本文關(guān)鍵詞：VEGI調(diào)節(jié)顱腦創(chuàng)傷后腦水腫的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的： 1、通過觀察VEGI (Vascular Endothelial Growth Inhibitor)在創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic Brain Injury, TBI)后小鼠的血腦屏障調(diào)控作用,腦水腫抑制作用,以及神經(jīng)功能的恢復(fù)改善情況,明確其在腦創(chuàng)傷的功能作用,并初步探討其潛在作用機(jī)制。 2、通過觀察VEGI在VEGF-A (Vascular Endothelial Growth Factor A)所誘導(dǎo)的體外血腦屏障(Blood Brain Barrier, BBB)模型滲漏的抑制作用,上調(diào)緊密連接蛋白作用,并在形態(tài)學(xué)上進(jìn)行確認(rèn),明確VEGI能夠抑制VEGFR2受體的磷酸化從而抑制VEGF-A所造成的BBB滲漏,并初步探討其在細(xì)胞水平的作用機(jī)制。 研究方法： 1、體內(nèi)試驗(yàn)部分：本實(shí)驗(yàn)選用清潔級健康成年C57B1/6小鼠,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組1(空白對照組)、實(shí)驗(yàn)組2(假手術(shù)組)、實(shí)驗(yàn)組3(單純TBI組)和實(shí)驗(yàn)組4(TBI+VEGI組)。分組后,我們建立小鼠液壓打擊顱腦創(chuàng)傷模型,應(yīng)用小鼠神經(jīng)功能評分和Morris水迷宮評價其行為學(xué)功能,并應(yīng)用尹文思藍(lán)、免疫熒光技術(shù)對小鼠血腦屏障的滲漏、緊密連接蛋白、血管標(biāo)記進(jìn)行檢測。 2、體外實(shí)驗(yàn)部分：本實(shí)驗(yàn)利用C57小鼠的鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞bEnd.3構(gòu)建體外血腦屏障模型,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組1(空白對照組)、實(shí)驗(yàn)組2(VEGI組)、實(shí)驗(yàn)組3(VEGF-A組)和實(shí)驗(yàn)組4(VEGF-A+VEGI組)。分組后,我們利用所構(gòu)建的血腦屏障模型,測量細(xì)胞的跨膜電阻值檢測血腦屏障滲漏的程度,并利用免疫熒光技術(shù)、Western Blot技術(shù)測定緊密連接蛋白的表達(dá)程度,并利用跳躍探針式離子電導(dǎo)顯微鏡(Hopping Probe Ion Conductance Microscopy, HPICM)連續(xù)實(shí)時觀測緊密連接的納米級形態(tài)學(xué)變化。 研究結(jié)果： 1、體內(nèi)試驗(yàn)部分：液壓打擊后,實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4的小鼠在遭受液壓打擊后,mNSS評分立即升高,在傷后12小時,兩組間評分無統(tǒng)計學(xué)差異,但隨著傷情的逐漸恢復(fù),差異漸漸呈現(xiàn)。在傷后24小時,遭受創(chuàng)傷的實(shí)驗(yàn)組3小鼠評分高于實(shí)驗(yàn)組4(P0.01),這種差異在受傷后的第7天消失。Morris水迷宮定位航行測試中,實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4中,TBI組的小鼠于第三天開始,與假手術(shù)組相比較出現(xiàn)了統(tǒng)計學(xué)差異,這種差異一直保持至第五天訓(xùn)練結(jié)束；Morris水迷宮空間探索測試中,實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4與實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2相比較之間存在著明顯的統(tǒng)計學(xué)差異,其目標(biāo)象限百分比均明顯下降(P0.01),實(shí)驗(yàn)組3和實(shí)驗(yàn)組4相比較也出現(xiàn)明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。實(shí)驗(yàn)組3相比較實(shí)驗(yàn)組4的EB滲漏率明顯更低(P0.01)。免疫熒光也顯示實(shí)驗(yàn)組3與實(shí)驗(yàn)組4之間,CLN5、Alb的表達(dá)存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。 2、體外實(shí)驗(yàn)部分：體外培養(yǎng)的bEnd.3細(xì)胞得TEER (Ω·cm2)的所測值中,對照組、VEGI預(yù)處理組以及VEGI+VEGF組之間未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異,而VEGF組相對于對照組明顯下降(P0.01)。在HPICM連續(xù)24h觀測中,空白對照組、VEGI預(yù)處理組、VEGI+VEGF組的bEnd.3細(xì)胞形態(tài)以及細(xì)胞間緊密連接基本未發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)變化,然而VEGF組卻在加入100ng/ml VEGF-A之后16h逐漸出現(xiàn)了緊密連接高度的降低,并隨時間的推移這種高度的降低更加明顯；并且,這種變化還體現(xiàn)在相對粗糙度的變化上(P0.01)。