本文關鍵詞： 膿毒癥 非去極化肌松劑 煙堿型乙酰膽堿受體 藥理學 電生理 蛋白酶抑制劑　出處：《重慶醫(yī)科大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的研究不同病程階段的膿毒癥對非去極化肌松劑（Non-depolarizing neuromuscular block agents，NMBA）量效及時效的影響；從神經肌接頭（Neuromuscular junction，NMJ）突觸后膜煙堿型乙酰膽堿受體（Nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）的異質化探討膿毒癥導致NMBA藥理學變化的發(fā)生機制；驗證烏司他丁改善NMBA藥效作用的有效性以及對NMJ突觸后nAChR異質化的作用。 方法 第一部分 選擇健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠66只，鼠齡2~3月，體重200~220g，隨機分為正常組（Normal組，n=6）、假手術組（Sham組，n=6）以及膿毒癥組（Sepsis組）。Normal組大鼠不予任何處理。Sham組大鼠僅行開腹盲腸探查，不予盲腸結扎。Sepsis組大鼠通過盲腸結扎穿孔術（Cecal ligation and puncture，CLP）構建膿毒癥模型。在建模（Sepsis組）或手術（Sham組）后第1天（Day1組，n=6）、第3天（Day3組，n=6）、第7天（Day7組：Sham組中n=6，Sepsis組中n=12）以及第14天（Day14組：Sham組中n=6，Sepsis組中n=12）進行指標檢測和標本采集。按劑量累計法給予非去極化肌松劑維庫溴銨（初始劑量為0.05mg/kg，以0.05mg/kg為遞增劑量，最大劑量達到1mg/kg）。以0.1Hz頻率刺激坐骨神經，檢測單次肌顫搐收縮力，計算維庫溴銨的最大單次肌顫搐抑制百分率（%），以相應藥物劑量擬合量效曲線。通過軟件得到維庫溴銨的半數有效抑制濃度（IC50）和95%有效抑制濃度（IC95）。最后單次給予2×IC95的維庫溴銨，記錄藥物起效時間、維持時間以及恢復時間。 第二部分 選擇健康成年雄性SD大鼠60只，鼠齡2~3月，體重200~220g，隨機分為Sham組以及Sepsis組。Sepsis組大鼠通過CLP構建膿毒癥模型。Sham組大鼠僅行開腹盲腸探查術，不予盲腸結扎。各組分別在建模后1天（Day1組，n=6）、3天（Day3組，n=6）、7天（Day7組，Sham組中n=6，Sepsis組中n=12）以及14天（Day7組，Sham組中n=6，Sepsis組中n=12）進行指標檢測和標本采集。各組大鼠分別在建�；蚴中g前、后檢測脛前肌復合肌動作電位（Compound muscle actionpotential，CMAP），測定其波幅和時程，計算運動神經傳導速度（Motornerve conduction velocity，MCV），同時測定單次肌顫搐收縮力。取大鼠脛前肌組織，運用免疫組化和免疫熒光法測定γ-nAChR和7-nAChR在骨骼肌細胞膜上的表達和分布；通過western-blot測定這兩種蛋白表達量；采用RT-PCR法測定γ和7功能亞基mRNA的表達水平；取L4~L5節(jié)段脊髓前角神經組織，通過western-blot測定neuregulin-1蛋白表達量。 第三部分 選擇健康成年雄性SD大鼠24只，鼠齡2~3月，體重200~220g，隨機分為生理鹽水對照組（0.9%N.S組，n=12）和烏司他丁組（Ulinastatin組，n=12）。各組大鼠通過CLP構建膿毒癥模型，在建模后第10天靜脈給予烏司他丁5000u/kg（Ulinastatin組）或給予等容量0.9%N.S（0.9%N.S組），每天1次，連續(xù)3天。各組大鼠在建模后第14天進行指標檢測和標本采集。維庫溴銨藥效學研究方法同實驗第一部分。神經電生理檢測和蛋白檢測檢測同實驗第二部分。 結果 第一部分 （1） Sham組各亞組維庫溴銨IC50與Normal組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組中，Day1組維庫溴銨IC50與Normal組和Sham組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）,其余各組與Normal組和Sham組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sham組各亞組之間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組各亞組之間比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）；Sepsis組和Sham組在建模/手術后同一時間的亞組比較，除Day1組差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （2） Normal組與Sham組各亞組的起效時間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sham組各亞組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組中，Day1組維庫溴銨起效時間與Normal組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組與Normal組比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P0.05）。在建模后同一時間組比較，Sepsis組的Day1組和Sham組的Day1組差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余時間組比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P0.05）。 Normal組與Sham組各亞組的維持時間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sham組各亞組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組中，Day1組維庫溴銨維持時間與Normal組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組與Normal組比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P0.05）。在建模后同一時間組比較，Sepsis組和Sham組的維持時間在Day1差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余時間組比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P0.05）。 