本文關(guān)鍵詞：早期雞胚活性粗提物的初步應(yīng)用研究

  更多相關(guān)文章： 胚盤 小鼠 雞胚活性粗提物 創(chuàng)傷 愈合

【摘要】：雞早期胚盤細(xì)胞具有分化的多潛能性,可以分化成不同組織細(xì)胞,故認(rèn)為雞胚活性粗提物含有干細(xì)胞活性成分的特性。而干細(xì)胞療法是通過調(diào)控細(xì)胞因子,修復(fù)受損的組織細(xì)胞,然后通過細(xì)胞間的相互作用及產(chǎn)生細(xì)胞因子幫助受損細(xì)胞重建的功能。經(jīng)大量研究,證實(shí)了干細(xì)胞在神經(jīng)再生、創(chuàng)傷修復(fù)和抗衰老等領(lǐng)域有重要的臨床價(jià)值。因?yàn)殡u胚來源易獲得,本試驗(yàn)采用雞胚胎作為試驗(yàn)對象,從雞胚中提取出雞胚活性粗提物,比較不同離心轉(zhuǎn)數(shù),對提取雞胚粗提物的影響。采用不同孵化時(shí)間的種蛋蛋黃飼喂小鼠,觀察對小鼠的生長發(fā)育的影響。同時(shí)又探討了雞胚活性粗提物對于小鼠軟組織創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)作進(jìn)用,為雞胚活性粗提物在臨床治療上的應(yīng)用提供新的思路和借鑒。主要內(nèi)容如下:1.探討早期胚胎活性物分離的最佳時(shí)期,37℃培養(yǎng)箱孵化種蛋,收集雞胚盤內(nèi)的原代細(xì)胞,反復(fù)凍融,然后提取雞胚盤細(xì)胞內(nèi)的活性物,對比差速離心對雞胚干細(xì)胞活性物提取的影響。結(jié)果如下:孵化72h的雞胚盤最大,胚盤內(nèi)的細(xì)胞最多。差數(shù)離心轉(zhuǎn)數(shù)越高,提取的雞胚活性粗提物越多。2.探討不同時(shí)間孵化的種蛋蛋黃對小鼠的生長發(fā)育的影響。將未孵化雞胚的種蛋蛋黃、孵化36h的種蛋蛋黃和孵化72h的種蛋蛋黃分別飼喂隨機(jī)分配的三組小鼠,另外一組正常飼喂鼠料。結(jié)果顯示:飼喂蛋黃的小鼠體重平均增長率為36%,與對照組平均增長率18.5%相比較體重增加明顯;飼喂孵化種蛋蛋黃的小鼠與飼喂未經(jīng)孵化的種蛋蛋黃的小鼠相比,其體重增加明顯,差異顯著(P0.05);尤其是飼喂孵化72h種蛋蛋黃的小鼠平均增長率42.4%,與對照組平均增長率18.5%相比體重增加更明顯,差異極顯著(P0.01),由此說明了蛋黃內(nèi)的雞胚干細(xì)胞或者細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子有利于小鼠腸道吸收,促進(jìn)小鼠體重增長,對小鼠的生長發(fā)育具有促進(jìn)作用。探討注射雞胚活性粗提物對小鼠的影響。將提取的雞胚活性粗提物皮下注射小鼠,觀察小鼠。結(jié)果顯示:小鼠體溫會(huì)逐漸升高,此為小鼠對外來物質(zhì)識(shí)別的過程,隨后體溫會(huì)逐漸恢復(fù)到正常水平。3.探討雞胚活性粗提物對小鼠組織創(chuàng)傷的作用。構(gòu)建昆明小鼠軟組織創(chuàng)傷模型,皮下注射和皮膚表面涂抹雞胚活性粗提物。結(jié)果顯示:在昆明小鼠組織缺損創(chuàng)面模型中,只用蛋黃的小鼠兩側(cè)傷口愈合幾乎沒有差別,而涂抹雞胚活性粗提物的右側(cè)傷口愈合速度比左側(cè)未涂抹的傷口愈合速度要快。注射雞胚活性粗提物的右側(cè)傷口比未注射的左側(cè)傷口愈合速度要快。探討雞胚活性粗提物對小鼠組織燙傷的作用。構(gòu)建昆明小鼠組織燙傷模型,在燙傷處涂抹雞胚活性粗提物。結(jié)果顯示:涂抹雞胚活性粗提物右側(cè)傷口和左側(cè)相比較,右側(cè)的傷口愈合速度更快。組織學(xué)檢查結(jié)果顯示涂抹雞胚活性粗提物試驗(yàn)組表皮和真皮層細(xì)胞修復(fù)能力強(qiáng)于對照組。結(jié)論:1通過雞種蛋的孵化,發(fā)現(xiàn)雞早期胚胎孵化72h為活性分離的最佳時(shí)期,孵化72h的雞胚盤最大,胚盤內(nèi)的細(xì)胞最多,提取的雞胚活性粗提物最好。驗(yàn)證了經(jīng)反復(fù)凍融法提取雞胚活性粗提物的可行性。2不同時(shí)間段孵化的種蛋蛋黃對小鼠飼喂,發(fā)現(xiàn)孵化72h的種蛋蛋黃對小鼠的體重增長最為明顯。推測雞胚干細(xì)胞或者細(xì)胞分泌的活性成分能有利于小鼠腸道吸收,促進(jìn)小鼠體重增長,對小鼠的生長發(fā)育具有促進(jìn)作用。3通過對小鼠創(chuàng)傷模型的建立,發(fā)現(xiàn)局部注射或者涂抹雞胚活性粗提物對于小鼠創(chuàng)傷的愈合具有促進(jìn)作用,為雞胚活性成分在創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：胚盤 小鼠 雞胚活性粗提物 創(chuàng)傷 愈合
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q813;R641
【目錄】：