免疫熒光檢測中發(fā)現(xiàn)：VEGF-A可明顯降低Claudin-5的表達(dá)(P0.01),但這種抑制作用可被VEGI所抑制。在Western Blot檢測中,可見,100ng/ml VEGF-A可明顯降低Claudin-5、 Occlaudin的表達(dá)(P0.01),但未對ZO-1的表達(dá)造成任何統(tǒng)計學(xué)上的差異。并且,相對于VEGF-A組,VEGI+VEGF-A組可明顯抑制VEGF-A對Claudin-5、 Occlaudin的下調(diào)作用；VEGFR2上的pY1175位點(diǎn)的磷酸化可被VEGF-A激活,但VEGI對這種VEGF-A誘導(dǎo)的磷酸化具有抑制作用。 研究結(jié)論： 1、在體實(shí)驗(yàn)：VEGI可以抑制TBI后小鼠的繼發(fā)性腦水腫、減輕血腦屏障的滲漏、上調(diào)緊密連接蛋白,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,從而改善小鼠腦神經(jīng)功能及行為學(xué)指標(biāo),為開發(fā)VEGI治療TBI后腦水腫提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2、體外實(shí)驗(yàn)：VEGI可以抑制VEGF-A所誘導(dǎo)的BBB體外模型的滲漏、上調(diào)緊密連接蛋白,我們首次利用HPICM觀測到了bEND.3在VEGI/VEGF-A的作用下所表現(xiàn)的納米級形態(tài)學(xué)變化,此外,我們還發(fā)現(xiàn)了VEGI能夠抑制VEGFR2受體的磷酸化,為探索VEGI對血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用機(jī)制進(jìn)行了探索。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷性腦損傷 VEGI 血腦屏障 HPICM VEGF-A 神經(jīng)保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• ~.略語/符號說明11-12
• 前言12-18
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-18
• 第一部分 VEGI改善TBI小鼠腦血管功能障礙機(jī)制的體內(nèi)研究18-34
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物18
• 1.2 主要試驗(yàn)裝置18-20
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 2.1 建立小鼠顱腦創(chuàng)傷液壓打擊模型20-21
• 2.2 VEGI制備及注射劑量21-22
• 2.3 mNSS評分評價小鼠液壓打擊后行為學(xué)損害22-23
• 2.4 Morris水迷宮檢測小鼠認(rèn)知功能23-24
• 2.5 測定小鼠腦損傷后EB滲透率24-25
• 2.6 小鼠腦組織冰凍切片的制備及免疫熒光染色25-27
• 2.7 統(tǒng)計學(xué)處理27
• 3. 結(jié)果27-34
• 3.1 mNSS小鼠神經(jīng)功能評測行為學(xué)差異27-28
• 3.2 Morris水迷宮檢測小鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知能力28-30
• 3.3 TBI后小鼠Evans Blue滲透率30-31
• 3.4 TBI后小鼠免疫熒光31-34
• 第二部分 ：VEGI改善VEGF-A所致血腦屏障滲漏的體外研究34-49
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料34-38
• 1.1 細(xì)胞來源34-35
• 1.2 主要試驗(yàn)裝置35-38
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法38-45
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)38-39
• 2.2 跨膜電阻值(TEER)的測量39
• 2.3 跳躍探針式離子電導(dǎo)顯微鏡技術(shù)39-40
• 2.4 細(xì)胞免疫熒光染色40-41
• 2.5 Western Blot檢測41-45
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)方法45
• 3. 結(jié)果45-49
• 3.1 體外培養(yǎng)bEND.3 細(xì)胞跨膜電阻值(TEER)的測量45-46
• 3.2 體外培養(yǎng)bEND.3 細(xì)胞跳躍探針式離子電導(dǎo)顯微鏡技術(shù)檢測46-47
• 3.3 體外培養(yǎng)bEND.3 細(xì)胞免疫熒光檢測47-48
• 3.4 體外培養(yǎng)bEND.3 細(xì)胞Western Blot檢測48-49
• 討論49-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明61-62
• 綜述62-77
• 綜述參考文獻(xiàn)73-77
• 致謝77

