本文關鍵詞：脂多糖對小鼠心肌TMEM16A表達的影響

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【摘要】：目的：全身炎癥反應綜合征（Systemic Inflammatory Response Syn-drome, SIRS）是指感染或非感染因素作用于機體而引起的一種難以控制的全身性瀑布式炎癥反應綜合征。SIRS發(fā)生時，循環(huán)系統(tǒng)是較易受影響及損害的系統(tǒng)之一，患者可以表現(xiàn)出不同程度的心功能障礙及心臟相關生化指標升高。而肺是炎癥損傷的最先靶器官，已有研究證明SIRS是急性肺損傷（Acute Lung Injury, ALI）發(fā)生的基礎。病理證實ALI的存在可以作為SIRS模型建立成功的標志。氯離子通道是廣泛分布的一種陰離子通道，其中鈣激活氯通道（Calcium-activated Chloride Channels, CaCCs）是心肌主要的氯離子通道之一，在正常心肌細胞的生理功能中有重要作用，與心肌細胞的電活動有密切關系，病理情況下可導致心律失常的發(fā)生。而跨膜蛋白16A（TMEM16A）作為構成CaCCs的分子基礎，其在小鼠心肌組織的表達已被證實。本研究旨在應用脂多糖（Lipopolysaccharides, LPS）建立小鼠全身炎癥反應綜合征的模型，觀察TMEM16A在心肌組織表達的變化。 方法： 1全身炎癥反應動物模型的建立：健康雄性C57BL/6小鼠24只，年齡8-12周，體重20-25g。隨機分為對照組、輕度炎癥組及SIRS組，每組8只小鼠，通過腹腔注射LPS（500ug/kg）建立輕度炎癥模型，腹腔注射LPS（10mg/kg）建立SIRS模型，，對照組腹腔注射等體積生理鹽水。 224小時后，觀察各組小鼠一般狀態(tài)。眼球取血，分離血清，應用ELISA試劑盒檢測cTnI、CK-MB、和BNP的濃度。步驟嚴格按說明書進行，分別計算出標準曲線和回歸方程，將樣品光密度代入標準曲線乘以相應稀釋倍數(shù)，計算樣品中cTnI、CK-MB和BNP濃度。 3麻醉并處死小鼠，分別取肺組織及心肌組織，肺組織及部分心肌組織用10%中性福爾馬林固定，余心肌組織液氮罐保存。肺組織經(jīng)HE染色及光鏡檢查，觀察有無ALI病理特點，確定SIRS模型是否建立成功。福爾馬林固定的心肌組織通過HE染色觀察各組心肌組織的病理特點，另通過免疫組織化學染色觀察其TMEM16A表達情況。液氮保存的心肌組織經(jīng)蛋白提取，行BCA蛋白濃度測定及蛋白質(zhì)印跡（Western Blot），觀察組間TMEM16A表達差異及有無統(tǒng)計學意義。 結果： 1對照組小鼠活動、進食等無異常，暴露肺臟后未見腫大、出血等。輕度炎癥組小鼠活動及進食較對照組減少，肉眼觀察肺臟無明顯異常。SIRS組小鼠活動明顯減少，出現(xiàn)嗜睡、厭食等，肉眼觀察肺臟可見體積增大，表面可見點灶狀出血。 2輕度炎癥組肺組織HE染色在光鏡下示：部分肺泡腔狹窄，肺泡壁增厚，肺間質(zhì)可見紅細胞及粒細胞浸潤。SIRS組肺組織HE染色示：肺泡壁結構破壞，肺間質(zhì)大量紅細胞及粒細胞浸潤，肺泡內(nèi)可見較多滲出。上述改變符合急性肺損傷病理特點，SIRS模型建立成功。 3心肌組織免疫組織化學染色可見TMEM16A表達，且輕度炎癥組及SIRS組較對照組表達量多，而SIRS組表達高于輕度炎癥組。 4與對照組小鼠相比，輕度炎癥組及SIRS組血清cTnI及CK-MB濃度明顯增高（P0.05），其中SIRS組又明顯高于輕度炎癥組（P0.05）。血清BNP濃度輕度炎癥組與對照組小鼠相比無統(tǒng)計學意義（P0.05），但SIRS組BNP濃度明顯高于對照及輕度炎癥組（P0.05）。 5Western Blot觀察TMEM16A在各組心肌均有表達（, n=3)。與對照組小鼠相比，輕度炎癥組心肌TMEM16A表達升高，但無統(tǒng)計學意義（P0.05）；SIRS組TMEM16A的表達明顯升高，有統(tǒng)計學意義（P0.05） 結論： 1小鼠腹腔注射脂多糖（10mg/kg）可成功建立SIRS模型。 2全身炎癥反應時，血清cTnI、CK-MB及BNP濃度升高，表明存在心肌細胞損傷。輕度炎癥時血清cTnI及CK-MB濃度升高，但血清BNP濃度變化無統(tǒng)計學意義，表明輕度炎癥時也可能存在心肌細胞損傷。 3TMEM16A在心肌組織有所表達。在全身炎癥反應綜合征時，心肌組織TMEM16A的表達明顯升高。說明鈣激活氯離子通道在可能與全身炎癥反應時患者心肌損傷有關。全身炎癥反應綜合征時鈣激活氯離子通道表達異常是否與可能出現(xiàn)的心律失常有關有待進一步研究。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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本文編號：1252376