• 致謝4-8
• 摘要8-10
• 文獻(xiàn)綜述10-18
• 1 早期哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀10-13
• 1.1 小鼠ES細(xì)胞的研究進(jìn)展11
• 1.2 人胚胎干細(xì)胞（h ES）的研究進(jìn)展11-13
• 1.3 禽類早期胚胎干細(xì)胞的研究進(jìn)展13
• 2 雞胚胎發(fā)育規(guī)律的研究概況13-15
• 2.1 雞的生殖生理特點(diǎn)13-14
• 2.2 雞胚胎發(fā)育的研究14-15
• 3 胚胎干細(xì)胞的治療及問題15-16
• 3.1 胚胎干細(xì)胞的治療15
• 3.2 胚胎干細(xì)胞治療中存在的問題15-16
• 3.2.1 胚胎干細(xì)胞的成瘤性15-16
• 3.2.2 胚胎干細(xì)胞的免疫排斥16
• 3.2.3 胚胎干細(xì)胞遺傳的不穩(wěn)定性16
• 4 本研究的目的和意義16-18
• 引言18-19
• 試驗(yàn)一 雞胚活性粗提物的分離提取19-26
• 1 材料與方法19-20
• 1.1 試驗(yàn)材料19
• 1.1.1 試驗(yàn)種蛋19
• 1.1.2 主要試劑19
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備19
• 1.2 試驗(yàn)方法19-20
• 1.2.1 受精蛋的培養(yǎng)19
• 1.2.2 雞胚盤細(xì)胞活性物的提取19-20
• 1.2.2.1 雞胚盤細(xì)胞的收集19
• 1.2.2.2 X期胚盤細(xì)胞的分離方法19-20
• 1.2.2.3 雞胚盤細(xì)胞的染色鏡檢20
• 1.2.2.4 雞胚盤細(xì)胞的反復(fù)凍融及活性物提取20
• 2 試驗(yàn)結(jié)果與分析20-23
• 2.1 受精蛋胚胎發(fā)育情況20-21
• 2.2 雞胚盤細(xì)胞的鑒定21-22
• 2.3 胚盤細(xì)胞的反復(fù)凍融及活性物的粗提取22-23
• 3 討論23-26
• 3.1 胚胎發(fā)育過程中的形態(tài)記錄23-24
• 3.2 雞胚盤細(xì)胞不同提取方法的比較24-26
• 試驗(yàn)二 雞胚活性粗提物對小鼠生長發(fā)育的影響26-29
• 1 材料與方法26-27
• 1.1 試驗(yàn)材料26
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物26
• 1.1.2 主要試劑26
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備26
• 1.2 試驗(yàn)方法26-27
• 1.2.1 飼喂小鼠不同時(shí)間孵化的種蛋蛋黃對其體重的影響26
• 1.2.2 注射雞胚活性粗提物對小鼠體溫的影響26-27
• 2 試驗(yàn)結(jié)果與分析27-28
• 2.1 對比不同時(shí)間孵化的種蛋蛋黃對小鼠體重的影響27
• 2.2 皮下注射雞胚活性粗提物對小鼠體溫的影響27-28
• 3 討論28-29
• 3.1 對比不同時(shí)間孵化的種蛋蛋黃對小鼠生長發(fā)育的影響28
• 3.2 皮下雞胚干細(xì)胞活性物對小鼠體溫的影響28-29
• 試驗(yàn)三 雞胚活性粗提物對小鼠組織創(chuàng)傷的作用29-44
• 1 材料與方法29-31
• 1.1 試驗(yàn)材料29
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物29
• 1.1.2 主要試劑29
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備29
• 1.2 試驗(yàn)方法29-30
• 1.2.1 小鼠傷口模型的制作方法29
• 1.2.2 小鼠傷口創(chuàng)面的處理29-30
• 1.2.3 小鼠燙傷模型的制作方法30
• 1.2.4 小鼠燙傷創(chuàng)面的處理30
• 1.3 切片的制備30-31
• 1.3.1 切片制作步驟30
• 1.3.2 染色30-31
• 2 試驗(yàn)結(jié)果與分析31-41
• 2.1 涂抹雞胚活性粗提物對小鼠傷口的影響31-33
• 2.2 注射雞胚活性粗提物對小鼠傷口的影響33-36
• 2.3 涂抹蛋黃對小鼠傷口的影響36
• 2.4 涂抹雞胚活性粗提物對小鼠燙傷的影響36-40
• 2.5 小鼠燙傷處組織切片病理學(xué)觀察結(jié)果40-41
• 3 討論41-44
• 3.1 雞胚活性粗提物對小鼠創(chuàng)傷的影響41-42
• 3.2 雞胚活性粗提物對小鼠燙傷的影響42-44
• 小結(jié)44-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• Abstract51-52

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