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田輝,吳鐵軍,張連群,田鎖臣,曲愛君,蔡秀華;重癥顱腦創(chuàng)傷患者腦氧利用率的臨床研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年04期

2 陳衛(wèi)群,涂昌弟,譚強(qiáng),鐘天安;顱腦創(chuàng)傷患者血脂的變化[J];創(chuàng)傷外科雜志;2003年03期

3 ;顱腦創(chuàng)傷診斷與治療學(xué)習(xí)班通知[J];中華創(chuàng)傷雜志;2004年04期

4 王忠誠;努力提高顱腦創(chuàng)傷的救治和基礎(chǔ)研究水平[J];中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2004年05期

5 ;《顱腦創(chuàng)傷臨床救治指南》(第2版)出版[J];臨床神經(jīng)外科雜志;2004年01期

6 江基堯;;提高我國顱腦創(chuàng)傷治療水平的幾個關(guān)鍵問題[J];臨床神經(jīng)外科雜志;2005年04期

7 陳江利;何玉領(lǐng);楊剛;;顱腦創(chuàng)傷后高滲高血糖非酮癥狀昏迷的臨床研究[J];浙江創(chuàng)傷外科;2006年02期

8 劉劍波;劉世玉;丁冬梅;;顱腦創(chuàng)傷后進(jìn)展型出血性損傷的臨床特點(diǎn)及原因探討[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2007年03期

9 桑潺;張立杰;劉孝琴;;瀕死型顱腦創(chuàng)傷31例臨床分析[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2008年34期

10 何亮;楊天明;;顱腦創(chuàng)傷無創(chuàng)監(jiān)測技術(shù)研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡錦;周良輔;姚海軍;王爾松;奚才華;徐揚(yáng);;顱腦創(chuàng)傷患者疾病負(fù)擔(dān)研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 黃賢鍵;李維平;王建中;黃國棟;高永中;;腦干聽覺誘發(fā)電位在急性顱腦創(chuàng)傷患者預(yù)后評估的應(yīng)用[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

3 胡錦;周良輔;毛穎;吳惺;孫一睿;;中重度顱腦創(chuàng)傷的外科治療進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 只達(dá)石;張賽;;當(dāng)今顱腦創(chuàng)傷救治焦點(diǎn)[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會成立大會資料匯編[C];2004年

5 溫劍峰;錢鎖開;楊琦帆;夏瑜;;重度顱腦創(chuàng)傷并發(fā)中毒型大皰性表皮松解型藥疹診治體會——附24例報告[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

6 王忠誠;只達(dá)石;凌鋒;張玉琪;江基堯;;中國顱腦創(chuàng)傷外科手術(shù)指南[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

7 姚海軍;胡錦;王爾松;奚才華;徐揚(yáng);周良輔;;上海市顱腦創(chuàng)傷數(shù)據(jù)庫的建立與應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

8 姚海軍;劉永;奚才華;徐楊;胡錦;;顱腦創(chuàng)傷患者早期凝血功能障礙對患者預(yù)后的影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

9 謝曉洪;安家石;許永華;;早期高蛋白代謝支持加生長激素對重度顱腦創(chuàng)傷患者的影響[A];2009年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

