本文關(guān)鍵詞：磷酸化HSP27保護(hù)燒傷血清刺激條件下血管內(nèi)皮屏障的作用與機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 燒傷 F-actin HSP27 SUMO化修飾 磷酸酶2A 內(nèi)皮通透性

【摘要】：血管通透性增高是燒傷早期休克和臟器水腫的根本原因,其本質(zhì)是血管內(nèi)皮屏障通透性的增高,從而導(dǎo)致早期血管內(nèi)液大量外滲,引發(fā)全身組織灌注減少和組織器官水腫。由于燒傷早期血管通透性增高機(jī)制尚未得到充分證實(shí),目前臨床上缺少有效的防治措施。因此,深入揭示燒傷后微血管通透性變化的分子調(diào)節(jié)機(jī)制,研究防治微血管滲漏和燒傷休克的新型策略,具有重要的理論價(jià)值和臨床意義。內(nèi)皮細(xì)胞回縮是多種病理生理(包括燒傷)條件下內(nèi)皮細(xì)胞間裂隙形成、微血管通透性增高的重要基礎(chǔ)。以往認(rèn)為,應(yīng)力纖維中F-actin與肌球蛋白相互作用,產(chǎn)生向心收縮力,是內(nèi)皮細(xì)胞回縮的骨架基礎(chǔ),而HSP27磷酸化則是應(yīng)力纖維形成的重要分子機(jī)制。然而,最近有研究發(fā)現(xiàn),磷酸化HSP27通過(guò)促進(jìn)應(yīng)力纖維形成或保護(hù)F-actin骨架,顯著降低了缺氧或急性炎癥等條件下血管內(nèi)皮通透性。p38激酶/MK2是HSP27磷酸化的關(guān)鍵信號(hào)途徑。我們以往發(fā)現(xiàn),燒傷后血管內(nèi)皮通透性增高并不與應(yīng)力纖維形成相平行。燒傷后內(nèi)皮細(xì)胞F-actin骨架發(fā)生了復(fù)雜變化,即:早期形成應(yīng)力纖維,后期F-actin破壞、解聚或排列紊亂。我們前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,燒傷血清刺激條件下內(nèi)皮細(xì)胞HSP27磷酸化水平僅短暫升高。鑒于磷酸化HSP27降低血管通透性作用的相關(guān)認(rèn)識(shí),我們推測(cè),p38激酶-HSP27磷酸化很可能是燒傷后血管內(nèi)皮屏障的重要保護(hù)性適應(yīng)機(jī)制,只是隨著時(shí)間延長(zhǎng),促通透性因素的級(jí)聯(lián)放大,p38激酶-HSP27磷酸化這一保護(hù)性適應(yīng)機(jī)制不斷削弱,使得血管通透性增高。本項(xiàng)目提出HSP27磷酸化是燒傷后血管內(nèi)皮屏障的重要保護(hù)性適應(yīng)機(jī)制的假設(shè)。擬以燒傷患者血清為刺激因素,以大鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞為對(duì)象,采用基因突變技術(shù)構(gòu)建磷酸化和非磷酸化HSP27表達(dá)突變體,探討HSP27的磷酸化狀態(tài)與燒傷血清刺激條件下肺血管內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)力纖維形成和通透性變化的關(guān)系;從蛋白磷酸酶PP2A調(diào)節(jié)HSP27去磷酸化和SUMO化修飾對(duì)MK2活性的抑制作用兩方面,初步明確HSP27磷酸化隨時(shí)間削弱的分子機(jī)制。研究對(duì)深入揭示燒傷后微血管通透性變化的分子調(diào)節(jié)機(jī)制,從細(xì)胞內(nèi)源性保護(hù)角度促成防治微血管滲漏和燒傷休克的新型策略,具有重要意義。一、研究目的探討磷酸化hsp27在燒傷血清刺激誘導(dǎo)血管內(nèi)皮通透性變化中的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制。二、研究?jī)?nèi)容1.hsp27磷酸化、蛋白表達(dá)和分布與內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)力纖維形成、通透性變化關(guān)系的研究2.hsp27磷酸化在燒傷血清刺激誘導(dǎo)血管內(nèi)皮通透性變化中的作用3.pp2a與mk2的sumo化修飾對(duì)hsp27磷酸化的調(diào)節(jié)作用研究三、研究方法1.按常規(guī)方法收集嚴(yán)重?zé)齻颊哐?淺二度、深二度和三度燒傷面積50%的患者)2.培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞,利用transwell小室建立單層內(nèi)皮細(xì)胞通透性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?采用跨單層內(nèi)皮細(xì)胞電阻法(teer)評(píng)估內(nèi)皮單層通透性變化。3.采用細(xì)胞免疫熒光化學(xué)染色技術(shù)觀察內(nèi)皮細(xì)胞zo-1、f-actin形態(tài)分布變化;采用imagej軟件計(jì)算內(nèi)皮細(xì)胞間隙和細(xì)胞表面積變化。4.采用westernblot技術(shù)檢測(cè)燒傷血清刺激條件下內(nèi)皮細(xì)胞p38激酶、mk2和hsp27磷酸化水平以及mk2的sumo化修飾。5.