Normal組與Sham組各亞組的恢復時間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sham組各亞組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組中，Day1組維庫溴銨恢復時間與Normal組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組與Normal組比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P0.05）。在建模后同一時間組比較，Sepsis組和Sham組的恢復時間在Day1差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余時間組比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P0.05）。 第二部分 （1） Sham組各亞組的CMAP幅值比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組各亞組的CMAP幅值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Day1組幅值最高，Day14組CMAP幅值最低。Sepsis組和Sham組在建模后同一時間組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 Sham組各亞組的CMAP時程比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組各亞組的CMAP時程比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Day14組時程最長，Day1組CMAP時程最短。Sepsis組和Sham組在建模后同一時間組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 Sham組各亞組的MCV比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組各亞組的CMAP幅值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Day1組MCV最高，Day14組MCV最低。Sepsis組和Sham組在建模后同一時間組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （2）Sham組各亞組的肌顫搐收縮力比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。Sepsis組各亞組的肌顫搐收縮力比較，，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Day1組肌顫搐收縮力最高，Day14組肌顫搐收縮力最低。Sepsis組和Sham組在建模后同一時間組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （3）與Sham組比較，膿毒癥Day1、Day3、Day7以及Day14組的大鼠骨骼肌γ-nAChR蛋白表達逐漸增高；在膿毒癥建模后14天，γ-nAChR蛋白表達最高，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。γ-nAChR蛋白分布于骨骼肌細胞膜上。γ-nAChR功能亞基γ亞基mRNA表達的變化趨勢與蛋白表達變化趨勢一致。與Sham組比較，膿毒癥Day1、Day3、Day7以及Day14的大鼠骨骼肌7-nAChR蛋白表達逐漸增高；在膿毒癥建模后14天，7-nAChR蛋白表達最高，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。7-nAChR功能亞基7亞基mRNA表達的變化趨勢與蛋白表達變化趨勢一致。 （4）與Sham組比較，Sepsis組各組的大鼠骨骼肌終板膜增高；膿毒癥Day1、Day3、Day7以及Day14組的大鼠骨骼肌終板膜比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。隨著膿毒癥模型建模時間越長，終板膜的面積逐漸增加。 （5）與Sham組比較，膿毒癥Day1、Day3、Day7以及Day14組的大鼠脊髓背角神經元的neuregulin-1蛋白表達降低；在膿毒癥建模后14天，neuregulin-1蛋白表達達到最低，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。隨著膿毒癥模型建模時間越長，neuregulin-1蛋白表達逐漸降低。 第三部分 （1）Ulinastatin組大鼠脛前肌CMAP的幅值和神經傳導速度與0.9%N.S組大鼠比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），而時程比較，兩組差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （2） Ulinastatin組大鼠脛前肌單次肌顫搐收縮力高于0.9%N.S組大鼠，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （3）與0.9%N.S組比較，Ulinastatin組大鼠脛前肌γ-nAChR蛋白表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。同樣，Ulinastatin組大鼠脛前肌γ-nAChR功能亞基γ mRNA表達水平低于0.9%N.S組（P0.05）。與0.9%N.S組比較，Ulinastatin組大鼠脛前肌7-nAChR蛋白表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Ulinastatin組大鼠脛前肌7-nAChR功能亞基7mRNA表達水平低于0.9%N.S組（P0.05）。 （4）與0.9%N.S組比較，Ulinastatin組大鼠脊髓背角神經元neuregulin-1蛋白表達增高，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結論 （1）膿毒癥導致骨骼肌對非去極化肌松劑敏感性下降，表現為肌松作用下降，肌松起效時間延長，維持時間和恢復時間縮短。同時，膿毒癥導致神經肌肉功能障礙，骨骼肌收縮力下降，復合肌動作電位幅值降低，神經傳導速度減慢，發(fā)生脫髓鞘改變； （2）膿毒癥導致骨骼肌細胞膜上胎兒型乙酰膽堿受體γ-nAChR和神經型乙酰膽堿受體7-nAChR表達升高，并分布于骨骼肌整個細胞膜。膿毒癥的非去極化肌松劑的肌松作用下降與這兩種非成熟型nAChR受體的表達有關； （3）蛋白酶抑制劑烏司他丁可抑制膿毒癥導致的骨骼肌細胞膜上γ-nAChR和7-nAChR的表達上調，促進神經肌肉功能的恢復，改善骨骼肌對非去極化肌松劑的敏感性
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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1 李傳翔 ,姚尚龍 ,聶輝 ,張玉芹 ,呂斌;大鼠老化過程中骨骼肌乙酰膽堿受體含量及功能的改變[J];華中醫(yī)學雜志;2005年02期

本文編號：1486753