10 童武松;徐俊法;楊文進(jìn);鄭平;郭義君;唐馨芬;李高義;何斌;曾勁松;林同順;;急性顱腦創(chuàng)傷后進(jìn)展性出血發(fā)生的危險因素及預(yù)后分析[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院教授 江基堯　北京天壇醫(yī)院神經(jīng)外科教授 張玉琪 整理 匡遠(yuǎn)深;顱腦創(chuàng)傷治療少用無效藥[N];健康報;2008年

2 記者 孫剛;上海市顱腦創(chuàng)傷研究所成立[N];解放日報;2011年

3 記者 戴麗昕;顱腦創(chuàng)傷救治應(yīng)成立急救基金[N];上�？萍紙�;2012年

4 陳里予;半數(shù)顱腦創(chuàng)傷痛失救治機(jī)會[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

5 朱麗麗;《急性顱腦創(chuàng)傷手術(shù)指南》正式出版[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2007年

6 記者 匡遠(yuǎn)深;顱腦創(chuàng)傷腦保護(hù)藥物治療指南發(fā)布[N];健康報;2008年

7 通訊員 黃歡　記者 施嘉奇;治療腦創(chuàng)傷至今未有特效藥[N];文匯報;2008年

8 記者 匡遠(yuǎn)深;中國顱腦創(chuàng)傷外科手術(shù)指南發(fā)布[N];健康報;2009年

9 嚴(yán)志明 仇逸;上海重度顱腦創(chuàng)傷治療研究獲獎[N];中國醫(yī)藥報;2001年

10 記者 陸葉清　通訊員 黃歡;腦保護(hù)藥物選擇有新標(biāo)準(zhǔn)[N];上海科技報;2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程崇杰;膜粘連蛋白Ⅱ在顱腦創(chuàng)傷后急性期與慢性期中的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 林欣;顱腦創(chuàng)傷后腦紅蛋白表達(dá)變化的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

3 王雪原;急性顱腦創(chuàng)傷患者腦脊液差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

4 李冰;顱腦創(chuàng)傷后神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

5 張洪偉;免疫耐受治療顱腦創(chuàng)傷的基礎(chǔ)和臨床研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

6 黃國棟;無創(chuàng)監(jiān)測顱腦創(chuàng)傷后腦血流動力學(xué)變化的臨床應(yīng)用價值研究[D];中南大學(xué);2013年

7 李生輝;SDF-1α在顱腦創(chuàng)傷后促進(jìn)血管新生的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

8 劉曉民;雌激素對大鼠海馬FKBPs表達(dá)和顱腦創(chuàng)傷后認(rèn)知功能的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

9 杜倬嬰;凝血Ⅶ因子在顱腦創(chuàng)傷相關(guān)性凝血功能障礙的發(fā)生和治療中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 魏銘;腦室灌注促紅細(xì)胞生成素治療顱腦創(chuàng)傷大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 盧香瓊;凝血因子Ⅶ啟動子區(qū)甲基化調(diào)控基因表達(dá)及與顱腦創(chuàng)傷后進(jìn)展性出血性損傷相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2015年

2 譚秋燕;影響顱腦創(chuàng)傷患者術(shù)后預(yù)后相關(guān)因素的回顧性分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

3 高謀;2種干細(xì)胞微創(chuàng)移植調(diào)控顱腦創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 李正超;右美托咪定對重度顱腦創(chuàng)傷大鼠腦組織AQP4表達(dá)的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

5 張磊;臭氧和高壓氧對大鼠顱腦創(chuàng)傷后腦水腫的治療作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

6 姜成榮;tBHQ對顱腦創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)保護(hù)作用的體外研究[D];東南大學(xué);2015年

7 嚴(yán)貴忠;HSP70在小鼠顱腦創(chuàng)傷后上消化道黏膜病變中的保護(hù)作用[D];蘭州大學(xué);2016年

8 張昊;抗壞血酸對創(chuàng)傷性腦損傷的保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

9 徐智敏;南昌市區(qū)急性顱腦創(chuàng)傷流行病學(xué)調(diào)查[D];南昌大學(xué);2008年

10 舒勤;顱腦創(chuàng)傷護(hù)理能力與勝任特征研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：VEGI調(diào)節(jié)顱腦創(chuàng)傷后腦水腫的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：498216