構(gòu)建磷酸化、非磷酸化和野生型hsp27腺病毒高表達(dá)載體,并成功轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞。6.采用oa抑制pp2a和轉(zhuǎn)染senp1腺病毒抑制mk2的sumo化修飾,探討pp2a去磷酸化作用和sumo化修飾抑制mk2活性對(duì)hsp27磷酸化的調(diào)節(jié)作用。四、主要結(jié)果1.燒傷血清刺激1h,肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性顯著增強(qiáng),隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng),通透性進(jìn)一步增強(qiáng);同時(shí),細(xì)胞間緊密連接完整性破壞,伴細(xì)胞間裂隙增加和細(xì)胞表面積縮小。2.燒傷血清刺激0.5h,內(nèi)皮細(xì)胞中央型f-actin應(yīng)力纖維形成增多;隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng),中央型f-actin應(yīng)力纖維消失,代之以不規(guī)則的細(xì)胞周邊型f-actin形成增多。3.燒傷血清使p38mapk-mk2-hsp27信號(hào)通路激活;其中,p38mapk/mk2呈持續(xù)活化,而hsp27磷酸化僅在燒傷血清刺激0.5h時(shí)大幅增強(qiáng),隨后迅速回落。hsp27磷酸化瞬時(shí)增強(qiáng)與內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)力纖維形成時(shí)間相吻合,二者高峰均出現(xiàn)于內(nèi)皮細(xì)胞通透性增高之前。4.構(gòu)建的磷酸化、非磷酸化和野生型HSP27腺病毒高表達(dá)載體能有效轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞并高表達(dá)目的蛋白。較之非磷酸化HSP27和空載體轉(zhuǎn)染對(duì)照組,磷酸化HSP27轉(zhuǎn)染能顯著抑制燒傷血清導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞高通透性,使細(xì)胞中央型F-actin應(yīng)力纖維形成增多。此外,磷酸化HSP27可以部分對(duì)抗細(xì)胞松弛素D導(dǎo)致的內(nèi)皮通透性增高。5.內(nèi)皮細(xì)胞PP2A可與HSP27發(fā)生相互作用,且這一作用在燒傷血清刺激條件下進(jìn)一步增強(qiáng),抑制PP2A可使燒傷血清刺激條件下內(nèi)皮細(xì)胞HSP27磷酸化部分增強(qiáng)。內(nèi)皮細(xì)胞中MK2存在SUMO化修飾,且該修飾作用在燒傷血清刺激條件下進(jìn)一步增強(qiáng)。高表達(dá)SENP1可顯著解除SUMO蛋白對(duì)MK2活性的抑制作用,使HSP27的磷酸化水平升高。6.HSP27磷酸化是維護(hù)燒傷血清刺激條件下內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能的適應(yīng)性保護(hù)反應(yīng),其通過(guò)促進(jìn)中央型F-actin應(yīng)力纖維形成對(duì)抗血管內(nèi)皮高通透性。PP2A對(duì)HSP27的去磷酸化作用和SUMO化修飾對(duì)MK2活性的抑制作用是燒傷血清刺激條件下HSP27磷酸化迅速削弱的重要分子機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：燒傷 F-actin HSP27 SUMO化修飾 磷酸酶2A 內(nèi)皮通透性
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R644
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 HSP27 磷酸化、蛋白表達(dá)和分布與內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)力纖維形成、通透性變化關(guān)系的研究15-29
• 2.1 材料與方法15-23
• 2.2 結(jié)果23-26
• 2.3 討論26-27
• 2.4 小結(jié)27-29
• 第三章 磷酸化HSP27在燒傷血清誘導(dǎo)血管內(nèi)皮高通透性中的作用與機(jī)制29-39
• 3.1 材料與方法29-32
• 3.2 結(jié)果32-37
• 3.3 討論37-38
• 3.4 小結(jié)38-39
• 第四章 燒傷后內(nèi)皮細(xì)胞HSP27磷酸化隨時(shí)間削弱的分子調(diào)節(jié)機(jī)制39-48
• 4.1 材料與方法39-42
• 4.2 結(jié)果42-46
• 4.3 討論46-47
• 4.4 小結(jié)47-48
• 全文結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 文獻(xiàn)綜述 血管內(nèi)皮通透性的體外檢測(cè)方法52-58
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果58-59
• 致謝59

