本文關(guān)鍵詞： 心臟驟停 心肺復(fù)蘇 Salubrinal 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 非折疊蛋白反應(yīng)　出處：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：[目的]最近在許多缺血再灌注損傷的研究中都發(fā)現(xiàn),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在腦損傷的病理生理中起著非常重要的作用,且抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可對腦組織起到一定的保護作用。本研究將SD大鼠作為研究對象,建立心臟驟停及心肺復(fù)蘇模型,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與心肺復(fù)蘇后腦損傷的相關(guān)性,并使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑Salubrinal進行干預(yù),初步闡明其可能的作用機制。 [方法]：實驗一,對SD大鼠采用經(jīng)皮電刺激心外膜法制備心臟驟停模型并成功進行復(fù)蘇,分別在造模前和復(fù)蘇后1小時、3小時、6小時、12小時和24小時處死大鼠,取海馬組織進行RT-PCR和western blot實驗,分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記物(GRP78和XBP-1)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡蛋白(CHOP和caspase12)的表達趨勢。實驗二,SD大鼠隨機分為3組：(1)sham組：僅進行麻醉、經(jīng)口氣管插管和動靜脈置管操作;(2)Sal+CPR組：采用經(jīng)皮電刺激心外膜法制備心臟驟停模型并成功進行心肺復(fù)蘇,在造模前30分鐘,腹腔注射Salubrinal (Sal,1mg/kg),(3) DMSO+CPR組：采用經(jīng)皮電刺激心外膜法制備心臟驟停模型并成功進行心肺復(fù)蘇,在造模前30分鐘,腹腔注射等量的DMSO。心肺復(fù)蘇后24小時觀察各組大鼠生存情況,利用NDS評分系統(tǒng)評價各組大鼠的神經(jīng)功能情況。隨后過量麻醉處死大鼠,取腦組織進行后續(xù)研究：①通過透射電鏡觀察各組大鼠腦組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體的損傷情況；②TUNEL染色觀察各組大鼠海馬CA-1區(qū)凋亡情況;③免疫組化觀察各組海馬CA-1內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記物(GRP78和XBP-1)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡蛋白(CHOP和caspase12)的變化；④Western blot方法檢查各組大鼠腦皮質(zhì)eIF2α、p-eIF2α、CHOP和caspase12蛋白的變化情況。⑤提取各組大鼠腦皮質(zhì)線粒體,化學(xué)發(fā)光法測定線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pores, mPTP)變化情況；⑥取各組大鼠腦皮質(zhì)制作單細(xì)胞懸液,化學(xué)發(fā)光法測定細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化情況；⑦取各組大鼠腦皮質(zhì)組織通過試劑盒檢測丙二醛(malondialdehyde, MDA)和超氧化歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的變化情況。 [結(jié)果]實驗一,心肺復(fù)蘇后,GRP78、XBP-1、CHOP和caspase12的mRNA和蛋白表達在復(fù)蘇后持續(xù)增加。實驗二,①與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠在復(fù)蘇后24小時NDS評分均明顯增高(P0.01),與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組大鼠NDS評分顯著降低(P0.05)；②與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠海馬CA-1區(qū)凋亡的神經(jīng)細(xì)胞明顯增多(P0.01)),與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組凋亡的神經(jīng)細(xì)胞明顯減少(P0.01))：③與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均有不同程度的損傷,與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組大鼠海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷明顯減輕；④與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠海馬CA-1區(qū)GRP78、XBP-1、CHOP和caspase12的表達明顯增強,與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組減少了XBP-1、CHOP和caspase12的表達強度,增加了GRP78的表達；⑤與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠皮質(zhì)線粒體均有不同程度的損傷,但是Sal+CPR組大鼠皮質(zhì)線粒體損傷明顯較DMSO+CPR組減輕：⑥與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠皮質(zhì)的p-eIF2α/eIF2α、CHOP和caspase12蛋白表達明顯增加(P0.01),與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組明顯減少CHOP和caspase12蛋白的表達(P0.01),增加p-eIF2α/eIF2a的表達;⑦與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠皮質(zhì)線粒體mPTP明顯增加(P0.01),與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組皮質(zhì)線粒體mPTP顯著下降(P0.01)；⑧與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠腦皮質(zhì)單細(xì)胞懸液中Ca2+濃度均明顯上升(P0.01),與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組大鼠腦皮質(zhì)單細(xì)胞懸液中Ca2+濃度均明顯下降(P0.01)。⑨與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組的SOD活性下降(P0.01);與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組SOD活性增高(P0.01)。⑩與sham組相比,DMSO+CPR組和Sal+CPR組的MDA活性增加(P0.01)：與DMSO+CPR組相比,Sal+CPR組MDA活性降低,(P0.01) [結(jié)論]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了心肺復(fù)蘇后的腦損傷;預(yù)先Sal處理可明顯改善心肺復(fù)蘇后24小時神經(jīng)功能損傷,可能與其抑制過度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,減少鈣超載,同時抑制氧化應(yīng)激和保護線粒體功能有關(guān)。
[Abstract]:Objective To study the effect of endoplasmic reticulum stress on brain injury , and to study the relationship between endoplasmic reticulum stress and brain injury after cardiopulmonary resuscitation ( CPR ) . Methods : The rats were sacrificed at 1 hour , 3 hours , 6 hours , 12 hours and 24 hours after the model of cardiac arrest by percutaneous electric stimulation . MDA and superoxide dismutase ( SOD ) . Compared with sham group , there was a significant decrease in the expression intensity of GRP78 , XBP - 1 , CHOP and caspase12 in the hippocampus CA - 1 in the group of DMSO + CPR and Sal + CPR groups ( P0.01 ) . Compared with the DMSO + CPR group , the SOD activity of the Sal + CPR group increased ( P0.01 ) . Compared with the sham group , the activity of MDA in the DMSO + CPR group and the Sal + CPR group increased ( P0.01 ) . Compared with the DMSO + CPR group , the activity of MDA in the Sal + CPR group was decreased , ( P0.01 ) . Conclusion : The stress of endoplasmic reticulum stress is involved in the brain injury after cardiopulmonary resuscitation ; pre - Sal treatment can significantly improve the 24 - hour nerve function injury after cardiopulmonary resuscitation , which may inhibit excessive endoplasmic reticulum stress , reduce calcium overload , and inhibit oxidative stress and protect mitochondrial function .

【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7

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本文編號：1486397