本文關鍵詞：休克腸淋巴液增加血管通透性的作用

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【摘要】：血管通透性升高是重癥休克出現(xiàn)頑固性低血壓、發(fā)展為多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrom，MODS）乃至多器官衰竭（multiple organ failure，MOF）重要原因，因此有效防治血管高通透性是重癥失血性休克治療中的關鍵。腸淋巴途徑在失血性休克后多器官損傷中的作用非常重要，以腸淋巴管結扎或腸淋巴液引流的手段，阻斷失血性休克腸淋巴液（post-hemorrhagic shock mesentericlymph，PHSML）回流至體循環(huán)，均不同程度地降低了肝、腎、心、肺等組織器官的炎癥反應、結構損傷。但PHSML與失血性休克血管高通透性的關聯(lián)值得研究。為此，本研究探討PHSML在失血性休克后血管高通透性發(fā)生機制中的作用。 首先，應用18只Wistar雄性大鼠隨機均分為假手術組、休克組、休克+引流組。休克組、休克+引流組大鼠常規(guī)方法復制失血性休克模型，維持低血壓（40±2mmHg）90min；將放出的全血與等量林格氏液混勻后，經(jīng)股靜脈行液體復蘇（30min）；輸液結束后再觀察6h；休克+引流組大鼠在液體復蘇后持續(xù)引流腸淋巴液至6h；假手術組動物僅進行相同的手術操作，觀察至相應時間點。各組大鼠在液體復蘇后5.5h或相應時間點，經(jīng)股靜脈注射1%伊文氏藍（EB）溶液（30mg/kg）。30min后，用生理鹽水先后行體循環(huán)、肺循環(huán)灌洗。然后，留取固定位置的心肌、肝、脾、腎、小腸、肺組織，觀察各器官組織的外觀，檢測滲出至各組織中的EB濃度、干/濕（D/W）比。結果發(fā)現(xiàn)，休克組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織與休克+引流組心肌、腎組織EB含量均顯著高于假手術組，休克+引流組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織EB含量均顯著低于休克組；休克組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織D/W值均顯著低于假手術組，休克+引流組肺、心肌、腎、肝、脾、腸組織D/W值均顯著高于休克組。研究結果表明休克腸淋巴液引流可降低各組織器官的血管通透性。 然后，應用人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelialcells，HUVECs）作為實驗材料，將引流至體外的休克腸淋巴液與其共孵育，觀察休克腸淋巴液對人臍靜脈內(nèi)皮細胞通透性的作用。根據(jù)處理因素不同，實驗分為：DMEM組（DMEM培養(yǎng)基）、DMEM+FBS（DMEM培養(yǎng)基含10%FBS）、LPS組（含10μg/ml LPS的DMEM培養(yǎng)基）、4%休克復蘇后0~3h腸淋巴液組（含4%休克復蘇后0~3h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱4%PHMSL0~3h組）、10%休克復蘇后0~3h腸淋巴液組（含10%休克復蘇后0~3h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱10%PHMSL0~3h組）、4%休克復蘇后3~6h腸淋巴液組（含4%休克復蘇后3~6h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱4%PHMSL3~6h組）、10%休克復蘇后3~6h腸淋巴液組（含10%休克復蘇后3~6h腸淋巴液的DMEM培養(yǎng)基，簡稱10%PHMSL3~6h組）；將7種不同的處理因素與融合至單層的HUVECs共培養(yǎng)。各種因素與HUVECs作用6h后，觀察對HUVECs形態(tài)（光鏡、掃描電鏡）、活性（MTT法）的影響；并應用Transwell小室，觀察各種處理因素對HUVECs的跨細胞電阻（trans-endothelial electrical resistance，TEER）以及FITC-Albumin透過情況的影響。結果發(fā)現(xiàn)，DMEM組與FBS+DMEM組形態(tài)、活性、TEER以及熒光通透系數(shù)均無明顯差異；4%和10%休克復蘇后0~3h腸淋巴液、4%和10%休克復蘇后3~6h腸淋巴液以及LPS均引起了HUVECs的形態(tài)學損傷、降低了HUVECs的細胞活性與TEER、增加了HUVECs的熒光通透系數(shù)。為了進一步探討PHMSL增加HUVECs通透性的機制，應用免疫熒光細胞化學染色的方法，觀察了上述處理因素對HUVECs細胞骨架蛋白F-actin表達的影響。結果發(fā)現(xiàn)，4%和10%休克復蘇后0~3h腸淋巴液、4%和10%休克復蘇后3~6h腸淋巴液以及LPS均降低了HUVECs細胞骨架蛋白F-actin的表達。 通過上述研究，結果表明腸淋巴液引流有利于降低失血性休克導致各組織器官過高的血管通透性；引流至體外的失血性休克腸淋巴液可引起HUVECs損傷，，增加HUVECs單層細胞的通透性，其機制與降低細胞骨架蛋白F-actin的表達有關。這些結果為以腸淋巴液為靶點，針對血管通透性，防治重癥休克后的多器官損傷提供了實驗依據(jù)，這對于防治休克具有積極意義。但腸淋巴液中毒性物質的篩選以及腸淋巴液導致血管高通透性的機制，還需要進一步研究。
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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1 李云峰;細胞骨架與信號轉導[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;1998年05期

本文編號：1303934