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 謝沛標(biāo);燒傷血清對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞凋亡的影響[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年03期

2 陳軍,肖光夏;燒傷血清對(duì)培養(yǎng)大鼠腸上皮細(xì)胞間黏附連接的影響[J];中華創(chuàng)傷雜志;2001年11期

3 陳軍,唐鏖,常山,肖光夏;燒傷血清對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞膜的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2002年07期

4 陳軍,夏培元,常山,肖光夏;燒傷血清對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障功能損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2002年05期

5 陳軍,唐鏖,吳澤志,秦健,肖光夏;燒傷血清刺激對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和粘彈性的影響[J];中華燒傷雜志;2003年01期

6 李志清,黃躍生,楊宗城,王甲漢;燒傷血清對(duì)單核細(xì)胞抑制性κB降解和核因子-κB活化的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2004年10期

7 周燕虹,羅成基,郭朝華,孔佩艷,鄒仲敏;燒傷血清對(duì)骨髓紅系及粒系造血功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華燒傷雜志;2005年03期

8 李志清;黃躍生;楊宗城;王甲漢;;核因子κB活化對(duì)燒傷血清誘導(dǎo)單核細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J];中華燒傷雜志;2005年06期

9 張家平,黃躍生,楊宗城;絲裂素活化蛋白激酶途徑在缺氧復(fù)合燒傷血清致心肌細(xì)胞損傷中的作用[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2005年03期

10 李志清;黃躍生;楊宗城;王甲漢;;核因子κB在燒傷血清誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子1表達(dá)中的作用[J];中華燒傷雜志;2006年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳軍;肖光夏;吳澤志;秦健;;燒傷血清刺激對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞粘彈性影響的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

2 張家平;黃躍生;楊宗城;;絲裂素活化蛋白激酶途徑在缺氧燒傷血清所致心肌細(xì)胞損傷中的作用[A];全國(guó)燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會(huì)論文匯編[C];2004年

3 張家平;黃躍生;楊宗城;;絲裂素活化蛋白激酶途徑在缺氧復(fù)合燒傷血清致心肌細(xì)胞損傷中的作用[A];全國(guó)危重?zé)齻颊咴缙趶?fù)蘇對(duì)策專題研討會(huì)論文匯編[C];2005年

4 陳軍;肖光夏;;燒傷血清對(duì)培養(yǎng)大鼠腸上皮細(xì)胞間黏附連接的影響[A];第五屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

5 張萬(wàn)福;胡大海;呂根法;王耘川;朱雄翔;高峰;;胰島素對(duì)燒傷血清誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

6 張萬(wàn)福;胡大海;呂根法;王耘川;朱雄翔;高峰;;胰島素對(duì)燒傷血清誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

7 王旭;遲路湘;楊宗城;黧鰲;吳澤志;龍勉;;缺氧復(fù)合燒傷血清刺激對(duì)心肌細(xì)胞被動(dòng)生物力學(xué)特性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1997年

8 李志清;楊宗城;;燒傷血清和痂下水腫液對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和壞死的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

9 遲路湘;楊宗城;黎鰲;;細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失控在缺氧、燒傷血清損傷心肌細(xì)胞中的意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1997年

10 高蘭興;許志勤;王宗印;顧景范;;燒傷與營(yíng)養(yǎng)代謝的研究 Ⅲ、大白鼠實(shí)驗(yàn)性燒傷血清銅藍(lán)蛋白運(yùn)鐵蛋白及銅和鐵的變化[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第四屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];1984年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 鄭惠珍;Rho激酶在燒傷誘導(dǎo)的內(nèi)皮屏障功能損害中的作用[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 李雄;從HSF1水平探討燒傷后小鼠巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的內(nèi)源性保護(hù)作用[D];中南大學(xué);2010年

3 張家平;p38激酶途徑在燒傷早期心肌損害中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 尹朝奇;HSR對(duì)燒傷血清誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TNF-α、HMGB1和IL-10基因表達(dá)調(diào)控及其分子機(jī)制[D];中南大學(xué);2007年

5 莊淑波;COX-2參與燒傷誘導(dǎo)脂肪分解代謝的作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 孫寰博;磷酸化HSP27保護(hù)燒傷血清刺激條件下血管內(nèi)皮屏障的作用與機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 陳波;肌球蛋白輕鏈磷酸化在燒傷血清誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞骨架重組中的作用[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 韓冰;燒傷大鼠血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為及基因表達(dá)差異的影響[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2004年

4 陳江;痂下水腫液對(duì)T淋巴細(xì)胞功能及血清補(bǔ)體活性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2000年

5 曾健;硫化氫對(duì)燒傷血清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌TNF-a和IL-6的影響[D];南華大學(xué);2011年

6 褚志剛;p38激酶/Caldesmon途徑介導(dǎo)燒傷血清誘導(dǎo)的血管通透性增加及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

7 胡安根;c-fos和c-jun反義基因重組體轉(zhuǎn)染對(duì)缺氧復(fù)合燒傷血清處理心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

8 艾云智;HSF1在嚴(yán)重?zé)齻装Y反應(yīng)中調(diào)控HMGB1和IL-10表達(dá)分子機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：580751