;;纖維聯(lián)接蛋白與大鼠皮膚早期損傷時(shí)間的關(guān)系[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集（上卷）[C];1991年

5 張穗;吳蘭草;查新建;夏承德;趙耀華;曹平;;大鼠皮膚堿燒傷早期病理表現(xiàn)及其組織學(xué)變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

6 王臨青;潘建西;張思勝;舒暢;;生膚靈對(duì)大鼠皮膚缺損愈合中組織病理學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];2011年甘肅省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

7 張立波;易娟娟;趙琳;康黎靜;謝家駿;;大鼠皮膚類過敏試驗(yàn)方法學(xué)[A];2013年（第三屆）中國藥物毒理學(xué)年會(huì)暨藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)研究論壇論文摘要[C];2013年

8 張立波;易娟娟;趙琳;康黎靜;謝家駿;;大鼠皮膚類過敏試驗(yàn)方法學(xué)[A];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年

9 孟宏;董銀卯;邱顯榮;;燕麥β-葡聚糖對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠皮膚保濕性的影響[A];2006年中國化妝品學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

10 王慧君;汪守義;康偉;;大鼠皮膚切創(chuàng)組織TGF-β_1mRNA的表達(dá)變化與損傷時(shí)間的關(guān)系[A];第五屆全國生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第八屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第四屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉肅;二甲氨基乙醇和復(fù)方氨基酸延緩大鼠皮膚老化的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

2 張宗學(xué);愈創(chuàng)營養(yǎng)油促進(jìn)大鼠皮膚缺損創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2007年

3 王曼力;香芹醇酯類衍生物經(jīng)皮促透作用及其可逆性評(píng)價(jià)[D];沈陽藥科大學(xué);2013年

4 鐘華;QS-1064nm Nd：YAG激光與強(qiáng)脈沖光對(duì)Wistar大鼠皮膚非剝脫性嫩膚的作用和機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 趙彩玲;二甲氨基乙醇和復(fù)方氨基酸溶液對(duì)衰老大鼠皮膚膠原代謝和自由基的影響[D];青島大學(xué);2014年

2 王勝峰;氟非尼酮局部施用形式的探索及其干預(yù)大鼠皮膚瘢痕形成的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2010年

3 湯紅英;砷對(duì)大鼠皮膚和臟器中抗氧化系統(tǒng)及MPO基因表達(dá)的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

4 陳朗;低強(qiáng)度超聲波對(duì)大鼠皮膚膠原蛋白表達(dá)的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 李宏偉;輸注供體未成熟樹突狀細(xì)胞對(duì)大鼠皮膚移植的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

6 陳謙;愈合散對(duì)大鼠皮膚創(chuàng)面組織學(xué)及血清VEGF的影響研究[D];成都體育學(xué)院;2013年

7 代亮;Q開關(guān)1064-nm和Q開關(guān)532-nmNd：YAG激光對(duì)大鼠皮膚非剝脫性嫩膚作用的比較[D];山東大學(xué);2008年

8 吳祁生;高能電子射線對(duì)L929成纖維細(xì)胞的影響以及PQQ（吡咯并喹啉醌）對(duì)大鼠皮膚急性放射性燒傷的治療作用的初步研究[D];蘇州大學(xué);2008年

9 王曉紅;ILK在SD大鼠皮膚燒傷創(chuàng)面愈合過程中的作用[D];暨南大學(xué);2014年

本文編號(hào)：627477