本文關(guān)鍵詞：熱損傷后大鼠表皮干細(xì)胞中HSP90的表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： 表皮干細(xì)胞 熱損傷 熱休克蛋白90 細(xì)胞保護(hù)

【摘要】：目的分離、純化和培養(yǎng)大鼠表皮干細(xì)胞(Epidermal stem cells,EpSCs),利用P2~P3代細(xì)胞建立熱損傷模型,檢測不同溫度熱損傷后細(xì)胞中HSP90的表達(dá)變化,探討HSP90對熱損傷后EpSCs轉(zhuǎn)歸模型的作用。方法剝離SD大鼠皮膚組織,采用“胰蛋白酶兩步消化+Ⅳ型膠原差速貼壁10min”法分離和純化大鼠EpSCs,用K-SFM培養(yǎng)基(keratinocyte serum-free medium)培養(yǎng)細(xì)胞。顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),通過克隆形成實驗和生長曲線,計算細(xì)胞克隆形成率,繪制細(xì)胞生長曲線,以評價細(xì)胞的克隆形成能力和增殖能力。利用免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物β1-integrin、K19和K10的表達(dá)情況,鑒定細(xì)胞表型并觀察EpSCs的純度。選擇狀態(tài)良好的2-3代EpSCs作為熱損傷實驗細(xì)胞,以37℃作為對照組,分別以41℃、43℃、45℃、48℃、51℃、53℃和55℃作為實驗組的處理溫度,在水浴鍋中孵育10min。利用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)共染,測定熱損傷后EpSCs的凋亡率和存活率;利用RT-PCR及Western Blot實驗方法檢測熱損傷后EpSCs中HSP90基因轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達(dá)情況。結(jié)果顯微鏡下觀察所培養(yǎng)的細(xì)胞體積小、核質(zhì)比大,細(xì)胞膜折光性強(qiáng),細(xì)胞為不規(guī)則多角形,呈集落樣生長,鏡下可見典型的鋪路石狀結(jié)構(gòu)�？寺⌒纬蓪嶒灪蜕L曲線表明,所培養(yǎng)的細(xì)胞在體外具有較強(qiáng)的克隆形成能力和增殖能力。細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測所培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)干性標(biāo)識β1-integrin和K19,不表達(dá)分化標(biāo)識K10,顯示了所培養(yǎng)的細(xì)胞純度較高。Hoechst 33342和PI共染結(jié)果顯示:與37℃對照組相比,在41℃~51℃之間,熱損傷后EpSCs的凋亡率和死亡率隨著溫度的升高而遞增,51℃達(dá)到細(xì)胞凋亡高峰,55℃細(xì)胞死亡率最高。RT-PCR及Western Blot實驗檢測結(jié)果一致顯示:37℃對照組中HSP90表達(dá)量相對偏低;實驗組細(xì)胞中HSP90表達(dá)變化明顯,在41℃~48℃熱刺激條件下,細(xì)胞中HSP90的表達(dá)量逐漸增加,其中45℃和48℃組中的表達(dá)量大致在同一水平;超過48℃后,HSP90表達(dá)水平逐漸下降。結(jié)論所培養(yǎng)的細(xì)胞符合Ep SCs生物學(xué)特征和表型,成功建立了SD大鼠表皮干細(xì)胞分離、純化和培養(yǎng)方法;在一定溫度范圍內(nèi),熱應(yīng)激后的EpSCs中HSP90的基因轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達(dá)水平上調(diào),HSP90可能參與EpSCs的熱應(yīng)激反應(yīng)并發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用;48℃下熱損傷細(xì)胞10min,為建立EpSCs熱損傷轉(zhuǎn)歸模型的適宜條件,該模型可用于研究HSP90的細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R644

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李建福,付小兵,盛志勇;表皮干細(xì)胞的研究近況[J];中華燒傷雜志;2002年01期

2 付小兵,李建福,盛志勇;表皮干細(xì)胞:實現(xiàn)創(chuàng)面由解剖修復(fù)到功能修復(fù)飛躍的新策略[J];中華燒傷雜志;2003年01期

3 張麗新,瓦龍美;表皮干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2004年01期

4 王權(quán)勝,唐乾利;表皮干細(xì)胞的研究近況[J];中國燒傷創(chuàng)瘍雜志;2004年02期

5 吳娟,瓦龍美;表皮干細(xì)胞的研究現(xiàn)況[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年10期

6 邱澤亮,曾元臨;表皮干細(xì)胞的生物學(xué)行為研究進(jìn)展[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年05期

7 方林森,余又新;表皮干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年02期

8 陳曉東;利天增;祁少海;謝舉臨;徐盈斌;潘姝;袁即山;張濤;梁惠珍;;正常人不同部位皮膚表皮干細(xì)胞分布規(guī)律的研究[J];中華燒傷雜志;2006年01期

9 廣e，

本文編號：1252133