本文關(guān)鍵詞：胍丁胺對膿毒癥小鼠的保護作用及分子機制研究

  更多相關(guān)文章： 胍丁胺 脂多糖 細(xì)胞因子 NF-κB

【摘要】：目的： 探討胍丁胺對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥的保護作用及相關(guān)分子機制。 方法： 1、將60只成年C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組（20只，腹腔注射磷酸鹽緩沖液）、LPS模型組（20只，腹腔注射LPS10mg/kg）和AGM治療組（20只，腹腔注射LPS10mg/kg和AGM200mg/kg），各組于制模后6h和24h分別處死10只小鼠，采集血和肝、肺、腸臟器組織標(biāo)本。處死小鼠前，持續(xù)觀察小鼠生命狀態(tài)。 2、ELISA檢測血清及臟器組織勻漿中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）及白細(xì)胞介素-6（IL-6）的含量，全自動生化分析儀測定血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBil）水平，蘇木精-伊紅染色觀察各臟器組織病理學(xué)改變，TUNEL凋亡試劑盒檢測肺和小腸組織凋亡情況。 3、體外培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞，使用胍丁胺治療經(jīng)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞，在不同時間點收集細(xì)胞蛋白和細(xì)胞培養(yǎng)上清。ELISA檢測細(xì)胞上清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，Western Blot檢測胞漿p-IκB、IκB、p-p65、p65，ELISA檢測胞核NF-κB p65的DNA結(jié)合活力。 結(jié)果： 1、LPS注射6h各組小鼠均表現(xiàn)為精神萎靡、蜷縮少動、禁飲食水，但其中AGM治療組小鼠精神和活動明顯好于LPS模型組。AGM治療后能有效降低LPS所致小鼠外周血中炎癥因子TNF-α（ng/ml:296.3±42.5比627.2±81.3，P0.05）、IL-1β（ng/ml:109±12.3比264±18.8，P0.05）、IL-6（μg/ml:11.4±1.9比23.6±2.5，P0.05）和ALT（U/L:107.9±8.5比189.9±13.6，P0.05）、AST（U/L:347.4±24.9比716.8±60.4，，P0.05）、TBIL（μmol/L:8.3±1.9比10.6±2.5，P0.05）的含量，減少肝臟組織勻漿中TNF-α（ng/g:287.4±32.5比461±31.4，P0.05）、IL-1β（pg/g:146±13.5比351±28.7，P0.05）和NF-κB p65入核蛋白水平（NF-κB/核內(nèi)參灰度值比值：0.54比0.85，P0.05）。 2、LPS注射后24h肝、肺、小腸出現(xiàn)明顯病理改變，組織細(xì)胞腫脹、壞死、充血和炎性細(xì)胞浸潤，但AGM治療后各臟器組織損傷明顯緩解。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示LPS炎癥組小鼠肺和小腸組織發(fā)生明顯的凋亡，核固縮、核碎裂、核溶解，并且出現(xiàn)大量的DNA斷裂片段，AGM治療組臟器組織凋亡明顯減少。 3、體外實驗中，炎性巨噬細(xì)胞在接受胍丁胺處理后，表達TNF-α、IL-1β和IL-6明顯減少，IκB磷酸化受到抑制，p-p65磷酸化和入核也明顯受抑，NF-κB p65的DNA結(jié)合活力明顯減弱。 結(jié)論： 1、AGM能夠抑制LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠血清和臟器炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6的產(chǎn)生，表明AGM具有全身抗炎作用。 2、AGM能夠減少LPS誘導(dǎo)的膿毒癥時ALT、AST和TBil的產(chǎn)生，減輕肝、肺和小腸組織炎癥損傷，抑制臟器組織細(xì)胞凋亡，表明AGM對膿毒癥小鼠臟器有明顯保護作用。 3、胍丁胺能減少炎性巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表達，抑制IκB的磷酸化，阻止p-p65的磷酸化和入核，并減弱NF-κB p65的DNA結(jié)合活力，表明胍丁胺能抑制炎性巨噬細(xì)胞NF-κB信號通路的活化。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

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本文編號：1239582